巴西蘇木紅素的新用途的製作方法

2023-05-08 20:56:56

專利名稱：：巴西蘇木紅素的新用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及以蘇木為原料提取的巴西蘇木紅素在醫藥方面的新用途，屬於中藥
技術領域：
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背景技術：
：蘇木，為豆科植物蘇木Caesa7A/zw'asafloa/7L.的乾燥心材。分布於我國的廣西，廣東，臺灣，貴州，雲南，四川等地。全年可採。除去外皮及邊材，取心材，曬乾。含有巴西蘇木素(brasilin)，巴西蘇木紅素(brasilein)等成分。以蘇木為原料提取的巴西蘇木紅素(C16H1205)的結構式如下物理化學特徵紅棕色晶體(MeOH)，mp260-265。C(dec.),，[aV"-1008(MeOH;c0.6)。波譜特徵UV(MeOH)麼276，446,556。EIMS(m/z):284[M]+畫R如下表'Hand3CNMRdataofBrazileiinDMSO-d6(500MHzfor'Hand125MHzfor13C，Sinppm，/inHz)No.力_"C"I7.82(1H,d,J=8.5Hz)130.5la110.826.58(1H'dd,J=8.5,2.0Hz)110.83162.246.36(1H,d，J=2.0Hz)102.84a157.764.lO(lH，d,J=11.5Hz),4.47(1H,d,J=11.5Hz)72.972.86(2H，s)39.87a158.986.33(1H,s)117.59179.310152.3117.11(1H，S)lla12104.1126.0151.5《本草綱目》記載蘇木具有"破血，排膿止痛"的功效。主治婦人血氣心腹痛，消癰腫撲損瘀血"，《中藥大辭典-上冊》記載蘇木具有"行血破瘀，消腫止痛"的功效。蘇木作為腦血管藥用的記載比較少見，尤其未見報導蘇木或巴西蘇木紅素在製備治療腦缺血，腦內過氧化物增高所引起疾病的藥物中的應用。本發明的目的是提供一種巴西蘇木紅素在醫藥方面的新用途，該用途為巴西蘇木紅素在製備治療因腦缺血導致腦內過氧化物過多所引起的疾病的藥物中的應用。巴西蘇木紅素在製備治療因腦缺血導致腦血流供應不足所引起的疾病的藥物中的應用。本發明所述的巴西蘇木紅素採用以下方法得到首先將藥材重量的515倍80%95%乙醇回流提取,提取次數一般為13次，每次13小時。將提取液在常壓或減壓，溫度在309CTC濃縮，回收乙醇，乾燥，稱重。加甲醇溶解，用聚醯胺或矽膠拌樣，裝柱，然後分別用48倍柱體積的水和3090%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液部分。將收集的洗脫液在3080°C溫度下減壓濃縮，減壓乾燥或冷凍乾燥，得到巴西蘇木紅素。加水溶解，石油醚萃取，萃取物常壓濃縮，得到巴西蘇木紅素。將上述方法製得的巴西蘇木紅素採用高效液相色譜法在波長446nm處進行測定，巴西蘇木紅素(C16H1205)含量在8098%之間。在治療腦內過氧化物過多，腦血流供血不足及其由此引起的疾病時，以巴西蘇木紅素為活性成分，以常規的製劑工藝，單獨使用或與其他藥物配合製備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物。如散劑，丸劑，膠囊劑，片劑，微囊劑，軟膠囊劑，膜劑，栓劑，注射劑，膏劑，酊劑，散劑，衝劑，氣霧劑，各種外用製劑等。本發明的藥理實驗結果表明，巴西蘇木紅素具有一定地抑制腦組織MDA生成的作用，有一定的抗氧化作用。巴西蘇木紅素可以明顯升高小鼠腦膜血流量，具有一定地擴張腦血管的作用。巴西蘇木紅素體外可以明顯抑制紅細胞膜^+，1(+ATP酶活性，提示可以降低腦能量代謝，具有一定保護腦神經原的作用。
