多波長中藥色譜指紋圖譜及其構建方法與應用的製作方法

2023-04-27 01:59:31

專利名稱：多波長中藥色譜指紋圖譜及其構建方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種多波長中藥色譜指紋圖譜及其構建方法與應用。
背景技術：
中藥指紋圖譜是通過色譜或光譜手段對中藥分析樣品的特徵性進行表達的一種有效方式。在相關藥物研究的指導性文件中已經對中藥注射劑做了相應的要求，並已用於中藥注射劑的鑑別。近年來，在中藥質量控制和評價的實踐發展過程中，由於質量要求的提高以及有關新藥研究的發展，越來越要求對中藥樣品進行全面分析和整體表達，但是，由於中藥樣品中大量未知成分的存在，針對性地說明中藥樣品中包含成分和相對含量有較大的困難，因此在現代研究中，大量運用指紋圖譜的方式進行樣品特性表達，同時在針對中藥材、飲片、中藥提取物以及中藥製劑的分析中也廣泛地利用了色譜或光譜手段進行指紋圖譜的研究。
在眾多色譜指紋圖譜的研究中，主要是運用紫外檢測、蒸發光檢測以及質譜檢測方式，其中鑑於實用目的，紫外檢測是指紋圖譜測定的主要檢測手段，但是比較而言，一般紫外檢測方式存在以下問題1、檢測波長的唯一性，使得對大量其它非特徵吸收的物質信息沒有得到較好的表達；2、圖譜在整體相似度比較的情況下沒有對其中成分的相對量進行控制；3、在對指紋峰進行考察的過程中，僅僅採取相對保留值方式進行鑑別，沒有建立蘊涵特徵信息的指紋峰數據序列，用於專屬性評價；4、在指紋圖譜評價方法中，結果的定性和定量信息沒有結合使用，判斷結果針對性不強。

發明內容
針對上述問題，本發明的目的是提供一種採用定性和定量指標相結合的多波長中藥色譜指紋圖譜及其構建方法與應用。
為實現上述目的，本發明採取以下技術方案一種多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其包括以下步驟(1)將中藥樣品進行製備，在色譜預選流動相體系中進行粗分，對其中較強的紫外吸收響應進行識別和認定，根據識別和認定的結果，確定樣品的多個檢測波長並跟蹤響應，測定多級洗脫比例下容量因子和對應流動相比例關係；(2)根據上述比例關係，確定在設定流動相體系下的梯度洗脫方法，進行實際樣品測定，根據分離情況以及各個檢測波長下色譜洗脫行為，進行整體優化，實時調整梯度洗脫曲線，最終按照跟蹤響應的識別情況和容量因子分布，確定在1小時～1.5小時洗脫時間下的梯度曲線，從而確定該樣品的指紋圖譜測定方法；(3)對上述確定的測定方法進行有效性評價，其中包括專屬性、準確度、精密度、重複性、穩定性、測定範圍以及耐用性；(4)對不少於10批的實際樣品進行測定，測定結果包括多個檢測波長下的圖譜及數據，對所述數據以保留時間縱向展開，對每個波長下所得相對峰面積值或峰高值進行一致性處理，建立測定樣品的對應相對保留時間的相對峰面積值或峰高值的指紋圖譜數據序列，對對應序列進行平均或取中位值，形成多個單波長下指紋圖譜共有模式序列，然後進行多個波長下的數據整合，以所有全檢測波長範圍內可響應指紋峰對應的相對保留時間為列，各檢測波長數據為行進行序列矩陣化，對應時間點無響應的位置以0填充，形成多波長指紋圖譜共有模式數據矩陣；(5)對相同的中藥樣品採取多種製備方式製備或採取多種檢測方法對相同樣品進行測定，並分別重複步驟(4)，將得到的多個數據矩陣進行差異比較，在此基礎上對步驟(4)所得的數據進行層次化；(6)對指紋圖譜中的主要色譜峰進行指紋圖譜定性；(7)對指紋圖譜中的主要色譜峰進行指紋圖譜定量。
上述步驟(6)中，指紋圖譜定性包含三個推斷層次，即①採用對照品對照定性；②採用已知結構對照物為參照，利用液相色譜/質譜聯用(LC/MS)中準分子離子或分子離子和相應碎片裂解規律和液相色譜/二極體陣列檢測器(LC/DAD)的紫外吸收光譜特徵推斷指紋峰蘊含成分的結構類型，用於對指紋峰成分的推測；③採用LC/MS和LC/DAD信息及保留值標識指紋峰代表的物質成分，內容包括指紋峰的保留值、實時紫外吸收光譜、以及可能的分子量和質譜碎片信息用於標識該指紋峰。
