一種氯法拉濱及其對映異構體的分離測定方法

2023-04-26 16:48:01 2

專利名稱：一種氯法拉濱及其對映異構體的分離測定方法
技術領域：
本發明涉及一種高效液相方法，特別是一種氯法拉濱及其對映 異構體的高效液相色譜法分離測定方法。
背景技術：
氯法拉濱是新一代核酸類似物，用於治療復發性和頑固性急性
淋巴性白血病。分子式為doHnClFN503，化學名為6-氨基-2-氯-9-(2-脫氧-2-氟-Z3-D-阿拉伯呋喃糖基)-9H-嘌呤，其化學結構式如
下
formula see original document page 4
6-氨基-2-氯-9- (2-脫氧-2-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-附-嘌呤，
為氯法拉濱的主要雜質，其在氯法拉濱的合成過程中生成，為控制 最終產品的質量生產過程的質量控制是非常重要的。
常規分離手性消旋體的方法常常採用手性色譜柱進行分離，不 但成本高而且分離難度大，本法採用普通的色譜柱(C18色譜柱或Q色譜柱)快速準確得實現了氯法拉濱a -型和(3 -型異構體的分 離和測定，從而實現了氯法拉濱手性雜質的控制，保證了氯法拉濱 及其製劑的質量可控，具有現實意義。

發明內容
本發明的目的在於提供一種用高效液相色譜法分離測定氯法 拉濱及其對映異構體的方法，可用於氯法拉濱的製備過程和最終產 品的質量控制。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，選用十八烷基矽烷鍵和矽膠或辛基矽烷鍵和矽膠為
填料的色譜柱，以甲醇、乙腈或其混合物為有機相與水相的混合溶 劑作為流動相。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，流動相中的有機相為甲醇，甲醇與水相的比例為
15 50 : 85 50。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映
異構體的方法，流動相中的有機相為甲醇，甲醇與水相的比例為
30 : 70。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映
異構體的方法，流動相中的有機相為乙腈，乙腈與水相的比例為 10 50 : 90 50。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，流動相中的有機相為乙腈，乙腈與水相的比例為 15 : 85。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映
異構體的方法，流動相中的有機相為甲醇乙腈的混合物，流動相
中的甲醇、乙腈與水相的比例為5 : 15 : 80。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，所述水相為磷酸鹽緩衝液，其pH範圍為4 6。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，所述磷酸鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二 氫鈉或磷酸二氫鉀中的一種或其混合物。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，所述磷酸鹽為磷酸二氫鉀。
本發明提供一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映 異構體的方法，可按以下方法實現
取氯法拉濱適量，用流動相溶解，配製成每lml含氯法拉濱 lmg的樣品溶液，流速為lml/min，檢測波長262nm，選用<:18色譜 柱，柱溫25。C。取樣品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，完成氯法 拉濱及其對映異構體的分離測定。
1)取氯法拉濱或含氯法拉濱的製劑樣品適量用流動相溶解樣 品，並配製成配製成每lml含氯法拉濱lmg的樣品溶液。 .2)設置流動相流速為0.5 1.5ml/min,流動相的流速優選為 lml/min;檢測波長245 270nm，最佳檢測波長為262nm; 選用C,8色譜柱或Q色譜柱，優選ds色譜柱；色譜柱柱溫
20 30°C，柱溫最佳為25。C。 3)取l)的樣品溶液5 20ul，優選10ul，注入高效液相色譜 儀，完成氯法拉濱及其對映異構體的分離測定。
本發明能夠有效分離測定氯法拉濱其對映異構體，避免了用手 性柱分離異構體出現成本高操作繁瑣的缺點，方法簡單快捷，分析 靈敏度高，結果準確可靠。可以用於氯法拉濱及含有氯法拉濱的藥 物組合物的質量控制。