發明內容圖1巴西蘇木紅素結構圖2巴西蘇木紅素標準曲線圖3巴西蘇木紅素的紫外可見光掃描圖譜;圖4巴西蘇木紅素高效液相色譜圖。具體實施例方式下述實施例及藥效實驗資料使本發明所說的巴西蘇木紅素的製備及其用途得以證實，同時又不應將下列實施例看作是對本發明的限制。實施例1:取蘇木0.5公斤用其重量6倍的80%乙醇回流提取1次，每次1小時。將提取液減壓，溫度45。C下濃縮，回收乙醇，乾燥，稱重。加甲醇溶解，拌入聚醯胺裝柱，然後分別用4倍柱體積的水和4倍柱體積的90%乙醇洗脫，收集後一部分洗脫液。將收集的洗脫液在3(TC溫度下減壓濃縮，減壓乾燥，得到巴西蘇木紅素。採用高效液相色譜法進行測定，巴西蘇木紅素含量為80%左右。實施例2:取蘇木0.5公斤用藥材重量的15倍80%乙醇回流提取2次，每次3小時。將提取液濃縮回收乙醇，拌矽膠裝柱，用6倍柱體積的乙醇-氯仿(20:80)洗脫，收集洗脫液。將收集的洗脫液在60'C溫度下減壓濃縮，沉澱物常壓乾燥，得到巴西蘇木紅素。巴西蘇木紅素採用高效液相色譜法進行測定，巴西蘇木紅素含量為90%左右。實施例3:取蘇木0.5公斤用其重量10倍的95%乙醇回流提取，回流溫度80。C，提取3次，每次1小時。將提取液在減壓，溫度在5(TC濃縮，回收乙醇，加水，用石油醚萃取，萃取物常壓濃縮，得到巴西蘇木紅素。巴西蘇木紅素採用高效液相色譜法進行測定，巴西蘇木紅素含量為92%左右。在藥劑應用上就是將巴西蘇木紅素單獨地或者加入複方中以常規的製劑工藝製備成藥劑。其藥劑可以是臨床上能夠使用的各種不同劑型。巴西蘇木紅素測定，採用高效液相色譜法對其進行含量測定。1、試藥與儀器Waters高效液相色譜儀，515泵，996型二極體陣列紫外可見光檢測器。紫外可見光分光光度計(TU-1800PC)。1/100000分析天平。巴西蘇木紅素(Brasilein,C16H1205.分子量284)對照品清華大學藥物藥理研究室自製(批號030716)，高效液相色譜儀標定，純度98%。其佘試劑均為分析純。(1)對照品溶液的製備精密稱取巴西蘇木紅素適量，加甲醇製成0.34mg/ml的對照品液。(2)對照品最大吸收峰的確定取對照品液，在TU-1800PC紫外可見分光光度計上進行光譜掃描，掃描範圍為200-600nm，掃描圖譜如附圖2所示。由圖中得知，巴西蘇木紅素最大吸收波長為446nm。(3)色譜條件色譜柱HypersilODS柱(100X4.6誦i.d.5m中國科學院大連化學物理研究所)；預柱0DS柱，柱溫22°C(室溫)，流動相乙腈-水(20:80)，流速lml/min，檢測波長446皿。進樣量IOW。(4)標準曲線製做取上述對照品液，分別進樣2，4，6，8，10，以峰面積為縱座標(Y)，以樣品質量為橫座標(X)，做標準曲線，並求線性關係如下tableseeoriginaldocumentpage6其線性圖見附圖2。藥效實驗例l:對小鼠腦組織的抗氧化作用觀察本發明巴西蘇木紅素對小鼠腦內MDA(丙二醛)生成的抑制作用。本發明所用巴西蘇木紅素，批號030716。用時以生理鹽水配製成所需濃度。實驗所用動物為雄性二級ICR小鼠，非近交系封閉群，北京維通利華實驗動物中心提供，體重為18-22g。實驗室室溫20-22。C，相對溼度40%60%，換氣扇通氣，自然光源12h/日，籠養，每籠10隻，每三日清掃籠舍一次。取正常小鼠，處死後取腦，加入生理鹽水做勻漿液(與腦比例為5:1)。4'C冰箱靜置5分鐘，取上部均勻混濁液。每管加入腦組織液150uL，加入不同濃度藥液50ul，37°C水浴孵育30分。