一種極耐熱糖苷酶基因及其可溶性表達與應用方法

2023-05-05 04:53:41

專利名稱:一種極耐熱糖苷酶基因及其可溶性表達與應用方法
技術領域：
本發明屬於基因工程及生物質利用技術領域：
，尤其涉及一種極耐熱糖苷酶基因及其可溶性表達與應用方法。
背景技術：
人參Panax ginseng是亞洲傳統的名貴中藥材,具有生物活性廣泛,藥理作用獨特等特點，但其化學成分複雜。隨著分析技術的革新，人參主要的化學成分得到了進一步的明確。研究發現，人參皂苷是人參主要的生物活性物質，到目前為止，已經分離鑑定40餘種人參皂苷單體，其中5種主要皂苷(人參皂苷Rbl、Rb2、Re和Rgl)佔總皂苷的80%以上，其它的阜苷(Rd、Rg3、Rh2和Compound K等)含量很低,稱為稀有阜苷(Applied MicrobiologyandBiotechnology，2012，94:673-682)。由於對單體進行生物活性研究，易於闡明其確切的藥理作用，發現活性較強的化合物，因此越來越多的學者對人參皂苷單體進行了生理功能的研究。
人參皂苷Rd藥理作用廣泛，有些藥理作用與其它人參皂苷類似，但是Rd具有許多獨特的藥理作用，如保護心腦血管、清楚自由基、促進T細胞增殖、提高天然殺傷細胞(NK)活性、保護神經系統等藥理作用(中草藥2009，40 (5):832-836)。但是，由於人參皂苷Rd在人參屬植物中含量很低，而且結構複雜，化學合成至今還沒有成功，目前只能通過從人參等藥用植物中提取，但其成本太高，從而限制了 Rd的進一步研究和應用。而主要皂苷Rbl和Re與Rd的差別僅僅是多一個葡萄糖基或者阿拉伯糖基，因此通過對人參皂苷Rbl和Re轉化得到Rd是可行的方法。
對於人參皂苷Rbl的轉化，有化學轉化法和生物轉化法。化學轉化法因其反應劇烈、選擇性差、副產物多等缺點而不被採用。生物轉化具有反應條件溫和，特異性好等特點，而受到青睞。目前人參皂苷Rbl生物轉化生產Rd主要有微生物轉化法和酶轉化法，主要存在以下缺點:(I)大多數微生物或酶都來源於常溫，溫度穩定性差；(2)高濃度的底物對轉化有抑制作用；(3)產物葡萄糖對轉化的酶有抑制作用；(4)轉化的專一性不強；(5)轉化周期長；(6)生產成本過高。Kim等從70多株好氧菌中篩選到12株菌可以將人參皂苷Rbl轉化成人參皂苷Rd，底物濃度為0.47g/L ;而能將人參皂苷Rbl較完全轉化的3株細菌，均有其它皂苷的副產物(The Journal of Micobiology，2005，43:456-462)。呂國忠等人發現一種人參內生灰綠梨頭黴菌能專一性的轉化Rbl成人參皂苷Rd，但轉化周期較長，且轉化率不高(中國發明專利，專利公開號:CN 102080048 A)。因此，尋找高效、低成本的生物酶轉化人參皂苷Rbl生產人參皂苷Rd具有重要的意義。

發明內容
本發明提供了一種極耐熱糖苷酶基因及其可溶性表達與應用，旨在解決目前無法提供用於人參皂苷Rbl生產 人參皂苷Rd的高效、低成本生物酶的問題。
本發明的目的在於提供一種極耐熱糖苷酶基因，該極耐熱糖苷酶基因的DNA序列如SEQ NO:1所示。
進一步，該極耐熱糖苷酶基因的獲取過程為:
參照NCBI上已發表的T.thermarum DSM 5069極耐熱糖苷酶的基因序列設計引物，登錄號:YP 004660190.1，以提取的T.thermarum DSM 5069基因組DNA為模板進行PCR擴增，獲得極耐熱糖苷酶基因全序列。
進一步，該極耐熱糖苷酶基因克隆到pET_28a載體，可得到包含極耐熱糖苷酶基因核苷酸序列的重組質粒pET-28a-bgl。
進一步，所述重組質粒pET-28a-bgl的製備方法為:
步驟一，以Thermotoga thermarum DSM 5069的基因組為模板，以Pl和P2為引物進行PCR擴增，得到極耐熱糖苷酶基因的PCR擴增產物，引物為:
Pl:CCCCCATGGGTTTTCCAAAGGATTTTCT Gl TCGG CC, CG AGCk TGGC
G^TiX AAGTTGAAATGGGATATG,下劃線表示Nco I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位點；