圖1氯法拉濱及其對映異構體的液相色譜圖(ds色譜柱和有 機相為乙腈)
圖2氯法拉濱原料的高效液相色譜圖
圖3氯法拉濱氯化鈉注射液的高效液相色譜圖(輔料空白)
圖4氯法拉濱氯化鈉注射液的高效液相色譜圖
圖5氯法拉濱及其對映異構體的液相色譜圖(ds色譜柱和有 機相為甲醇)
圖6氯法拉濱及其對映異構體的液相色譜圖(C8色譜柱和有 機相為乙腈)
具體實施例方式
以下實施例用於進一步理解本發明，但不限於本實施的範圍。 實施例1 儀器與條件
日本島津LC-10ATFP泵，島津SPD-10AfT紫外可見光多波長 檢測器，RHEODYNE 7725i進樣器及TL9900色譜數據工作站，色 譜柱Cl8 250X4.6mm， 5nm，紫外檢測波長262nm，流動相 磷酸鹽緩衝液(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用氫氧化鈉試液調pH 為5.5)-乙腈(85 : 15) 實驗步驟
取氯法拉濱及其對映異構體各約10mg，置於10ml量瓶中，加 流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分別取試劑空 白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相分析，記錄色譜圖， 結果見圖l 。
圖1中保留時間為9.600分鐘的色譜峰為氯法拉濱的色譜峰， 15.350分鐘的色譜峰為氯法拉濱對映異構體的色譜峰。在上述條件 下氯法拉濱及其對映異構體的色譜峰分離度良好，可以滿足中國藥 典的要求。 實施例2
儀器與條件
日本島津LC-10ATT屍泵，島津SPD-10AW5紫外可見光多波長
檢測器，RHEODYNE7725i進樣器及TL9900色譜數據工作站，色 譜柱C18 250X4.6mm， 5[xm，紫外檢測波長262nm，流動相 磷酸鹽緩衝液(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用氫氧化鈉試液調pH 為5.5)-乙月青(85 : 15)
實驗步驟
取氯法拉濱約lmg，置於10ml量瓶中，加流動相溶解並稀釋 至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取供試溶液，照上述條件進行高效液相分析，記錄色譜圖，結 果見圖2。
圖2中保留時間為10.000分鐘的色譜峰為氯法拉濱的色譜峰，
其對映異構體未檢出，結果表明氯法拉濱原料的光學純度達到原料 藥要求，本法可以用於氯法拉濱的質量監測。 實施例3
儀器與條件
日本島津LC-10ATF屍泵，島津SPD-10AF屍紫外可見光多波長 檢測器，RHEODYNE7725i進樣器及TL9900色譜數據工作站，色 譜柱C18 250X4.6mm， 5pm，紫外檢測波長262nm，流動相 磷酸鹽緩衝液(0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用氫氧化鈉試液調pH 為5.5)-乙月青(85 : 15) 實驗步驟
取氯法拉濱注射液lml (0.9%氯化納水溶液含氯法拉濱 10mg/ml)，置於10ml量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液，照上述的條件進行高效液相分析，
並同法進行輔料(即0.9%氯化納水溶液)空白試驗，結果見圖3， 圖4。
圖3證明，輔料空白不幹擾測定，圖4中保留時間為9.750分 鐘的色譜峰為氯法拉濱的色譜峰，其對映異構體未檢出，結果表明 氯法拉濱製劑的光學純度達到製劑的要求，本法可以用於氯法拉濱 製劑的質量監測。 實施例4
儀器與條件
日本島津LC-10ATF屍泵，島津SPD-10A"紫外可見光多波長 檢測器，RHEODYNE7725i進樣器及TL9900色譜數據工作站，色 譜柱C8 250X4.6mm， 5pm，紫外檢測波長262nm，流動相 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用氫氧化鈉試液調pH為5.5)-乙腈(85 :15) 實驗步驟
取氯法拉濱及其對映異構體各lmg，置於10ml量瓶中，加流 動相溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相 分析，記錄色譜圖，結果見圖5。
圖5中保留時間5.050分鐘的色譜峰為氯法拉濱的色譜峰， 6.500分鐘的色譜峰為氯法拉濱對映異構體的色譜峰。在上述條件 下氯法拉濱及其對映異構體的色譜峰分離度良好，可以滿足中國藥 典的要求。
實施例5
儀器與條件
日本島津LC-10ATT屍泵，島津SPD-10AK屍紫外可見光多波長 檢測器，RHEODYNE7725i進樣器及TL9900色譜數據工作站，色 譜柱C18 250X4.6mm， 5nm，紫外檢測波長262nm,流動相 0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用氫氧化鈉試液調pH為5.5)-甲醇 (70 : 30) 實驗步驟
取氯法拉濱及其對映異構體各約0.5mg，置於10ml量瓶中，加 流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相 分析，記錄色譜圖，結果見圖6
圖6中保留時間11.350分鐘的色譜峰氯法拉濱的色譜峰， 15.500分鐘的色譜峰為氯法拉濱對映異構體的色譜峰。在上述條件 下氯法拉濱及其對映異構體的色譜峰分離度良好，可以滿足中國藥 典的要求。
權利要求
1. 一種用高效液相色譜分離測定氯法拉濱及其對映異構體的方法，其特徵在於選用十八烷基矽烷鍵和矽膠或辛基矽烷鍵和矽膠為填料的色譜柱，以甲醇、乙腈或其混合物為有機相與水相的混合溶劑作為流動相。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵是流動相中的有機相為甲 醇，甲醇與水相的比例為15 50:85 50。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特徵是流動相中的有機相為甲 醇，甲醇與水相的比例為30 : 70。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特徵是流動相中的有機相為乙 腈，乙腈與水相的比例為15 50:85 50。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特徵是流動相中的有機相為乙 腈，乙腈與水相的比例為15 : 85。
6. 根據權利要求1所述的方法，其特徵是流動相中的有機相為甲醇乙腈的混合物，流動相中的甲醇、乙腈與水相的比例為5: 15 : 80。
7. 根據權利要求1 6任一項所述的方法，其特徵是所述水相為磷 酸鹽緩衝液，其pH範圍為4 6。
8. 根據權利要求7所述的方法，其特徵是所述磷酸鹽選自磷酸氫二 鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉或磷酸二氫鉀中的一種或其混合物。
9. 根據權利要求8所述的方法，其特徵在於所述磷酸鹽為磷酸二氫鉀。
10.根據權利要求1 9任一項所述的方法，其特徵在於取氯法拉濱適量，用流動相溶解，配製成每lml含氯法拉濱 lmg的樣品溶液，流速為lml/min，檢測波長262nm,選用C,s色譜 柱，柱溫25。C。取樣品溶液10ul，注入高效液相色譜儀，完成氯法 拉濱及其對映異構體的分離測定。
全文摘要
本發明公開了一種氯法拉濱及其對映異構體的分離測定方法，本發明採用高效液相色譜法，分離測定氯法拉濱及其對映異構體，可用於氯法拉濱和含有氯法拉濱的藥物組合物的質量控制。
文檔編號G01N30/02GK101206201SQ20061016538
公開日2008年6月25日 申請日期2006年12月19日 優先權日2006年12月19日
發明者莉 楊 申請人:北京德眾萬全藥物技術開發有限公司