依次加入畫DS0.lml，50%冰醋酸硫代巴比妥酸液0.5ml和1%鹽酸液2ml。沸水浴15分鐘，取出後冷水置10分鐘，1500轉離心15分鐘，取上清於532nm處測吸光度A值。每組做三個平行管。所得數據經EXCEL軟體處理。組間t檢驗。本試驗巴西蘇木紅素給藥終濃度分別為1X10—6g/ml,1X10—5g/ml，1X10、/ml。本試驗空白對照為等體積生理鹽水.陽性藥對照為抗壞血酸，北京芳草醫藥化工製藥公司生產，批號010621。實驗終濃度為1X10—3g/ml。本試驗數據均以Excel軟體處理。其數據見下表l。表1:巴西蘇木紅素體外對小鼠腦MDA生成的影響(x土s)tableseeoriginaldocumentpage6與生理鹽水組相比，*P<0.05，**P<0.01。n=3本實驗結果顯示，巴西蘇木紅素體外有較強地抑制缺糖缺氧腦組織MM生成的作用，最低有效濃度為1X10—5g/ml。提示巴西蘇木紅素具有一定的抗氧化的的作用。藥效實驗例2:對小鼠腦膜血流量的影響觀察本發明巴西蘇木紅素對小鼠腦膜血流量的作用。巴西蘇木紅素，批號030716。用時以生理鹽水配製成所需濃度。試驗動物為雄性ICR小鼠，非近交系封閉群，體重18-22g，由北京維通利華實驗動物中心提供。實驗室室溫20-22°C，相對溼度40%60%，換氣扇通氣，自然光源12h/日，籠養，每籠5隻，每三口清掃籠舍一次。取小鼠烏拉坦(1.0g/kg)麻醉後，固定頭部，切開皮膚，於大腦皮質運動區(APL2)安置雷射探頭(MDL-1型多功能雷射多譜勒分析儀，天津南開大學生產)，待穩定5-10分鐘後開始測試腦血流，記錄給藥前後腦膜血流量的變化。本試驗觀察指標及指標表達所測結果直接經MDL軟體處理，腦膜血流量以KHz(千赫茲)表示，腦膜血流量增加百分值[二(給藥後血流量-給藥前血流量)/給藥前血流量]。本試驗給藥劑量分別為15mg/kg，5mg/kg;給藥途徑為尾靜脈給藥；給藥體積為0.05ml/10g小鼠。本試驗空白對照為等體積生理鹽水，陽性藥對照為腎上腺素注射液，10mg/ral。上海天豐製藥廠生產，批號020601，小鼠用量為0.01mg/kg。本試驗數據均以Excel軟體處理。其數據見下表2、3。表2:巴西蘇木紅素對正常小鼠腦血流量的作用(x士s)_^J1腦血流量(KHz)—(mg/kg)~5i^^15(分鐘)與同時間對照組相比，P<0.05。n=5表3:巴西蘇木紅素對正常小鼠腦血流量增加百分比值O(士s)劑量腦血流量增加百分比值(％)tableseeoriginaldocumentpage7巴西蘇木502.5±11.38±13.99±17.86±17.46±紅素6.4712.7110.75*12.33*11.32*巴西蘇木2.507.30±2.26±7.57±20.15±29.61±_15.08.465.65_14.34*33.2*，同時間對照組相比，*P〈0.05，P<0.01。n=5^實驗結果顯示，巴西蘇木紅素對小鼠腦膜血流量有明顯增加的作用。一般在給藥後1分鐘即有腦血流升高，5-15分鐘腦血流升高明顯；表明巴西蘇木紅素對腦血管有直接地擴張作用，提示對於腦缺血及其血管性痙攣所引起的疾病有較好的作用。藥效實驗例3:對紅細胞膜Na+-K+ATP酶活性的影響本發明所用SD大鼠，非近交系封閉群，體重250-270g。購自北京維通利華實驗動物技術公司。實驗室室溫20-22i:，相對溼度40%60%，換氣扇通氣，fi然光源12h/日，籠養，每籠5隻，每三H清掃籠舍一次。本發明所用巴西蘇木紅素，批號030716。陽性對照藥為去乙醯毛花苷注射液，0.4mg/2ml，上海旭東海普藥業有限公司，批號021001。752紫外可見光分光光度計。取大鼠10%烏拉坦麻醉，腹主動脈取血，肝素抗凝，分離紅細胞，用1Oramol/LTris-HCl緩衝液破紅細胞膜，離心(15000轉/分，6分鐘)去上清。