α‑倒捻子素作為磷酸二酯酶4的抑制劑的用途的製作方法

2023-04-22 20:53:26

本發明涉及α-倒捻子素作為磷酸二酯酶4（pde4）抑制劑的新用途及其在製備治療pde4介導的疾病藥物中的應用。

背景技術：

磷酸二酯酶（pdes）通過水解細胞內重要的第二信使環腺苷酸（camp）和環鳥苷酸（cgmp），有效控制細胞內的camp和cgmp濃度，從而調節體內第二信使所傳導的生化作用。它們在視覺、嗅覺、代謝方式、肌肉收縮、記憶、免疫反應、神經傳遞、胞吐作用、細胞生長和分化等生理過程中起重要作用，是藥物設計的重要靶標。

磷酸二酯酶4（pde4）是pde酶家族的一員，主要分布於各種炎症細胞內，肥大細胞、巨噬細胞、嗜酸粒細胞、淋巴細胞和上皮細胞等，可通過抑制pde4的活性，提高細胞內camp濃度將有助於減輕炎症反應對機體的傷害。因此，pde4被認為是一種新型抗炎靶標。目前，pde4抑制劑已被開發成抗炎的藥物，如羅氟司特主要用於肺部的炎症治療，尤其是哮喘和慢性阻塞性肺疾病（copd）。

儘管pde4抑制劑已經顯示了其有益藥理作用，但這類抑制劑存在引起腹瀉、噁心等不良作用。因此，研究新型的特異性抑制劑，克服這些不良反應，就成為pde4抑制劑藥物研究的熱點之一。天然產物是新藥研發先導化合物發現的寶庫，從中尋找具有新型pde4抑制劑，對於研發療效高，副作用小的pde4抑制劑抗炎藥物具有重要意義。

α-倒捻子素是山竹garciniamangostanal.中分離的化學成分，化學結構如下式所示。α-倒捻子素可通過本領域技術人員已知的適當方法制的，一種試例性的製備方法參見中國專利申請公布cn102653533a。

α-倒捻子素目前主要用於抗真菌、抗細菌、抗腫瘤、瘧疾、α-葡萄糖苷酶抑制劑、唾液酸苷酶抑制劑及芳香酶抑制劑。目前尚未有關於α-倒捻子素作為pde4抑制劑的相關報導。

技術實現要素：

本發明一方面涉及α-倒捻子素或其藥學上可接受的鹽作為一種磷酸二酯酶4（pde4）抑制劑的用途。

本發明另一方面提供α-倒捻子素或其藥學上可接受的鹽在製備預防或治療pde4介導的疾病的藥物中的應用。

在一些實施方式中，所述pde4介導的疾病，包括但不限於哮喘和慢性阻塞性肺疾病。

本發明證實了天然產物α-倒捻子素對於磷酸二酯酶的抑制作用，為治療pde4介導的疾病提供良好的前景。

附圖說明

圖1是α-倒捻子素對pde4d2蛋白的抑制作用的曲線圖。

具體實施方式

藥學上可接受的鹽

本發明預期α-倒捻子素的「藥學上可接受的鹽」也具有相同的活性。通常，該鹽例如通過將游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計算量的適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者的混合物中製備。通常，非水性介質如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優選的。酸加成鹽的實例包括無機酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝酸鹽，和有機酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對甲苯磺酸鹽。鹼加成鹽的實例包括無機鹽如鈉、鉀、鈣、銨、鎂、鋁和鋰鹽；以及有機鹼如乙二胺、乙醇胺、n,n-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和鹼性胺基酸鹽。

根據不同的基因編碼，pde4家族可分4種亞型（pde4a，pde4b，pde4c和pde4d），每一個亞型又可分為多種次亞型。其中，pde4d的次亞型包含有pde4d1、pde4d2、pde4d3、pde4d4、pde4d5。

的抑制劑

本發明涉及pde4的抑制劑，所述抑制劑α-倒捻子素或其藥學上可接受的鹽，用於抑制環狀核苷酸、尤其是環狀腺苷酸（camp）向其無活性的5′-單核核苷酸形式轉化。

施用pde4的抑制劑使得camp水平提高所牽涉的生理作用包括：1)廣泛抑制多種免疫組成細胞的活性；2)誘使氣道平滑肌鬆弛；3)抑制平滑肌有絲分裂；和4)對肺神經活性具有有益的調節作用。

介導疾病

術語「pde4介導疾病」，如本文所用，是指任意疾病或其他有害的病況，其中pde4同種型（亞型及次亞型）已知發揮作用，也指那些通過pde4抑制劑治療減輕的疾病。

可以施用α-倒捻子素用於預防或治療其中涉及pde4受體的活性且希望抑制pde4受體活性的任何疾病或由pde4活性介導的疾病狀態（例如其中pde4被過表達或過度活躍的疾病狀態）。這樣的疾病的例子包括但不限於：各種原因導致的急性及慢性（特別是炎症性和變應原誘發的)呼吸道疾病（例如，哮喘、慢性閉塞性肺病等）；皮膚病（特別是增殖性、炎症性及過敏性種類）（例如，乾癬（尋常性）、毒性及過敏性接觸溼疹、特應性皮炎、斑禿及其他增殖性、炎症性及過敏性皮膚病)；與精神異常相關的疾病（例如，躁鬱病、分裂症、焦慮症等)；全身或局部關節病（例如，變形性膝關節症、關節炎等）；胃腸道區域的廣泛化炎症（例如，克羅恩(crohn)病）；上呼吸道（咽喉腔、鼻）區域及相鄰區域（副鼻腔、眼）的過敏性或慢性、起因於不適當的免疫反應的疾病（例如，過敏性鼻炎/副鼻腔炎、慢性鼻炎/副鼻腔炎、過敏性結膜炎）等。

α-倒捻子素對pde4d2蛋白活性的抑制試驗：

先將表達質粒pet15b-pde4d2（催化結構域，86-413）轉化入大腸桿菌（e.coli）菌株bl21（codonplus）中。攜帶重組質粒的e.coli細胞在lb培養基中在37℃下生長至a600＝0.7，然後加入0.1mm異丙基-β-d-硫代吡喃半乳糖苷（iptg）誘導表達，並在16℃培養20-40h。重組的pde4d2催化結構域通過ni-nta親和柱純化。經十二烷基磺酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳（sds-page）測試可知pde4d2（催化結構域）蛋白質的純度達到95%以上。

α-倒捻子素和含有重組蛋白pde4d2、20mmtris-hcl（ph7.5）、2mm二硫蘇糖醇(dithiothreitol)、10mmmgcl2以及20,000-30,000cpm的3h-camp在室溫下孵育15分鐘,然後分別用0.2mznso4和ba(oh)2中止反應，然後利用perkinelmer2910計數儀測量上清液中未反應的3h-cgmp，每個分子至少測量三次，對pde4d2蛋白活性抑制的ic50值通過濃度測試及非線性回歸，計算獲得。結果見圖1。