一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法
2023-05-13 14:04:16
一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法
【專利摘要】本發明公開了一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，包括以下步驟：細胞載體的製備、其它組分的製備、對表達抗胰島素抗體體陽性血清進行篩選後製備成陽性對照液、製備試劑盒，所述試劑盒包括用於表達抗胰島素抗體的細胞載體、陰性對照液、陽性對照液、酶底物、稀釋液、終止液；最後，稀釋後的陽性對照液、用於實驗的人體血清中抗胰島素抗體的載體表達、分析。本發明通過對陽性對照液進行稀釋，再進行數據選擇，選擇數據分散較為集中的數值範圍進行細胞載體的表達，克服了現有試劑盒在檢測人血清中抗胰島素抗體的含量時，因每個批次的陽性對照抗體不穩定導致結果不穩定的問題。
【專利說明】一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及抗胰島素抗體領域，具體地，涉及一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法。
【背景技術】
[0002]抗胰島素抗體:胰島素抗體的出現有兩種情況，一種出現於接受外源胰島素治療的病人，主要和胰島素製劑的純度有關係，另一種是出現於從未接受胰島素治療的病人，稱為胰島素自身抗體，胰島素抗體對糖尿病和低血糖的診斷、鑑別診斷及治療具有分廠非常重要的意義。因此，檢測人體血清中抗胰島素抗體至關重要，現有的人體血清中抗胰島素抗體的檢測都是採用試劑盒進行檢測，以試劑盒的方式進行人體血清中抗胰島素的檢測方便有效，試劑盒具體是指在同一個盒子裡盛放有用於檢測人體血清蛋白中抗胰島素抗體的所有試劑和對照液，包括載體、抗原或抗體、酶底物、陰性對照品和陽性對照品、結合物以及標本的稀釋液、洗滌液、酶反應終止液。試劑盒的生產正是為了使實驗人員能夠擺脫繁重的試劑配置優化過程，所以試劑盒中一般配備與相應的使用說明書，用戶按照說明書不需要或只需少量的優化即可得到滿意的結果。目前，在檢測人血清中抗胰島素抗體的檢測試劑盒中，陽性對照抗體多數都來自病人的陽性對照血清,這樣,每個批次的試劑盒，陽性對照或許不同，導致每個批次中陽性對照抗體不穩定的問題。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，以克服現有試劑盒在檢測人血清中抗胰島素抗體的含量時，因每個批次的陽性對照抗體不穩定導致結果不穩定的問題。
[0004]本發明解決上述問題所採用的技術方案是:一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，包括以下步驟:
首先，細胞載體的製備:將表達有抗抗胰島素抗體的細胞載體活化後，在4°C培育5小時，用PBS緩衝液洗滌、離心、棄上清液，加入一定濃度的血清蛋白封閉液，培育30分鐘，完成細胞載體的製備；
其次，其它組分的製備:陰性對照血清是健康人的血清，陽性對照血清為已經確診的表達抗胰島素抗體體陽性血清，濃縮樣本稀釋液中含有PBS、哺乳動物血清蛋白；
再次，對表達抗胰島素抗體體陽性血清進行篩選後製備成陽性對照液；
然後，製備試劑盒:所述試劑盒包括用於表達抗胰島素抗體的細胞載體、陰性對照液、陽性對照液、酶底物、稀釋液、終止液；
最後，稀釋後的陽性對照液、用於實驗的人體血清中抗胰島素抗體的載體表達；結合實驗數據對人體血清中抗胰島素抗體的含量進行分析。
[0005]試劑盒的檢測方式使得檢測的操作簡單方便，現有的試劑盒中的陽性對照液一般是來自病人的血清，沒有經過篩選直接進行載體表達，容易導致不同批次的血清中抗胰島素抗體的含量的不穩定，進而導致檢測人體血清中抗胰島素抗體的的實驗結果不穩定，使得實驗數據不可信；本發明通過在陽性對照液進行載體表達之前，先對陽性對照液進行篩選，即從來自病人的血清中選擇抗胰島素抗體含量相對集中區域數值範圍內的陽性對照液作為用於試劑盒的陽性對照液，經選擇後的陽性對照液在進行人體血清中抗胰島素抗體的檢測的實驗數據比較穩定，克服現有試劑盒在檢測人血清中抗胰島素抗體的含量時，因每個批次的陽性對照抗體不穩定導致結果不穩定的問題。