得紅細胞膜液。以蒸餾水作空白，以白蛋白作標準，測定紅細胞膜液的蛋白含量。將紅細胞膜液濃度定在0.l-1.0mg/ml範圍內，每管加入樣品2ml，依次加入不同濃度的藥物血0.4ml，加入Mg"和Na+,K+液，37。C預熱5分鐘，加入ATP0.4ml，37'C振蕩30分鐘，4000轉離心3分鐘，取上清測定Pi含量(張均田。現代藥理實驗方法。第一版，北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社。1998:1015)。以單位時間內Pi的變化值反應ATP酶活性。Na+-K+ATP酶活性=總ATP酶活性-Mg2+ATP酶活性。每樣本做三個平行管。試驗結果見下表4:表4:對大鼠紅細胞膜船+-1(+ATP酶活性的影響(x土s)藥物終濃度總ATP酶活性Mg2+ATP酶活性Na+_K+ATP酶活性(ug/ml)(腿olPi/mg.h)(,olPi/mg.h)(,olPi/mg.h)生理鹽水等體積0.801±0.0170,31±0.0180.519±0.048乙醯毛花苷10.401士0.0230.289±0.0130.109±0.034**巴西蘇木紅吝10.709±0.0230.393±0.0160.316±0.028**累巴西蘇木紅素0.50.697±0.0180.310±0.0230.402±0.045*與生理鹽水組相比，*P〈0.05，**P<0.01。n=3巴西蘇木紅素能明顯抑制Na+-K+ATP酶活性，在腦缺血再灌過程中可以減少腦組織的能量代謝，保護祌經原。藥效實驗例4:對小鼠體內血栓形成的影響試驗動物為雄性ICR小鼠，非近交系封閉群，體重18-22g，由北京維通利華實驗動物中心提供。實驗室室溫20-22。C，相對溼度40%60%，換氣扇通氣，自然光源12h/日，籠養，每籠10隻，每三日清掃籠舍一次。本發明所用巴西蘇木紅素，批號030716。陽性對照藥為阿斯匹林，25mg/片，北京市曙光製藥廠生產，批號030205。752紫外可見光分光光度計。取小鼠隨機分組，腹腔給預不同劑量的藥物，給藥後半小時，每隻小鼠尾靜脈注射血栓形成誘導劑(0.7mg去甲腎上腺素，2.5mg二磷酸腺苷/10ml),給藥體積0.lml/10g體重。記錄觀察從注射誘導劑後5分鐘內小鼠的死亡情況。計算各組死亡百分率(死亡數/總數X100y。)。試驗結果見下表5:表5:對小鼠體內血栓形成的影響(x土s)tableseeoriginaldocumentpage9與生理鹽水組相比，*P<0.05，**P<0.01。巴西蘇木紅素能明顯抑制體內血栓誘導劑所致的小鼠死亡，並有一定的量效關係，表明，巴西蘇木紅素有抗體內血栓形成的作用。權利要求1.巴西蘇木紅素在製備治療腦內過氧化物過多所引起疾病的藥物中的應用。全文摘要巴西蘇木紅素的新用途，涉及一種以蘇木為原料製備的巴西蘇木紅素醫藥方面的新用途。具體地說，巴西蘇木紅素在製備治療腦缺血或腦出血，腦組織過氧化物升高並由此引起的腦功能改變疾病的藥物中應用。經實驗研究表明，巴西蘇木紅素具有抗氧化，保護腦神經原，增強腦血流，抑制紅細胞膜Na-KATP酶活性的作用。對於腦缺血再灌注引起的腦組織損傷有明顯的作用。在治療上述疾病時，以巴西蘇木紅素為活性成分，單獨使用或與其他藥物配合製備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物。文檔編號A61P43/00GK101301286SQ20081000812公開日2008年11月12日申請日期2004年3月5日優先權日2004年3月5日發明者怡丁,杜力軍,偉王,王如峰,趙玉男,邢東明申請人:清華大學