上述步驟(7)中，指紋圖譜定量包含三個層次，①採用對照品進行準確定量；②以準確定量指紋峰為參比，將推測具有相同結構類型的指紋峰與之比較，採用相對響應值進行定量；③採用百分響應值的方式，對用信息標識指紋峰進行量化控制。
上述步驟(5)中，層次化是指按照響應大小或按照物質成分鑑別情況，進行數據分類，將相似差異變化的數據歸併為一類，對相同類別指紋峰數據進行比較，選取其中可定量成分或者基本可定性的穩定成分峰為參照，對類中其它數據進行相對化處理，作為相對含量或相對特徵比值進行指紋數據的量化處理結果，將不同層次量化處理結果填入數據矩陣中，即形成量化指紋圖譜共有模式數據矩陣。
上述步驟(5)中，多種製備方式包括冷浸法、溫浸法、滲漉法、煎煮法、回流法、加壓浸出、減壓浸出、超聲提取法、微波提取法、超臨界提取法。
上述步驟(4)中，所述多個檢測波長下的圖譜及數據是在各檢測波長下同時測定得到或在相同條件不同波長下分別測定得到。
通過上述多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法得到的多波長中藥色譜指紋圖譜。
上述多波長中藥色譜指紋圖譜在質量鑑別中的應用。
上述多波長中藥色譜指紋圖譜在質量評價分析中的應用。
本發明由於採取以上設計，其具有以下優點1、由於本發明採用多波長檢測方式，將多個波長下測得的圖形進行組合整理，構建了一個較為完整的反映被測樣品在各波長下特徵的指紋圖譜，因此可以更充分地表徵各種中藥成分特異性信息，並在中藥樣品質量鑑別和評價分析中，非常方便地對預檢驗物品進行定性的分析比較，並得出較為精確的判斷結論。2、本發明由於將多個波長下測得的指紋峰數據進行了一致性和分層處理，並整合成共有模式的數據矩陣，因此可以將中藥成分中的主要成分進行量化，加強了指紋圖譜對中藥品種及其質量的表達能力和規範程度，使得在中藥樣品質量鑑別和評價分析中，不但可以得到被檢驗物品定性的分析結果，而且還可以非常方便地得到具有針對性的定量判斷。3、本發明由於提供了一整套規範的定性與定量相結合的多波長色譜指紋圖譜的構建方法，因此當使用本方法得到的中藥色譜指紋圖譜進行中藥成分鑑定、分析和評價時，不但方法簡便、穩定可靠，而且易於掌握和應用。本發明可以廣泛用於中藥材、飲片、提取物、中藥製劑以及保健品、食品等含有多類化學成分的複雜體系，通過構建多波長色譜指紋圖譜進行定性和定量分析，達到鑑別、質量評價和質量控制的目的。


圖1是梔子藥材全波長掃描圖譜圖2a～c是梔子藥材分別在240、330和440nm波長下的指紋圖譜圖3是梔子藥材多波長組合的指紋圖譜(組合圖譜)圖4a～c是梔子藥材多波長HPLC定性定量分析對照品圖譜圖5a～f是栽培(a)和野生(b)梔子藥材的多波長指紋圖譜對比圖6是清開靈注射液全波長掃描圖譜圖7a～c是清開靈注射液中主要成分黃芩苷、梔子苷和綠原酸的紫外吸收光譜8a～c是清開靈注射液分別在240、280和330nm波長下的指紋圖譜圖9a～c是清開靈注射液中三種主要成分對照品HPLC色譜10是清開靈注射液按保留值分類結果圖11a～d是不同廠家清開靈注射液採用本指紋圖譜方法進行質控前相似度比較圖12a～d是不同廠家清開靈注射液採用本指紋圖譜方法進行質控後相似度比較具體實施方式
本發明多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟1、將中藥樣品進行製備，在色譜預選流動相體系中進行粗分，對其中較強的紫外吸收響應進行識別和認定，根據識別和認定的結果，確定樣品的多個檢測波長並跟蹤響應，測定多級洗脫比例下容量因子和對應流動相比例關係；2、根據上述比例關係，確定在設定流動相體系下的梯度洗脫方法，進行實際樣品測定，根據分離情況以及各個檢測波長下色譜洗脫行為，進行整體優化，實時調整梯度洗脫曲線，最終按照跟蹤響應的識別情況和容量因子分布，確定在1小時～1.5小時洗脫時間下的梯度曲線，從而確定該樣品的指紋圖譜測定方法；3、對上述確定的測定方法進行有效性評價，其中包括專屬性、準確度、精密度、重複性、穩定性、測定範圍以及耐用性；4、對不少於10批的實際樣品進行測定，採用各檢測波長下同時測定或在相同條件不同波長下分別測定的方式進行測定，得到的測定結果包括多個檢測波長下的圖譜及數據，對所述數