P2: CCCCTCGAGCAT OC6CCAGkT]T CGTA TG G GCTT TT CA GGTAGTTGTG
AAAGlGCCGTTGTCCCTTCTTTG,下劃線表示Xho I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位點；
步驟二，將步驟一所得PCR擴增產物和pET_28a分別用Nco I和Xho I雙酶切，並分別割膠回收，16°C過夜連接；將連接產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，篩選陽性克隆，進行序列分析；挑選序列正確的克隆提取質粒，獲得含有極耐熱糖苷酶基因的重組質粒pET_28a_bgl。
進一步，極耐熱糖苷酶的可溶性表達的實現方法為:
將重組質粒pET-28a_bgl轉化大腸桿菌JM109 (DE3)，挑單菌落到搖瓶培養基，培養和誘導的溫度為37°C，不加入誘導劑IPTG，12h後收集細胞，超聲波破細胞，並利用Ni親和層析柱進行重組酶的純化，最終得到極耐糖苷酶的純酶。
進一步，極耐熱糖苷酶的定性為:在95°C、pH 4.8的條件下酶活最高，該酶在溫度70-100°C、pH 4.8-8.0的範圍內，均保持較高的酶活，該酶對葡萄糖的耐糖係數Ki為1.5mol/L。
進一步，極耐熱糖苷酶在轉化人參皂苷Rb I為Rd中的應用。
進一步，該極耐熱糖苷酶應用於對人參皂苷Rbl的轉化時，該酶lU/mL在90°C、pH
5.2、5%甲醇條件下30min，可將99%人參皂苷Rbl轉化為Rd。
本發明公開了一種極耐熱糖苷酶基因在大腸桿菌中的可溶性表達與應用，該極耐熱糖苷酶基因的DNA序列如SEQ NO:1所示，通過密碼子的替換和誘導條件的改變，實現了該酶在大腸桿菌中可溶性表達，酶活達到13U/mL，該糖苷酶具有極強的耐熱性能和特異性降解人參皂苷Rbl為Rd的能力，該酶在90°C、pH 4.8的條件下酶活最高，在溫度70-100°C、pH 4.8-8.0的範圍內，均保持較高的酶活，該酶對葡萄糖的耐糖係數Ki為1.5mol/L，該酶lU/mL在90°C、pH 5.2、5%甲醇條件下30min可將99%人參皂苷Rbl轉化為人參皂苷Rd，本發明提供的極耐熱糖苷酶性質優異， 可應用於人參皂苷酶法轉化。

[0023]圖1是本發明實施例提供的極耐熱糖苷酶可溶性表達的SDS-PAGE蛋白電泳圖，I為蛋白 marker ;2，5，8，11，14，17 為全細胞蛋白；3，6，9，12，15，18 為沉澱蛋白；4，7，10，13，16，19為可溶性蛋白；
圖2是本發明實施例提供的極耐糖苷酶純蛋白的SDS-PAGE蛋白電泳圖，I為蛋白marker ;2為大腸桿菌JM109(DE3)的全細胞蛋白；3為大腸桿菌JM109 (DE3)帶重組質粒pET-28a-bgl的全細胞蛋白；4為極耐熱糖苷酶的純酶；
圖3是本發明實施例提供的溫度和pH對極耐熱糖苷酶活性的影響；
圖4是本發明實施例提供的極耐熱糖苷酶對人參皂苷Rbl的轉化薄層圖。
具體實施方式
為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發明進行進一步的詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，並不用於限定發明。
本發明的目的在於提供一種極耐熱糖苷酶基因，該極耐熱糖苷酶基因的DNA序列如SEQ NO:1所示。
在本發明實施例中，該極耐熱糖苷酶基因的獲取過程為:
參照NCBI上已發表的T.thermarum DSM 5069極耐熱糖苷酶的基因序列設計引物，登錄號:γρ 004660190.1，以提取的T.thermarum DSM 5069基因組DNA為模板進行PCR擴增，獲得極耐熱糖苷酶基因全序列。
在本發明實施例中，該極耐熱糖苷酶基因克隆到pET_28a載體，可得到包含極耐熱糖苷酶基因核苷酸序列的重組質粒pET-28a-bgl。
在本發明實施例中，重組質粒pET-28a_bgl的製備方法為:
