一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒的製作方法

2023-04-24 18:04:36 1

專利名稱：一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型是涉及生物應用技術領域，特別是涉及一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒。
背景技術：
乙腦病毒引起流行性乙型腦炎，是由蚊蟲傳播的一種急性傳染病。乙腦的病死率和致殘率高，是威脅人群特別是兒童健康的主要傳染病之一。夏秋季為發病高峰季節，流行地區分布與媒介蚊蟲分布密切相關，我國是乙腦高流行區，在20世紀60年代和70年代初期全國曾發生大流行，近年來維持在較低的發病水平。近幾年全國乙腦報告病例數每年在5000 10000例之間，但局部地區時有暴發或流行。而全世界病例數每年高達50000例，死亡數15000例。目前對乙型腦炎檢測的主要方法是對血液樣本進行採集檢測抗體，在膠體金的檢測方法中，有檢測乙型腦炎IgG的報導，但使用口腔液拭子進行IgG檢測尚未有相關報導。和傳統試劑相比，使用口腔液拭子進行IgG檢測具有採樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測人員的工作量的優點。
發明內容本實用新型的目的是提供一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒，具有採樣容易、操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現場檢測等優點。本實用新型提供一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒，其特徵在於塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有 標記乙型腦炎病毒E基因重組抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素(NC)膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測線T線(5)和質控C線(6)，檢測線T (5)為包被在NC膜上的抗人IgG抗體，質控(C)線(6)為包被在NC膜上的抗乙型腦炎病毒E基因重組抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試紙。所述的一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒，其特徵在於其抗體的包被方法為:以0.0lM pH7.2磷酸鹽緩衝液(PBS)將抗人IgG抗體配製成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數進行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被抗乙型腦炎病毒E基因重組抗原的抗體作為C線，劃線後將NC膜在乾燥間，溫度20-25°C，溼度小於30%,乾燥2-5小時。將標記好的乙型腦炎病毒的E基因重組抗原的膠體金顆粒製成膠體金墊，與包被抗體的硝酸纖維素膜和其他輔料製備成試紙條。所述的一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒，其特徵在於其檢測方法為:用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時5到6秒，然後，從右慢慢壓拭到左，用時5到6秒，反覆3次，然後反轉口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重複上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準；壓拭後，立即將口腔拭子浸入樣本緩衝液中，先後讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解並在NC膜上層析，然後用肉眼直接觀察在15分鐘內C、T線的出現情況，並判定檢測結果。本實用新型的有益效果是:提供一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒。和傳統試劑相比，使用口腔液拭子進行IgG檢測具有採樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測人員的工作量的優點。

:圖1使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒試紙結構示意圖。附圖符號說明:1:上樣墊；2:膠體金墊；3:NC膜；4:吸樣墊5:檢測線Tl ；6:質控(C)線；7:塑料支撐板。圖2採集口腔液拭子結構示意圖附圖符號說明:1:尼龍塾糹而;2:手持立而。
具體實施方式
實施例:製備乙型腦炎的檢測試劑盒試紙將乙型腦炎病毒E基因重組抗原使用膠體金標記，製成膠體金墊，以0.0lM ρΗ7.2磷酸鹽緩衝液(PBS)將抗人IgG抗體配製成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以
1-1.5ul/cm的參數進行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被乙型腦炎病毒E基因重組抗原的抗體作為C線，劃線後將NC膜在乾燥間，溫度20-25°C，溼度小於30%，乾燥2_5小時。將膠體金墊和包被好的NC膜和其他輔料裝配成試紙條。將已確診乙型腦炎IgG抗體陽性的病人作為待檢者，將50例已確診乙型腦炎IgG抗體陰性的健康人作為對照組待檢者。用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時5到6秒，然後，從右慢慢壓拭到左，用時5到6秒，反覆3次，然後反轉口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重複上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準；壓拭後，立即將口腔拭子浸入樣本緩衝液中，先後讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內液體即為口腔液樣本,將試紙條平放,在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解並在NC膜上層析，然後用肉眼直接觀察在15分鐘內C、T線的出現情況，並判定檢測結果。檢測結果的解釋:如果對照區內的對照線沒有出現，檢測結果無效，如果僅在對照區出現一條線對照線，結果為陰性。如果檢測線和對照線都出現，即試紙上出現兩條線，則檢測結果為陽性。通過臨床血清檢測，IgG為陽性的樣本和IgG為陰性的樣本，本試劑檢測和臨床診斷結果完全一致。臨床檢測表明本試劑的性能和現有診斷手段相比無顯著性差異，適合用於臨床檢測。
權利要求1.一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒，其特徵在於塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標記乙型腦炎病毒E基因重組抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測線T線(5)和質控C線(6)，檢測線T (5)為包被在硝酸纖維素膜上的抗人IgG抗體，質控(C)線(6)為包被在硝酸纖維素膜上的乙型腦炎E基因重組抗原的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4) ·形成試紙。
專利摘要本實用新型是涉及生物應用技術領域，特別是涉及一種使用拭子採集體液檢測乙型腦炎的檢測試劑盒，採用拭子採集口腔液，用膠體金標記乙型腦炎病毒E基因重組抗原，包被抗人IgG抗體實現對口腔液中抗乙型腦炎病毒IgG抗體的檢測。具有操作簡便、反應快速、敏感性高、特異性強、適合現場檢測和經濟實用等優點。
文檔編號G01N33/558GK203101392SQ20122059671
公開日2013年7月31日 申請日期2012年11月12日 優先權日2012年11月12日
發明者祁軍, 劉寅, 李晶, 王馨, 劉振宇, 於佳 申請人:中華人民共和國天津出入境檢驗檢疫局