據以保留時間縱向展開，對每個波長下所得相對峰面積值或峰高值進行一致性處理，即將數據相對化，一般可採用相對峰面積值或峰高值，並通過可定量的物質成分峰作為定點指標，進行保留時間的相對化處理，匹配相應測定批次的數據，識別共有指紋峰，建立測定樣品的對應相對保留時間的相對峰面積值或峰高值的指紋圖譜數據序列，對對應序列進行平均或取中位值，形成多個單波長下指紋圖譜共有模式序列，然後進行多個波長下的數據整合，以所有全檢測波長範圍內可響應指紋峰對應的相對保留時間為列，各檢測波長數據為行進行序列矩陣化，對應時間點無響應的位置以0填充，形成多波長指紋圖譜共有模式數據矩陣；5、對相同的中藥樣品採取冷浸法、溫浸法、滲漉法、煎煮法、回流法、加壓浸出、減壓浸出、超聲提取法、微波提取法、超臨界提取法中的一種或多種製備方法對相同樣品進行製備後，分別重複步驟4；或者採取紫外檢測法、蒸發光檢測法、質譜檢測法中的一種或多種檢測方法對相同樣品進行測定，分別重複步驟4。將得到的多個數據矩陣進行差異比較，在此基礎上對步驟4所得的數據進行層次化。層次化是指按照響應大小或按照物質成分鑑別情況，進行數據分類，將相似差異變化的數據歸併為一類，對相同類別指紋峰數據進行比較，選取其中可定量成分或者基本可定性的穩定成分峰為參照，對類中其它數據進行相對化處理，作為相對含量或相對特徵比值進行指紋數據的量化處理結果，將不同層次量化處理結果填入數據矩陣中，即形成量化指紋圖譜共有模式數據矩陣。
6、對指紋圖譜中的主要色譜峰進行指紋圖譜定性，定性可以包含三個推斷層次(1)採用對照品對照定性；(2)採用已知結構對照物為參照，利用LC/MS中準分子離子或分子離子和相應碎片裂解規律和LC/DAD紫外吸收光譜特徵推斷指紋峰蘊含成分的結構類型，用於對指紋峰成分的推測；(3)採用LC/MS和LC/DAD信息及保留值標識指紋峰代表的物質成分，內容包括指紋峰的保留值、實時紫外吸收光譜、以及可能的分子量和質譜碎片信息用於標識該指紋峰。
7、對指紋圖譜中的主要色譜峰進行指紋圖譜定量，定量可以包含三個層次，(1)採用對照品進行準確定量；(2)以準確定量指紋峰為參比，將推測具有相同結構類型的指紋峰與之比較；(3)採用相對響應值進行定量，採用百分響應值的方式，對用信息標識指紋峰進行量化控制。
經上述構建方式得到的多波長中藥色譜指紋圖譜，可以對未知供試樣品進行測定，利用上述矩陣進行樣品的相似度判別和成分差異比較，從而實現定性定量相結合的質量鑑別和質量評價分析。
下面結合實施例，對本發明進一步進行描述。
實施例一1、梔子藥材多波長指紋圖譜的構建(a)實驗採用Agilent 1100型高效液相色譜儀(DAD二極體陣列檢測器)，Phenomenex Luna C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)。
(b)梔子果實粉碎後，過40目篩，加入適量甲醇浸泡1小時，超聲處理20分鐘，放冷，3000rpm離心10分鐘後，取上清液過濾即得。
(c)色譜條件流動相為甲醇和水，流速0.8ml/min，柱溫35℃，採用線性梯度洗脫。
(d)根據DAD檢測器在200～600nm全波長掃描圖(如圖1所示)，為了使各組分達到吸收強、幹擾小的目的，選擇在240nm測定環烯醚萜苷類物質(如圖2-a所示)，330nm測定綠原酸(如圖2-b所示)，440nm測定藏紅花素類物質(如圖2-c所示)，獲得三個波長下梔子的單獨指紋圖譜；將此三個波長下單獨的指紋圖譜有機地組合在一起就構成梔子的組合指紋圖譜(如圖3所示)，圖中不同成分的譜圖分別採用優化後的不同檢測波長測得，其分別是1、梔子酸；2、異梔子苷；4、京尼平龍膽二糖苷；8、梔子苷；7、綠原酸；14、藏紅花素1；16、藏紅花素2；18、藏紅花素3；19、藏紅花酸。
(e)採用對照品對樣品物質成分進行定性，如圖4a～c所示，是梔子藥材的多波長HPLC定量分析對照品圖譜，給出了梔子中9種成分的定性鑑定結果1、梔子酸；2、異梔子苷；3、京尼平龍膽二糖苷；4、梔子苷；5、綠原酸；6、藏紅花素1；7、藏紅花素2；8、藏紅花素3；9、藏紅花酸，對其相似物及無對照品的成分採取在線掃描圖譜的一致性分析結合LC/MS進行定性。