步驟一，以Thermotoga thermarum DSM 5069的基因組為模板，以Pl和P2為引物進行PCR擴增，得到極耐熱糖苷酶基因的PCR擴增產物，引物為:
P1: CCCCCATGGGTTTTCCAAAGGATTTTCT Gl TCGG CG CG A GCk TGGC O}
G CT T AAGTTGAAATGGGATATG,下劃線表示Nco I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位點；
P2: CCCCTCGAGCAT 6C 6C CA β T TT CGTA TG G GCTT TT Ck GGTAGTTGTG
AAAGCGlGCCGTTGTCCCTTCTTTG,下劃線表示Xho I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位點；
步驟二，將步驟一所得PCR擴增產物和pET_28a分別用Nco I和Xho I雙酶切，並分別割膠回收，16°C過夜連接；將連接產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，篩選陽性克隆，進行序列分析；挑選序列正確的克隆提取質粒，獲得含有極耐熱糖苷酶基因的重組質粒pET_28a_bgl。
在本發明實施例中，極耐熱糖苷酶的可溶性表達的實現方法為:
將重組質粒pET-28a_bgl轉化大腸桿菌JM109 (DE3)，挑單菌落到搖瓶培養基，培養和誘導的溫度為37°C，不加入誘導劑IPTG，12h後收集細胞，超聲波破細胞，並利用Ni親和層析柱進行重組酶的純化，最終得到極耐糖苷酶的純酶。
在本發明實施例中，極耐熱糖苷酶的定性為:在95°C、pH 4.8的條件下酶活最高，該酶在溫度70-100°C、pH 4.8-8.0的範圍內，均保持較高的酶活，該酶對葡萄糖的耐糖係數 Ki 為 1.5mol/L。
在本發明實施例中，極耐熱糖苷酶在轉化人參皂苷Rbl為Rd中的應用。
在本發明實施例中，該極耐熱糖苷酶應用於對人參皂苷Rbl的轉化時，該酶lU/mL在90°C、pH 5.2、5%甲醇條件下30min，可將99%人參皂苷Rbl轉化為Rd。
下面結合附圖及具體實施例對本發明的應用原理作進一步描述。
實施例1:重組質粒pET-28a_bgl的構建
1.1Thermotoga thermarum DSM 5069 的培養
T.thermarum DSM 5069 購於 DSMZ 菌種保藏中心(www.dsmz.de)編號為 5069。其培養基配方為:5g/L可溶性澱粉，lg/L酵母粉，1.5g/L KH2PO4,4.2g/L Na2HPO4X 12H20，3.4g/L NaCl, lg/L MgSO4X 7H20，0.76g/L EDTA，lmL/L 微量元素，0.5g/L Na2S.9H20，0.5g/L Cysteine HCl, lmg/L刃天青,調pH為7.0,煮沸衝氮氣，除去氧氣後,培養基在無氧條件下裝入厭氧瓶滅菌。微量元素 (1000X)配方:FeCl32.0g/L ；H3B030.05g/L ；ZnCl20.05g/L ；CuCl2.2H20 0.03g/L ；MnCl2.4H20 0.05g/L ； (NH4)2MoO40.05g/L ；A1KS04.2H200.05g/L。)用注射器按照0.5%接種量接種，82°C靜止培養24h，收集細胞。
1.2基因組DNA的提取
(I)靜置培養 T.thermarum DSM 5069 24h,取 30mL 菌液 4，OOOg 離心 IOmin 收集細胞。
(2)用9.5mL TE緩衝液重懸菌體，加入0.5mL 10%十二烷基硫酸鈉(SDS)和50 μ L蛋白酶K (20mg/mL)，混合均勻，37 °C保溫Ih。
(3)加入 1.8mL 5mol/L NaCl，1.5mL 十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)/NaCl，混勻，65°C溫育 20min。
(4)加入等體積氯仿/異戊醇，混勻，6，OOOg離心lOmin。
