一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法
2023-04-26 01:45:51 2
專利名稱：一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種細菌的檢測技術，特別是氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法。
背景技術：
隨著現代分子遺傳學的發展，氣單胞菌屬(Aeromonas)到目前已擴展到包括嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophil)、豚鼠氣單胞菌(Aeromonas caviae)、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)、殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)、中間氣單胞菌(Aeromonas media)、維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)、簡氏氣單胞菌 (Aeromonas jandaei)等14個氣單胞菌表型種和16個基因種,其模式種為嗜水氣單胞菌，豚鼠氣單胞菌是極常見的氣單胞菌。氣單胞菌屬細菌在臨床和環境中都分布很廣,水、土壤、空氣中都有分布。由氣單胞菌屬細菌引起的水產養殖動物疾病種類繁多，不僅給水產養殖業帶來嚴重的經濟損失，還可通過水產動物和水產品感染人畜，導致人畜腹瀉和食物中毒，影響人類健康。因此，建立氣單胞菌屬細菌的檢測方法，對於監控該屬病原的繁殖、疾病發生和流行以及疾病的及時防治都具有十分重要的意義。傳統的生理生化檢測方法可以準確鑑定待檢菌株，但是操作複雜，成本高，耗時長。潘曉藝等，「氣單胞菌和嗜水氣單胞菌雙重PCR檢測方法的建立」，華中農業大學學報，2011，30(6) : 759-763.公開的PCR檢測可以克服生理生化檢測方法的缺陷，但該方法沒有提供可供參考和借鑑的檢測靈敏度，所使用的兩對引物其檢測靈敏度是否一致也不能被證明，因此在病原診斷和疾病流行學研究方面存在缺陷。
發明內容
為了解決上述問題，本發明提供了一種新的氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒和檢測方法。本發明氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒，包含序列如SEQ ID NO 2所示的引物對1，擴增來自氣單胞菌屬細菌的基因。本發明氣單胞菌屬細菌的檢測方法，包括如下步驟a,提取樣本DNA :提取待檢樣本中的DNA ；b，基因擴增用權利要求I所述的試劑盒對待檢樣本中的DNA進行擴增；C，結果檢測對DNA擴增結果進行檢測。其中，步驟a所述的樣本為養殖水體。本發明還提供了 SEQ ID NO :1 2所示的寡核苷酸序列的用途，其用於擴增或檢測來自氣單胞菌屬細菌的基因。本發明提供的試劑盒和方法可以擴增氣單胞菌屬細菌的甘油磷脂膽固醇醯基轉移酶基因的基因片段，特異性強、靈敏度高、耗時短，用於快速檢測養殖水體，可及時有效地預防魚病的發生，具有良好的應用前景。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實施例。凡基於本發明權利要求書記載的內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
圖I本發明引物擴增氣單胞菌的電泳圖譜。I :空白對照；2 :嗜水氣單胞菌；3 -M鼠氣單胞菌；M DNA maker I ；
圖216S rDNA 特異性引物擴增結果圖譜。MiDNAmaker I ；1:60°C ；2:65°C ；3:68°C ；4 :空白對照；圖3特異性檢測結果。O :空白對照；1 :無乳鏈球菌；2 :蠟狀芽孢桿菌；3 :螢光假單胞菌；4 :海豚鏈球菌；5 :愛德華氏菌；6 =DNAmaker I ；7 :柱狀黃桿菌；8 :鼠傷寒沙門氏菌；9 :河流弧菌；10 :糞腸球菌；11 :金黃色葡萄球菌；12 :嗜水氣單胞菌；13 :豚鼠氣單胞菌；圖4實際樣品的檢測。I :陽性對照；2 :陰性對照；3 :水樣；4 :尾鰭；5 :觸;6_7 :患病組織塊；M DNA maker I ；圖5患病組織的擴增產物測序圖。
具體實施例方式一、實驗材料和儀器I、試驗菌株試驗菌種表
權利要求
1.一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒，其特徵在於包含序列如SEQ IDNO :廣2所示的引物對1，擴增來自氣單胞菌屬細菌的基因。
2.一種氣單胞菌屬細菌的檢測方法，其特徵在於包括如下步驟 a，提取樣本DNA :提取待檢樣本中的DNA ； b，基因擴增用權利要求I所述的試劑盒對待檢樣本中的DNA進行擴增； c，結果檢測對DNA擴增結果進行檢測。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於步驟a所述的樣本為養殖水體。
4.SEQ ID NO :1 2所示的寡核苷酸序列的用途，其特徵在於用於擴增或檢測來自氣單胞菌屬細菌的基因。
全文摘要
本發明公開了一種氣單胞菌屬細菌的檢測試劑盒，包含序列如SEQ IDNO1~2所示的引物對1，擴增來自氣單胞菌屬細菌的基因。本發明還公開了一種氣單胞菌屬細菌的檢測方法。本發明檢測試劑盒和檢測方法可以準確、有效的檢測氣單胞菌屬細菌，且特異性強、靈敏度高、耗時短，檢測快速，可以用於養殖水體的快速檢測和預測，預防魚病的發生，提高經濟效益。
文檔編號C12N15/54GK102925578SQ201210460319
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月15日 優先權日2012年11月15日
發明者肖丹, 黃冠軍, 劉天強, 劉衍鵬, 李茂 申請人:通威股份有限公司