(f)採用對照品外標法對樣品物質成分進行定量測定，在多波長HPLC指紋圖譜中(如圖4a～c所示)，採用對照品定量測定梔子藥材中9種成分，採用相對峰面積對其相似物及無對照品的成分進行定量測定，其測量結果如表1所示
表1 梔子多波長指紋圖譜共有模式數據矩陣數據表峰面積相對保留時間240nm 330nm 440nm3.851 0 0 170612.0642554908 0 014.037909293 0 014.7840 146862 015.691506727 0 017.6855684359 0 018.315805815 1188839 288520.1390 361535 020.587262739220 022.933558051 0 023.0720 94150 023.413403608 0 023.4350 80959 030.0800 114335 030.5280 0 862131.0400 138811 031.4770 0 472231.6590 231528 031.8612974654 2652173 032.4160 508344 032.427120161 0 032.4480 0 418932.747756831 1450702 032.7680 0 1445033.28 362344 482370 033.7920 0 411233.824297857 436311 034.4210 0 859834.432848036 2333891 035.68 129105 0 035.883156509 189857 036.0530 0 489136.1920 0 215637.493638054887652378834328339.1047243344 0 039.8082541040 0 046.7630 1598107 047.765829225 903816 048.3730 227272 049.7490 1791878 0(g)將量化指紋圖譜共有模式數據矩陣(如表1所示)，用於進行樣品的相似度判別與評價。
2、梔子藥材多波長指紋圖譜的應用如圖5a～f所示，是栽培的梔子藥材(a)(如圖5-a、c、e所示)和野生梔子藥材(b)(如圖5-b、d、f所示)的多波長指紋圖譜對比，本指紋圖譜方法能夠明確表徵兩者之間的異同。結果表明野生梔子中的梔子苷及藏紅花素類成分含量普遍略高於栽培品的含量，表明栽培品質量低於野生品種。
實施例二1、清開靈多波長指紋圖譜的構建(a)採用島津LC-2010A型高效液相色譜儀(帶有SPD-M10 A型二極體陣列檢測器，自動進樣裝置)，Kromasil C18色譜分析柱(250×4.6mm，5μm)。
(b)清開靈注射液用0.45μm濾膜過濾後直接進樣。
(c)色譜條件流動相為A相0.3％甲酸水溶液，B相甲醇，柱溫30℃；流速1.0ml/min，採用線性梯度洗脫。
(d)經過DAD檢測器在200～600nm全波長掃描(如圖6所示)，掃描結果(溶劑甲醇)表明梔子苷在238nm處有最大吸收；黃芩苷在280nm處有最大吸收；綠原酸在329nm處有最大吸收。圖7a～c是清開靈注射液中主要成分黃芩苷、梔子苷和綠原酸的紫外吸收光譜圖，圖中1、梔子苷，2、黃芩苷，3、綠原酸，溶劑為甲醇。為了使各組分達到吸收強、幹擾小的目的，最終選擇在238nm測定梔子苷(如圖8-a所示)，280nm測定黃芩苷(如圖8-b所示)，330nm測定綠原酸(如圖8-c所示)，同時獲得三個波長下的指紋圖譜，圖中1、梔子苷，2、黃芩苷，3、綠原酸。
(e)採用對照品對樣品物質成分進行定性，對其相似物及無對照品的成分採取在線LC/UV結合LC/MS進行定性(如圖9a～c所示)，圖中是清開靈注射劑中三種主要成分1、梔子苷，2、黃芩苷，3綠原酸的定性。
(f)採用對照品外標法對樣品物質成分進行定量測定、採用相對峰面積對其相似物及無對照品的成分進行定量測定。
(g)將清開靈指紋峰按保留值分類(如圖10所示)，分類結果採用量化指紋圖譜共有模式數據矩陣，進行樣品的相似度判別與評價。共有模式數據矩陣數據如表2所示