(5)為防止剪切力造成基因組DNA斷裂，用粗口吸管將上清轉入另一離心管中，加入等體積酹/氯仿/異戍醇混勻，6，OOOg離心lOmin。
(6)另一離心管中，加入0.6倍體積異丙醇，輕輕晃動至白色絲狀DNA沉澱清晰可見。
(7)用吸管將DNA纏繞其上，在70%酒精中清洗。
(8)用無菌牙籤將DNA從吸管上刮下，轉入1.5mL離心管中。
(9)室溫下風乾，加500 μ L TE緩衝液溶解。
(10)取50 μ L用核酸蛋白檢測儀檢測DNA濃度。
1.3重組質粒pET-28a_bgl的構建
按照已知的T.thermarum DSM 5069極耐熱糖苷酶基因(登錄號:YP_004660190.1)設計引物，引物由上海生物工程有限公司合成。Pl:CCCCCATGGGTTTTCCAAAGGATTTTCTGTTCGGCGCGAGCATGGCCGGCTTCCAAGTTGAAATGGGATATG,下劃線表示 Nco I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位點；P2:CCCCTCGAGCATGCGCCAGATTTCGTATGGGCTTTTCA
GGTAGTTGTGAAAGCGTGCCGTTGTCCCTTCTTTG,下劃線表示 Xho I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位點，密碼子的替換按照大腸桿菌優勢密碼子進行替換原有的非優勢密碼子；以提取的T.thermarum DSM 5069的基因組DNA為模板，用合成的引物進行PCR擴增，擴增的條件是95°C, 5min ;暫停計時,加Pyrobest聚合酶,加40 μ L石臘油密封；35次循環(94°C, 50s ；51°C,90s ；72°C,1.5min) ；72°C, IOmin ;反應停止，4°C保溫。通過凝膠回收試劑盒對PCR擴增產物進行純化。得到T.thermarum DSM 5069極耐熱糖苷酶基因。
得到thermarum DSM 5069極耐熱糖苷酶基因和pET_28a分別用Nco I和Xho I進行雙酶切，並分別割膠回收，濃縮後16°C連接過夜，將連接產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，篩選陽性克隆，進行序列分析；挑選序列正確的克隆提取質粒，獲得含有極耐熱糖苷酶基因的重組質粒pET-28a-bgl。
實施例2:重組極耐熱糖苷酶的可溶性表達及純化
2.1重組極耐熱糖苷酶的可溶性表達
將重組質粒pET-28a_bgl轉化大腸桿菌JM109 (DE3)宿主菌(Novagen)，在含有卡那黴素(50 μ g/mL)的LB平板(LB培養基:胰蛋白腖10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 5g/L，瓊脂15g/L)上經過37°C培養過夜，挑轉化子到200mL的LB培養基中(50 μ g/mL卡那黴素)37°C，200rpm振蕩培養至OD6tltl為0.6時，加入終濃度分別為0-0.5mM異丙基β -D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導劑，37°C、30°C或者25°C誘導培養6h，用高速冷凍離心機將培養液在4°C下，以13，OOOrpm離心15min，收集菌體，去上清加入無菌水，超聲波破碎細胞，離心分別收集上清和沉澱，上清為可溶性蛋白，沉澱為不溶性蛋白(包涵體)。結果如圖1所示，帶有重組質粒pET-28a-bgl的大腸桿菌表達極耐熱糖苷酶的最佳誘導條件是37°C，不加入任何誘導劑，在此條件下產生的可溶性蛋白最多，酶活達到13U/mL。而加入IPTG誘導，產生的重組極耐熱糖苷酶幾乎都是包涵體(圖1)。
2.2重組極耐熱糖苷酶的純化