[0006]進一步地，陽性對照物來自病人的陽性對照血清的抗胰島素抗體。
[0007]進一步地，陽性對照液在進行載體表達之前進行純化處理。經純化後的陽性對照液具有更好的表達性能，進一步地提聞了載體表達的穩定性。
[0008]進一步地，載體為哺乳動物細胞。哺乳動物細胞與人體細胞環境具有較高的相似度，且哺乳動物細胞比價容易獲得，能夠降低實驗成本。
[0009]綜上，本發明的有益效果是:
1、本發明通過在陽性對照液進行載體表達之前，先對陽性對照液進行篩選，即從來自病人的血清中選擇抗胰島素抗體含量相對集中區域數值範圍內的陽性對照液作為用於試劑盒的陽性對照液，經選擇後的陽性對照液在進行人體血清中抗胰島素抗體的檢測的實驗數據比較穩定，克服現有試劑盒在檢測人血清中抗胰島素抗體的含量時，因每個批次的陽性對照抗體不穩定導致結果不穩定的問題。
[0010]2、本發明通過將載體設置為哺乳動物細胞，哺乳動物細胞與人體細胞環境具有較高的相似度，且哺乳動物細胞比價容易獲得，能夠降低實驗成本。
【具體實施方式】
[0011]下面結合實施例，對發明作進一步地的詳細說明，但本發明的實施方式不限於此。
[0012]實施例:
一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，包括以下步驟:
首先，細胞載體的製備:將表達有抗抗胰島素抗體的細胞載體活化後，在4°C培育5小時，用PBS緩衝液洗滌、離心、棄上清液，加入一定濃度的血清蛋白封閉液，培育30分鐘，完成細胞載體的製備；
其次，其它組分的製備:陰性對照血清是健康人的血清，陽性對照血清為已經確診的表達抗胰島素抗體體陽性血清，濃縮樣本稀釋液中含有PBS、哺乳動物血清蛋白；
再次，對表達抗胰島素抗體體陽性血清進行篩選後製備成陽性對照液；
然後，製備試劑盒:所述試劑盒包括用於表達抗胰島素抗體的細胞載體、陰性對照液、陽性對照液、酶底物、稀釋液、終止液；
最後，稀釋後的陽性對照液、用於實驗的人體血清中抗胰島素抗體的載體表達；結合實驗數據對人體血清中抗胰島素抗體的含量進行分析。
[0013]所述陽性對照物來自病人的陽性對照血清的抗胰島素抗體，所述陽性對照液在進行載體表達之前進行純化處理，所述載體為哺乳動物細胞。
[0014]如上所述，可較好的實現本發明。
【權利要求】
1.一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，其特徵在於，包括以下步驟: 首先，細胞載體的製備:將表達有抗抗胰島素抗體的細胞載體活化後，在4°c培育5小時，用PBS緩衝液洗滌、離心、棄上清液，加入一定濃度的血清蛋白封閉液，培育30分鐘，完成細胞載體的製備； 其次，其它組分的製備:陰性對照血清是健康人的血清，陽性對照血清為已經確診的表達抗胰島素抗體體陽性血清，濃縮樣本稀釋液中含有PBS、哺乳動物血清蛋白； 再次，對表達抗胰島素抗體體陽性血清進行篩選後製備成陽性對照液； 然後，製備試劑盒:所述試劑盒包括用於表達抗胰島素抗體的細胞載體、陰性對照液、陽性對照液、酶底物、稀釋液、終止液； 最後，稀釋後的陽性對照液、用於實驗的人體血清中抗胰島素抗體的載體表達；結合實驗數據對人體血清中抗胰島素抗體的含量進行分析。
2.根據權利要求1所述的一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，其特徵在於，所述陽性對照物來自病人的陽性對照血清的抗胰島素抗體。
3.根據權利要求1或2所述的一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，其特徵在於，所述陽性對照液在進行載體表達之前進行純化處理。
4.根據權利要求1或2所述的一種檢測人體血清中抗胰島素抗體的方法，其特徵在於，所述載體為哺乳動物細胞。
【文檔編號】G01N33/68GK104459149SQ201410684949
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月25日 優先權日:2014年11月25日
【發明者】張志新, 楊秦, 陶家春, 何遠立 申請人:成都威爾諾生物科技有限公司