表2 清開靈多波長指紋圖譜共有模式數據矩陣數據峰面積相對保留時間238nm 280nm 330nm4.768 453610 0 04.779 0 389856 322106.293 0 882817 07.893 0 340205 010.2720 536179 011.2430 107203 011.659844011 0 011.6690 2023175013.1950 427316 013.205557140 0 014.101926108 324157 015.467669109 595233 018.347384221 0 018.3890 0 10389120.459898142 0 020.4690 449928 021.1411998911 0 021.3331357095 0 021.3760 2935551022.027554408 0 023.6910 163450 54004528.3630 0 42680129.067775892 0 029.7280 0 42885230.9330 0 31303232.3955410397 0 042.24 0 0 15211742.5280 0 21511243.3711015044 2445299332882144.928479956 0 046.3040 276533 17297649.4931.09E+080 049.5040 0 1.15E+0851.3920 0 16786252.1710 0 33287752.9710 334864 053.6111010591 2181996053.6210 0 119240854.7313135701 7076680322607275.3284676526 625855 02、清開靈多波長指紋圖譜的應用如圖11a～d所示，是不同廠家清開靈注射液採用本發明的指紋圖譜進行質控前與標準圖譜進行相似度比較。各廠產品的指紋圖譜基本反映出產品的原有狀況，各廠家之間指紋圖譜差異較大，相似度分別為0.958、0.780、0.650。
如圖12a～d所示，是不同廠家清開靈注射液採用本發明的指紋圖譜進行質控後相似度比較。經過指紋圖譜指導下進行工藝改進，各廠家產品間指紋圖譜趨於一致，相似度分別為0.974、0.941、0.925。
從以上說明可以看出，由本發明方法得到的多波長指紋圖譜能夠有效、全面、綜合地反映中藥產品的質量變異，可以有效地進行從藥材、半成品到最終產品全過程的質量控制，使不同廠家能夠生產出統一的、穩定的、相同質量的並達到質量標準的產品。
權利要求
1.一種多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其包括以下步驟(1)將中藥樣品進行製備，在色譜預選流動相體系中進行粗分，對其中較強的紫外吸收響應進行識別和認定，根據識別和認定的結果，確定樣品的多個檢測波長並跟蹤響應，測定多級洗脫比例下容量因子和對應流動相比例關係；(2)根據上述比例關係，確定在設定流動相體系下的梯度洗脫方法，進行實際樣品測定，根據分離情況以及各個檢測波長下色譜洗脫行為，進行整體優化，實時調整梯度洗脫曲線，最終按照跟蹤響應的識別情況和容量因子分布，確定在1小時～1.5小時洗脫時間下的梯度曲線，從而確定該樣品的指紋圖譜測定方法；(3)對上述確定的測定方法進行有效性評價，其中包括專屬性、準確度、精密度、重複性、穩定性、測定範圍以及耐用性；(4)對不少於10批的實際樣品進行測定，測定結果包括多個檢測波長下的圖譜及數據，對所述數據以保留時間縱向展開，對每個波長下所得相對峰面積值或峰高值進行一致性處理，建立測定樣品的對應相對保留時間的相對峰面積值或峰高值的指紋圖譜數據序列，對對應序列進行平均或取中位值，形成多個單波長下指紋圖譜共有模式序列，然後進行多個波長下的數據整合，以所有全檢測波長範圍內可響應指紋峰對應的相對保留時間為列，各檢測波長數據為行進行序列矩陣化，對應時間點無響應的位置以0填充，形成多波長指紋圖譜共有模式數據矩陣；(5)對相同的中藥樣品採取多種製備方式製備或採取多種檢測方法對相同樣品進行測定，並分別重複步驟(4)，將得到的多個數據矩陣進行差異比較，在此基礎上對步驟(4)所得的數據進行層次化；(6)對指紋圖譜中的主要色譜峰進行指紋圖譜定性；(7)對指紋圖譜中的主要色譜峰進行指紋圖譜定量。