將重組質粒pET-28a_bgl轉化大腸桿菌JM109 (DE3)宿主菌(Novagen)，在含有卡那黴素(50 μ g/mL)的LB平板(LB培養基:胰蛋白腖10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl 5g/L，瓊脂15g/L)上經過37°C培養過夜，挑轉化子到200mL的LB培養基中(50 μ g/mL卡那黴素)37°C，200rpm振蕩培養12h，收集細胞。由於重組質粒pET-28a_bgl中含有His-tag標籤，通過His.BindPurification Kit (Novagen)進行純化,得到純化的重組酶。具體操作過程:
A.樣品的處理
(I)將洗漆過的菌體,用IXBinding Buffer 8mL重懸,超聲波破壁。
(2)破壁後，13，OOOg離心30min，取上清即為樣品。
B.處理柱子
(I)取ImL填料裝柱。
(2)用3mL的無菌水洗柱子。
(3)用 5mL 的 IXCharge Buffer 洗柱子。
(4)用 3mL 的 IXBinding Buffer 洗柱子。
C.上樣
(I)將樣品加入柱子，控制流速約每分鐘6滴。
(2)用3mL I XBinding Buffer洗柱子，除去未結合的蛋白質。
(3)用4mL含有20mM咪唑的洗脫液洗柱子，除去雜蛋白。
(4)用80mmol/L咪唑的洗脫液洗柱子，將目的蛋白洗脫下來。[0081](5)用 4mL I X Strip Buffer 洗柱子。
通過此過程得到純化的重組極耐熱糖苷酶，純酶的純度鑑定採用SDS-PAGE方法進行，結果如圖2所示。[0083]實施例3:重組極耐熱糖苷酶的定性
3.1酶活測定
反應體系200 μ L，20 μ L 10mmol/L 人參皂苷 Rbl 中加入 100 μ L 100mmol/L 檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液(pH 6.0)和適量的水，先在90°C孵育5min，再加入10 μ L酶液(稀釋到合適的倍數)反應lOmin。反應結束後立刻蒸乾並加入甲醇，用TLC或者HPLC測定Rd的量。TLC和 HPLC 的條件按照文獻進行(The Journal ofMicobiology，2005，43:456-462)。酶活力單位⑶定義為:在測定條件下，每分鐘產生I μ mol人參皂苷Rd所用的酶量為I個酶活力單位。
3.2最適反應溫度的測定
在50-100°C範圍內，每隔5°C，分別測定酶活。緩衝為50mmol/L檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液，PH 4.8，發現極耐熱糖苷酶的最適反應溫度為90°C (圖3b)，較高的反應溫度可以使底物皂苷Rbl在水中的溶解度增加。
3.3最適反應pH的測定
在不同的口!1(4.0-8.0，50臟01/1檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液)條件下，90°C分別測定酶活，發現極耐熱糖苷酶的最適反應pH為4.8 (圖3a)。
3.4溫度穩定性的測定
在pH 6.0下，使酶在85°〇，901:，951:溫度下分別保溫不同的時間(0,20,40,60,90，120min)，再測定相對酶活，以未保溫(4°C保存)的酶樣活性為100 %，發現極耐熱糖苷酶在90°C保溫2h，殘存酶活還有50% (圖3d)，熱穩定性越好，酶的有效催化時間就越長。
3.5ρΗ穩定性的測定
將純化的極耐熱糖苷酶在不同的pH(4.0-8.0，50mmol/L檸檬酸-磷酸氫二鈉緩衝液)下80°C處理lh，與不保溫酶的酶活相比，發現極耐熱糖苷酶在4.4-8.0都很穩定(圖3c)。
3.6葡萄糖和甲醇對極耐熱糖苷酶的活性的影響
在反應體系中，加入不同濃度的葡萄糖濃度(0mmol/L,200mmol/L,400mmol/L,600mmol/L, 800mmol/L, 1000mmol/L, 1500mmol/L, 2000mmol/L),發現葡萄糖濃度不大於400mmol/L，對極耐熱糖苷酶活性有激活作用，隨著這葡萄糖濃度的提高，緩慢抑制該酶的活性，但是即使葡萄糖濃度達到1500mmol/L時，極耐熱糖苷酶仍保持50%的活力，耐糖係數Ki的定義為:糖苷酶活性被葡萄糖抑制50%時，反應體系中葡萄糖的濃度。
