一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法
2023-04-23 03:05:11 1
一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法
【專利摘要】本發明公開一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法，包括在斜面培養基上進行孢子培養、在種子罐培養基上進行菌種培養和在發酵罐培養基上進行發酵三個步驟，並對各步驟培養或發酵參數進行了優化。與現有技術相比，本發明優化了活躍鏈黴菌的活化，通過不同階段培養活躍鏈黴菌，提高其生物活性。那西肽收率提高60％以上。
【專利說明】一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於微生物發酵領域，涉及一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法。
【背景技術】
[0002]那西肽是一種帶有5個座哇環的多肽類抗生素，那西肽為黃綠色物質，呈粉末狀或細針狀結晶，熔點為310?320°C (伴隨分解)。那西肽可溶於氯仿、毗陡、二甲基酸胺、二甲基亞礬，微溶於甲醇，乙醇、乙酸乙酯和苯，不溶於水。那西肽以其相對安全性及良好的應用效果符合當前人們對飼料添加劑的要求，是一種比較理想的飼用抗生素換代品。目前，歐盟和日本已批准並廣泛使用。
[0003]那西肽是用微生物培養方法生產的，那西肽產生菌主要有活躍鏈黴菌(streptomyes actuosus)、抗生素鏈黴菌(S.antib1tics)和青灰色鏈黴菌(S.glaucogriseus),其中以活躍鏈黴菌為最好。
[0004]但是，現有的微生物發酵方法生產那西肽，生產成本高、產率低。
【發明內容】
[0005]鑑於此，本發明目的在於提供一種產率高的那西肽生產方法。
[0006]為解決以上技術問題，本發明提供的技術方案是，提供一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法，包括以下步驟:
[0007]I)使用無菌接種針挖取適量砂土接種至斜面培養基上培養數天，向培養成熟的孢子斜面加入無菌水，使用無菌接種針輕輕刮下孢子；培養溫度為28°C，溼度40-60% ；
[0008]2)向種子罐培養基上接種步驟I)製備得到的孢子繁殖菌體，接種量22億，通氣比0.9，罐壓0.04Mp，溶氧控制在30%，當菌濃達到30%進行移種，移種周期25h，移種pH值為6.8 ;培養溫度30。。，
[0009]3)向發酵罐培養基上接種步驟2)繁殖的菌體，接種量10%%，通氣比0.8，罐壓0.04Mp,全程流加氨水來調節pH值並補充氮源,通過調節攪拌轉速和通氣比來控制溶氧，放罐周期為180-220h，發酵結束，即得到那西肽混懸液。
[0010]進一步地，所述斜面培養基的組分為:可溶性澱粉2.lg/100mL,K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL, FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL,KNO30.02g/100mL,瓊脂 2.0g/100mL。
[0011]進一步地，所述發酵罐培養基的組分為:可溶性澱粉6.0g/100mL,黃豆餅粉 3.5g/100mL, (NH4) 2S041.0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL,NaCl0.10g/100mL，豆油 0.8g/100mL，消沫劑 0.05g/100mL。
[0012]進一步地，所述種子罐培養基的組分為:葡萄糖2g/100mL，黃豆餅粉2.5g/100mL,(NH4)2SO40.2g/100mL, MgSO40.03g/100mL，碳酸鈣 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL，豆油 0.3g/100mL,消沫劑 0.02g/100mL。
[0013]與現有技術相比，上述技術方案中的一個技術方案具有如下優點:
[0014]1、本發明優化了活躍鏈黴菌的活化，通過不同階段培養活躍鏈黴菌，提高其生物活性。
[0015]2、本發明針對不同階段，配置了更加專一的培養基，為活躍鏈黴菌的生長提供更加合理的碳源、氮源、以及金屬離子，充分保障菌體的正常生產和代謝。
[0016]3、本發明方法那西肽收率提高60%以上。
【具體實施方式】
[0017]實施例1
[0018]本實施例所用活躍鏈黴菌來源為市購。
[0019]按照以下配方製作培養基:斜面培養基、種子罐培養基和發酵罐培養基。