2.如權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其特徵在於步驟(6)中，所述指紋圖譜定性包含三個推斷層次，即①採用對照品對照定性；②採用已知結構對照物為參照，利用液相色譜/質譜聯用中準分子離子或分子離子和相應碎片裂解規律和液相色譜/二極體陣列檢測器的紫外吸收光譜特徵推斷指紋峰蘊含成分的結構類型，用於對指紋峰成分的推測；③採用液相色譜/質譜聯用和液相色譜/二極體陣列檢測器信息及保留值標識指紋峰代表的物質成分，內容包括指紋峰的保留值、實時紫外吸收光譜、以及可能的分子量和質譜碎片信息用於標識該指紋峰。
3.如權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其特徵在於步驟(7)中，所述指紋圖譜定量包含三個層次，①採用對照品進行準確定量；②以準確定量指紋峰為參比，將推測具有相同結構類型的指紋峰與之比較，採用相對響應值進行定量；③採用百分響應值的方式，對用信息標識指紋峰進行量化控制。
4.如權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其特徵在於步驟(5)中，所述層次化是指按照響應大小或按照物質成分鑑別情況，進行數據分類，將相似差異變化的數據歸併為一類，對相同類別指紋峰數據進行比較，選取其中可定量成分或者基本可定性的穩定成分峰為參照，對類中其它數據進行相對化處理，作為相對含量或相對特徵比值進行指紋數據的量化處理結果，將不同層次量化處理結果填入數據矩陣中，即形成量化指紋圖譜共有模式數據矩陣。
5.如權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其特徵在於步驟(5)中，所述多種製備方式包括冷浸法、溫浸法、滲漉法、煎煮法、回流法、加壓浸出、減壓浸出、超聲提取法、微波提取法、超臨界提取法。
6.如權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其特徵在於步驟(4)中，所述一致性處理是指採用相對峰面積值或峰高值，進行保留時間的相對化處理，匹配相應測定批次的數據，並通過可定量的物質成分峰作為定點指標，識別共有指紋峰。
7.如權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法，其特徵在於步驟(4)中，所述多個檢測波長下的圖譜及數據是在各檢測波長下同時測定得到或在相同條件不同波長下分別測定得到。
8.一種通過權利要求1所述的多波長中藥色譜指紋圖譜的構建方法得到的多波長中藥色譜指紋圖譜。
9.如權利要求8所述的多波長中藥色譜指紋圖譜在質量鑑別中的應用。
10.如權利要求8所述的多波長中藥色譜指紋圖譜在質量評價分析中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種多波長中藥色譜指紋圖譜及其構建方法與應用，該方法通過色譜條件和紫外響應的考察與優化，確定在1～1.5小時洗脫時間下的梯度曲線和多個紫外檢測波長用於指紋圖譜測定並進行方法學驗證；採用相對響應值和可定量峰作為定點指標進行相對化處理和矩陣化，建立量化多波長指紋圖譜共有模式數據矩陣；對未知樣品利用該矩陣進行相似度判別和成分差異比較，實現定性定量相結合的質量鑑別和評價。本發明的優點是不僅能從色譜的整體特徵把握中藥的品種和質量情況，而且通過多波長選取和指紋峰定性鑑定，能夠更好表徵中藥的成分特異性，通過定量處理將主要成分量化，加強了指紋圖譜對中藥品種及其質量的表達能力和規範程度。採用本發明方法構建的中藥色譜指紋圖譜，可以廣泛地應用於中藥質量檢測與評價技術領域。
文檔編號G01N30/02GK1544935SQ20031010386
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月14日 優先權日2003年11月14日
發明者羅國安, 楊學東, 曹進, 王義明, 胡震 申請人:清華大學