N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體cd14結合物及其製備方法和應用的製作方法

2023-05-14 18:42:26

專利名稱：N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體cd14結合物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一類N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體⑶14結合物(簡寫為CD14-TPI)，以及這種結合物的製備方法和作為治療白血病藥物的先導化合物的應用。屬於化學生物藥物領域，
背景技術：
白血病是當今世界上死亡率最高的疾病之一，它對人類的健康造成了極嚴重的危害。據中國發布的流行病學統計，我國各地區白血病發病率在各種腫瘤中佔第六位，目前至少有400萬白血病患者，每年新增約4萬名。近年來，由於室內裝修造成的汙染，導致血液 病患者人數急劇增加。白血病是一類造血細胞惡性疾患，好發於青少年，其發病率排在青少 年腫瘤的第一位，所以對人類的危害更為明顯和突出。目前，除了早幼粒細胞白血病以外，對於其它類型的白血病均缺乏特效的治療手段，仍然採用化療的方法來治療這種惡性疾患。化療僅能通過大量殺傷高度增殖的白血病細胞而使患者得到短期緩解，但無法根治這種惡性疾患。且由於目前所用的化療藥物多缺乏特異性，所以毒副作用很大。更棘手的是，大多數復發患者的白血病細胞常常對現有的化療藥物產生耐藥。現在臨床上常用的白血病化療藥物根據藥物的來源和化學結構，分為烷化劑、抗代謝藥、抗癌抗生素、植物類、激素類和雜類等。然而，這些藥物的共同的缺點是選擇性不強，對正常細胞和腫瘤細胞具有幾乎相同的殺傷作用。所以，毒性較大，對骨髓、消化道細胞和生殖細胞也有很強的殺傷作用。據公開號為CN102276581A的專利報導，N-取代四氫吡啶連吲哚化合物(代號為TPI) ( I )具有高效抑制人白血病K562細胞系增殖的活性，但其選擇性不高，對正常細胞有一定的毒性。在一定程度上限制了該類化合物在治療白血病藥物中的應用。為了解決上述問題，近年來單克隆抗體(簡稱單抗)藥物用於治療腫瘤的研究已獲得重要進展，研究表明，單抗藥物對腫瘤相關靶點顯示特異性結合，對腫瘤細胞有選擇性殺傷作用並在動物實驗有顯著的療效。因為單抗有高度特異性，所以單抗藥物將在腫瘤治療中發揮重要作用，研製單抗藥物有巨大的潛力。據文獻報導，編碼為⑶14的單克隆抗體(簡稱單抗⑶14)對人白血病K562等細胞系具有高度特異性，將其與具有高效抑制人白血病K562細胞系增殖活性的N-取代四氫吡啶連吲哚化合物(I )結合，製成TPI與單抗CD14結合的單抗藥物先導化合物(簡稱為⑶14-TPI) (II)，使⑶14-TPI能靶向於特定的腫瘤細胞，大大降低其對正常組織細胞的毒性。為此，單抗藥物先導化合物CD14-TPI (II)有望成為極具臨床應用潛力的抗癌新藥。

發明內容
本發明目的是為了提供一類N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體CD14結合物(簡稱為⑶14-TPI)，⑶14-ΤΡΙ是一類可作為治療白血病的單抗藥物的先導化合物。本發明的第二個目的是為了提供這種N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體⑶14結合物的製備方法。本發明的第三個目的是將⑶14-ΤΡΙ用於製備治療白血病的藥物。該結合物具有高效抑制人白血病Κ562細胞系增殖的生物活性，IC5tl值均明顯低於常規化療藥物5-氟尿嘧啶(5Fu)。CD14-TPI體內急性毒性低，對小鼠正常骨髓細胞的毒性較低。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的本發明提供的具有高效抑制人白血病K562細胞系增殖活性，對小鼠正常骨髓細胞的毒性較低的抗白血病藥物的先導化合物N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體CD14結合物(⑶14-TPI)的結構式如式(II)所示
權利要求
1.N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體CD14結合物，其特徵在於，其結構如式(II)所示
2.根據權利要求I所述的N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體結合物，其特徵在於R2中苯基、苄基、吡啶基和四氫呋喃基中的取代基為C1-C6的烴基、C1-C6的烴氧基、氟、氯、漠、氰!基、硝基、竣基、酷基、擬基和橫酸基中的一種或兩種。
3.權利要求I所述N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體CD14結合物的製備方法，其特徵在於取IOmg式(I )化合物，溶於O. ImL DMSO中；向該溶液中依次加入濃度為O. Imol/L的DCC溶液O. ImL和濃度為2 μ g/mL的⑶140. 05、. 2mL ;然後用生理鹽水將上述混合溶液稀釋至ImL ;37°C反應2(Tl20min，得到式(II)結合物；反應方程式為
4.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於濃度為2μ g/mL的CD14的用量為O.ImL ;37°C 反應 30min。
5.根據權利要求I所述N-取代四氫吡啶鏈吲哚-單克隆抗體CD14結合物，其特徵在於N-取代四氫吡啶鏈吲哚-單克隆抗體結合物應用於製備治療白血病藥物。
全文摘要
本發明公開了一類N-取代四氫吡啶連吲哚-單克隆抗體CD14結合物以及製備方法和應用，屬於化學生物醫藥領域。這種結合物結構如式(Ⅱ)所示在縮合劑DCC的作用下，CD14單抗分子中碳端的胺基酸殘基與N-取代四氫吡啶連吲哚類化合物(Ⅰ)中吲哚環上的仲胺基結合，得到通式為(Ⅱ)的單克隆抗體CD14結合物。式(Ⅱ)結合物能高效抑制白血病K562細胞增殖，其抑制白血病K562細胞增殖的IC50值明顯低於常規化療藥物5-氟尿嘧啶(5Fu)，式(Ⅱ)結合物對小鼠正常骨髓細胞的毒性較低，可用於製備治療白血病的藥物。
文檔編號C07K16/28GK102898523SQ20121040179
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月19日 優先權日2012年10月19日
發明者孫傳文, 肖笛, 李靜, 薛思佳, 李興玉 申請人:上海師範大學