一種食用菌菌種冷凍保藏用保護劑及使用方法
2023-05-23 22:29:21
專利名稱：一種食用菌菌種冷凍保藏用保護劑及使用方法
技術領域：
本發明涉及一種食用菌菌種冷凍保藏用保護劑的配方及其使用方法。在菌種冷凍之前加入該保護劑，之後再進行冷凍低溫保藏，當復水時用復水保護劑進行復水。通過該保護劑可有效防止低溫凍結對食用菌菌種細胞造成的傷害，明顯提高菌種的存活率。
背景技術：
近年來，食用菌菌種保藏方法發展迅速。已由傳統的繼代培養發展到基質保藏、冷凍乾燥保藏、液氮超低溫保藏等新方法。新方法除了具有其各自優點外，也存在一些問題。 例如，液氮超低溫保藏法是目前食用菌菌種保藏時間最長，效果最好的方法，但該法對設備要求高，目前國內僅有幾家菌種保藏機構採用該方法。又如真空冷凍乾燥保藏法，該方法僅適用於保藏食用菌孢子，不適於保藏菌絲體，通常不用於食用菌菌種的保藏。而基質保藏法雖簡便易行，但保藏時間相對較短，基質易發生腐敗汙染等問題，限制了其推廣應用。因此找到一種簡便易行、保藏效果好、時間長且適用於食用菌菌種的方法，成為食用菌菌種保藏工作的重點。低溫冷凍保藏法是指將食用菌菌絲體添加保護劑後，冷凍在-15 -40°C的冰箱中。該法可用於食用菌菌種的長期保藏，簡便易行，採用家用冰箱冷凍室即可完成，適合小型食用菌生產廠和普通菇農戶的使用，適用範圍廣泛。採用該法值得關注的是，由於食用菌菌絲體細胞在低溫凍結過程中會受到外界惡劣環境的影響，使得菌種存活率會受影響。目前的現有研究表明，一些種類的食用菌菌絲體在添加適當保護劑的前提下，進行冷凍保藏其存活率在40%左右，有一些食用菌如平菇、香菇，其存活率能達90%，而像網脈木耳、茶樹菇、靈芝菌絲生長環境要求高的食用菌，其成活率則在70%左右。
發明內容
為了解決低溫冷凍保藏法在保藏食用菌菌種方面存在的不足，本發明提出了一種食用菌菌絲體低溫冷凍保藏用保護劑的配方及其使用方法。本發明採用的技術方案是低溫冷凍前保護劑的配製按照下列的組分和濃度配製，濃度為8%的蔗糖溶液、(體積比)的甘油水溶液、0. 03%的穀氨酸鈉溶液、10%的脫脂乳。將配製好的溶劑115°C滅菌20分鐘後備用。冷凍後復水保護劑溶液配製按下面的配方葡萄糖1%、蛋白腖0.2%、維生素^0.01^,1151:滅菌20分鐘後備用。以上試劑均以蒸餾水為溶劑。
保護劑在冷凍過程中的使用方法(1)菌種的前處理試管斜面菌種，用接種刀無菌條件下將斜面菌種切成黃豆粒大小的菌塊，用接種環挑取2 3塊(除去培養基)，置於裝有冷凍前保護劑的安瓿瓶中，保護劑的添加量以剛好淹沒菌種塊為宜。液體菌種，在無菌條件下離心或過濾收集菌絲球，將菌絲球用無菌水衝洗1-4次，衝洗後再離心或過濾收集菌絲球，將菌絲球置於裝有冷凍前保護劑的安瓿瓶中， 保護劑的添加量以剛好淹沒菌絲球為宜。(2)菌種的冷凍處理將裝有冷凍前保護劑的食用菌菌種在4°C冰箱中預冷15分鐘左右，再放置到-15 -20°C的低溫中進行冷凍保藏。(3)菌種的復水處理；復水時，將安瓿瓶取出後立即置於37°C水浴中，快速解凍，融化的菌絲加入復水保護劑，25 °C培養M小時後，再轉接到培養基上培養。
具體實施例方式下面通過實施例對本發明進一步詳細描述。實施例菌種平菇菌種(南抗5號)，由天津市林業果樹研究所提供。平菇菌種存活率的測定方法平菇菌種存活率=冷凍後的菌株成活個數/冷凍前菌株的個數。冷凍前保護劑的配製按照下列組分和濃度配製，濃度為8%的蔗糖溶液、(體積比)的甘油水溶液、 0. 03%的穀氨酸鈉溶液、10%的脫脂乳。冷凍後復水保護劑的配製按下面的配方葡萄糖1%、蛋白腖0.2%、維生素B1O. 01%。以上試劑均以蒸餾水為溶劑。平菇菌種冷凍保護劑及其在冷凍過程中的使用方法(1)平菇菌種的前處理將平菇試管母種，用接種刀無菌條件下將切成黃豆粒大小的菌塊，用接種環挑取 2 3塊(除去培養基)，置於裝有冷凍前保護劑的安瓿瓶中，保護劑的添加量以剛好淹沒菌種塊為宜。平菇液體菌種，在無菌條件下離心或過濾收集菌絲球，將菌絲球用無菌水衝洗1-4次，衝洗後再離心或過濾收集菌絲球，將菌絲球置於裝有冷凍前保護劑的安瓿瓶中， 保護劑的添加量以剛好淹沒菌絲球為宜。(2)平菇菌種的冷凍處理將裝有冷凍前保護劑的平菇菌種在4°C冰箱中預冷15分鐘左右，再放置到-15 -20°C的低溫中進行冷凍保藏。(3)平菇菌種的復水處理復水時，將安瓿瓶取出後立即置於37°C水浴中，快速解凍，融化的菌絲加入冷凍後復水保護劑，25°C培養M小時後，再轉接到培養基上培養即可。通過培養基培養觀察，平菇菌種的存活率為100%。
權利要求
1.一種食用菌菌種冷凍保藏用保護劑，包括冷凍前保護劑及冷凍後的復水保護劑，其特徵在於冷凍前保護劑有下列組分8%的蔗糖溶液、(體積比)的甘油水溶液、0.03%的穀氨酸鈉溶液、10%的脫脂乳；冷凍後的復水保護劑有下列組分 葡萄糖1%、蛋白腖0.2%、維生素B1O. 01% ； 以上試劑均以蒸餾水為溶劑。
2.如權利要求1所述的一種食用菌菌種冷凍保藏用保護劑，其特徵在於所述的保護劑在菌種冷凍保藏過程中的使用方法如下(1)菌種的前處理試管斜面菌種，用接種刀無菌條件下將斜面菌種切成黃豆粒大小的菌塊，用接種環挑取2 3塊(除去培養基)，置於裝有冷凍前保護劑的安瓿瓶中，保護劑的添加量以剛好淹沒菌種塊為宜。液體菌種，在無菌條件下離心或過濾收集菌絲球，將菌絲球用無菌水衝洗 1-4次，衝洗後再離心或過濾收集菌絲球，將菌絲球置於裝有冷凍前保護劑的安瓿瓶中，保護劑的添加量以剛好淹沒菌絲球為宜；(2)菌種的冷凍處理將裝有冷凍前保護劑的食用菌菌種在4 °C冰箱中預冷15分鐘左右，再放置到-15 -20°C的低溫中進行冷凍保藏；(3)菌種的復水處理；復水時，將安瓿瓶取出後立即置於37°C水浴中，快速解凍，融化的菌絲加入復水保護齊IJ，25 °C培養M小時後，再轉接到培養基上培養。
全文摘要
本發明涉及一種食用菌菌種冷凍保藏用保護劑的配方及其使用方法，冷凍前保護劑配方蔗糖溶液、甘油水溶液、穀氨酸鈉、脫脂乳；冷凍後的復水保護劑配方葡萄糖、蛋白腖、維生素B1。將冷凍前保護劑與食用菌菌種混合，經低溫冷凍保藏後的菌體細胞用復水保護劑進行復水。本發明的食用菌菌種冷凍保護劑及其在食用菌菌種冷凍過程中的使用後，菌株存活率高達100％。
文檔編號C12N1/14GK102533561SQ20101058941
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月15日 優先權日2010年12月15日
發明者喬建軍, 劉連強, 周永斌, 張志軍, 李鳳美, 李淑芳, 訾惠君, 魏雪生 申請人:天津市林業果樹研究所