[0020]斜面培養基:可溶性澱粉2.1g/1OOmL, K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL,FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL, KNO30.02g/100mL，瓊脂 2.0g/lOOmL ；
[0021]種子罐培養基:葡萄糖2g/100mL，黃豆餅粉 2.5g/100mL, (NH4)2SO40.2g/100mL,MgSO40.03g/100mL，碳酸鈣 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL，豆油 0.3g/100mL,消沫劑0.02g/100mL ；
[0022]發酵罐培養基:可溶性澱粉6.0g/100mL,黃豆餅粉3.5g/100mL,(NH4)2SO4L 0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL, NaCl0.lOg/lOOmL,豆油0.8g/100mL,消沫劑 0.05g/100mL。
[0023]使用無菌接種針挖取適量砂土接種至斜面培養基上培養8天，向培養成熟的孢子斜面加入無菌水，使用無菌接種針輕輕刮下孢子；培養溫度為28°C，溼度40-60%。
[0024]向種子罐培養基上接種步驟I)製備得到的孢子繁殖菌體，接種量22億，通氣比
0.9，罐壓0.04Mp，溶氧控制在30%，當菌濃達到30%進行移種，移種周期25h，移種pH值為6.8 ;培養溫度30。。。
[0025]向發酵罐培養基上接種步驟2)繁殖的菌體，接種量10 % %，通氣比0.8，罐壓
0.04Mp,全程流加氨水來調節pH值並補充氮源,通過調節攪拌轉速和通氣比來控制溶氧，放罐周期為180-220h，發酵結束，即得到那西肽混懸液。檢測那西肽效價為2600U/mL，相比與現有技術1620U/mL提高60.5 %。
【權利要求】
1.一種利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法，其特徵在於，包括以下步驟: 1)使用無菌接種針挖取適量砂土接種至斜面培養基上培養數天，向培養成熟的孢子斜面加入無菌水，使用無菌接種針刮下孢子；培養溫度為281，溼度40-60% ； 2)向種子罐培養基上接種步驟1)製備得到的孢子繁殖菌體，接種量22億，通氣比0.9，罐壓0.041？，溶氧控制在30%，當菌濃達到30%進行移種，移種周期25匕移種邱值為6.8 ；培養溫度30。。， 3)向發酵罐培養基上接種步驟2)繁殖的菌體，接種量10% %，通氣比0.8，罐壓0.041^),全程流加氨水來調節邱值並補充氮源，通過調節攪拌轉速和通氣比來控制溶氧，放罐周期為180-2201！，發酵結束，即得到那西肽混懸液。
2.根據權利要求1所述的利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法，其特徵在於，所述斜面培養基的組分為:可溶性澱粉2.1^/1001111, 1(3^040.08^/1001111, 1叻0辦06^/1001111,？63040^ 003^/1001111, ^010.03^/1001111,謂0辦 02^/100111[，瓊月旨 2.0^/1001111。
3.根據權利要求1所述的利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法，其特徵在於，所述發酵罐培養基的組分為:可溶性澱粉6.08/1004，黃豆餅粉3.58/1004，(^4)28041.0^/1001111, 030031? 0^/1001111, ^^040.08^/1001111, ^010.10^/1001111,豆油0.8^/1001111,消沫劑 0.(^/則齓。
4.根據權利要求1所述的利用活躍鏈黴菌發酵生產那西肽的方法，其特徵在於，所述種子罐培養基的組分為:葡萄糖28/1000匕黃豆餅粉2.5^/1001111,(順2^/100^1,.1^8040.03^/100111[，碳酸鈣(^⑶辦 4^/1001111, ^^040.02^/100111[，豆油 0.3^/1001111,消沫劑.0.02^/1001111。
【文檔編號】C12R1/465GK104388506SQ201410708099
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月27日 優先權日:2014年11月27日
【發明者】金京勳 申請人:蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司