在反應體系中，加入不同濃度的乙醇或甲醇(0%，5%，10%，20%，30% v/v)，發現甲醇對極耐熱糖苷酶有激活作用，而乙醇濃度不大於10%時對酶活沒有影響(表-1)。
表-1.有機溶劑對酶活的影響
權利要求
1.一種極耐熱糖苷酶基因，其特徵在於，該極耐熱糖苷酶基因的獲取過程為:參照NCBI上已發表的T.thermarum DSM 5069極耐熱糖苷酶的基因序列設計引物，登錄號:YP_004660190.1，以提取的T.thermarum DSM 5069基因組DNA為模板進行PCR擴增，獲得極耐熱糖苷酶基因全序列； 該極耐熱糖苷酶基因克隆到pET-28a載體，可得到包含極耐熱糖苷酶基因核苷酸序列的重組質粒pET-28a_bgl。
2.如權利要求
1所述的極耐熱糖苷酶基因，其特徵在於，所述重組質粒pET-28a-bgl的製備方法為: 步驟一，以Thermotoga thermarum DSM 5069的基因組為模板，以Pl和P2為引物進行PCR擴增，得到極耐熱糖苷酶基因的PCR擴增產物，引物為:
Pl:CCCCCATGGGTTTTCCAAAGGATTTTCT Gl TCGG CG AGCk TGGC Co
G CT T O: AAGTTGAAATGGGATATG，下劃線表示Nco I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位佔.P2:CCCCTCGAGCAT OC OC CACGTA TG G GCTl TT CA GGTAGTTGTG AAAOCG/GCCGTTGTCCCTTCTTTG,下劃線表示Xho I，斜體加粗表示優勢密碼子替換的位佔.步驟二，將步驟一所得PCR擴增產物和pET_28a分別用Nco I和Xho I雙酶切，並分別割膠回收，16°C過夜連接； 將連接產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，篩選陽性克隆，進行序列分析； 挑選序列正確的克隆提取質粒，獲得含有極耐熱糖苷酶基因的重組質粒pET-28a-bgl。
3.如權利要求
1所述的極耐熱糖苷酶基因，其特徵在於，極耐熱糖苷酶的可溶性表達的實現方法為: 將重組質粒pET-28a-bgl轉化大腸桿菌JM109 (DE3)，挑單菌落到搖瓶培養基，培養和誘導的溫度為37°C，不加入誘導劑IPTG，12h後收集細胞，超聲波破細胞，並利用Ni親和層析柱進行重組酶的純化，最終得到極耐糖苷酶的純酶。
4.如權利要求
1所述的極耐熱糖苷酶基因，其特徵在於，極耐熱糖苷酶的定性為:在95°C、pH 4.8的條件下酶活最高，該酶在溫度70-100°C、pH 4.8-8.0的範圍內，均保持較高的酶活，該酶對葡萄糖的耐糖係數Ki為1.5mol/L。
5.權利要求
1所述的極耐熱糖苷酶在轉化人參皂苷Rbl為Rd中的應用，其特徵在於，該極耐熱糖苷酶應用於對人參皂苷Rbl的轉化時，該酶lU/mL在90°C、pH 5.2、5%甲醇條件下30min，可將99%人參皂苷Rbl轉化為Rd。
專利摘要
本發明公開了一種極耐熱糖苷酶基因在大腸桿菌中的可溶性表達與應用，該極耐熱糖苷酶基因的DNA序列SEQ NO1通過密碼子的替換和誘導條件的改變，實現了該酶在大腸桿菌中可溶性表達，酶活達到13U/mL，該糖苷酶具有極強的耐熱性能和特異性降解人參皂苷Rb1為Rd的能力，該酶在90℃、pH4.8的條件下酶活最高，在溫度70-100℃、pH4.8-8.0的範圍內，均保持較高的酶活，該酶對葡萄糖的耐糖係數Ki為1.5mol/L，該酶1U/mL在90℃、pH5.2、5％甲醇條件下30min可將99％人參皂苷Rb1轉化為人參皂苷Rd，該極耐熱糖苷酶性質優異，可應用於苷元類物質的酶法轉化。
文檔編號C12R1/19GKCN103146723SQ201210549479
公開日2013年6月12日 申請日期2012年12月18日
發明者趙林果, 裴建軍, 曹福亮, 王飛, 汪貴斌 申請人:南京林業大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan