一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑及製備方法
2023-04-27 13:41:11
一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑及製備方法
【專利摘要】本發明提供一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑及製備方法，由冬蟲草、西洋參、鱉甲、穿山甲、石斛、虎仗、砂仁、大黃、黃芪、黃連、黃芹、佛手、金錢草、白芍、三七、桑椹子、山藥、黃精等藥物組成，分別粉碎成100~200目細粉，混合均勻即可。本發明中藥製劑由純天然藥物配製而成，處方簡單，經藥效試驗，配伍的協同效果確切，對肝損傷有很好的治療作用，毒副作用小，臨床症狀消失迅速，無任何毒副作用，治療周期短，治癒後不反彈，治療成本低，同時減輕患者經濟負擔，患者恢復正常後，可以停藥而不易復發。
【專利說明】一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑及製備方法
【技術領域】
[0001]本發明提供一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑及製備方法，是用於肝纖維化和肝硬化治療的中藥組合物，屬於中醫製藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]全世界每年有100餘萬患者死於肝病，其中，1/3在中國，我國是肝病流行較嚴重的國家。病毒性肝炎引起的慢性肝損傷在我國最為常見。研究肝損傷肝纖維化的發生機理以及尋找有效的治療措施是國內外學者共同研究的熱門課題。
[0003]肝纖維化，是由於肝細胞受到炎性損傷後，其脂質過氧化產物沉積、炎性浸潤細胞所分泌的各種細胞因子等刺激肝星狀細胞活化，導致細胞外基質大量增生沉積，纖維結締組織異常增生，降解和產生之間無法達到平衡，從而引起肝纖維化，肝纖維化是慢性肝病最重要的病理特徵，也是慢性肝炎、肝硬化等進一步發展、惡化的重要環節，此時如果病因消除並經適當治療，纖維化尚可被逐漸吸收，是可復性病變，抗纖維治療可阻止乃至逆轉纖維化進程，故一直受到高度重視。肝硬化是嚴重危害人類健康的常見病之一，目前我國的發生率仍保持在較高水平.目前有很多疾病包括肝病難以根治，尤其是酒精、病毒感染等原因所致的肝纖維化乃至肝硬化，越來越多的對人類健康造成了威脅。
[0004]一般認為肝纖維化如果發展成為肝硬化後期則是難以恢復的了。但是，在臨床上難以將兩者截然分開，因為慢性肝病由肝纖維化到肝硬化是一個連續的發展過程。近年的基礎和臨床研究也表明，如果能給予有效的病因治療，或能直接抑制細胞外基質的合成和或促進其降解，則己經形成的肝纖維化甚至早期肝硬化也是可以逆轉的。所以在纖維化的發生的過程中或者是在肝硬化的早期階段我們渴望可以尋找到有效的藥物或者方法，對抗肝纖維化或者減輕其症狀。在纖維化過程中，一些細胞因子如轉化生長因子(TGF-β )，血小板衍生生長因子(PDGF)，金屬基質蛋白酶組織抑制物-Ι(--ΜΡ-Ι)等是肝纖維化的重要介質，TGF-β升高使纖維化程度加重，--ΜΡ-1可使形成的纖維降解，如能及時調節或阻斷肝纖維化，則肝纖維化可以逆轉，細胞外基質的沉積和降解也是肝纖維化形成過程中很重要的因素。谷丙轉氨酶(ALT)和穀草轉氨酶(AST)和鹼性磷酸酶(AKP)的含量是臨床最常用的檢測肝功能的指標，它們的含量的高低又能反映肝損傷的程度。a-平滑肌肌動蛋白(α -SM)在成纖維細胞不表達，是肌成纖維細胞形成的標誌，也是肝損傷最顯著的特徵，成纖維細胞受損傷等刺激後可以向肌成纖維細胞轉化從而表達大量的a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)o
[0005]目前，現代醫學尚缺乏理想的治療藥物，而肝纖維化的中醫藥防治研究是我國近年來中西醫結合防治慢性肝病研究的一大熱點和亮點。多種中藥包括單味藥在體內和體外表現出肝保護功能，比如、三七、黃芪、山藥、西洋參等。冬蟲夏草具有補虛損、益精氣。在現有技術中，冬蟲夏草與上述藥方沒有合用治療肝纖維化的文獻報導，亦沒有這些藥方的提取物與冬蟲夏草合用可以預防治療肝纖維化肝硬化的報導。
[0006]常用保肝抗肝損傷藥甘利欣有較強抗炎的作用和保肝、護肝降酶的療效，對於各型肝炎及各種原因引起的轉氨酶升高都有很好的療效。但會出現納差、噁心、嘔吐、腹脹，以及皮膚瘙癢、蕁麻疹、口乾和浮腫，心腦血管系統有頭痛、頭暈、胸悶、心悸及血壓升高等主要不良反應。
[0007]四氯化碳(Carbon tetrachloride , CCl4)中毒性肝損傷動物模型是一種經典的肝纖維化造模方法，最早最廣泛地用於肝纖維化、肝硬化的實驗研究上，CCl4誘導的肝纖維化動物模型在形態學、病理生理學等方面與人肝纖維化相似，如二者有肝細胞壞死後的再生；實驗動物上引起的中央周圍肝壞死，纖維增生，假小葉內以竇隙為主，最後產生結節性肝硬化，有時可出現更嚴重的結節性肝硬化，與人在慢性肝病發展為肝硬化時很相似。現己廣泛用於肝纖維化發生的分子機制，血清學標誌物和組織病理的相關性以及抗纖維化物質的藥效學評價研究中。通過CCl4造模的不同時間，可建立早期肝纖維化模型、早期可逆性的肝硬化模型、有部分可逆性的肝結節性硬化。
【發明內容】
[0008]本發明的目的在於提供一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑，用於肝纖維化及肝硬化的治療，具有很好的治療作用。
[0009]本發明提供的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑的製備方法，適用於工業化生產。
[0010]本發明提供的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑，其特徵在於是由以下藥物按重量份數比製成的:
冬蟲草I~5，西洋參10~15，鱉甲15~20，穿山甲5~10，石斛15~20，虎仗20~25，砂仁10~15，大黃10~15，黃芪6~10，黃連6~10，黃芹10~15，佛手15~20，金錢草25~30，白芍20~25，三七3~8，桑椹子15~20，山藥10~15，黃精15~20。
[0011]本發明所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑，優選配比為:
冬蟲草1，西洋參10，鱉甲15，穿山甲5，石斛15，虎仗20，砂仁10，大黃10，黃芪6，黃連6，黃芹10，佛手15，金錢草30，白芍20，三七3，桑椹子15，山藥10，黃精15。
[0012]本發明所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑的製備方法，包括以下步驟:
按比例稱取藥物，分別粉碎成100-200目細粉，混合均勻即可。
[0013]【用法用量】口服；5~10克/次；3次/日；
【適應症】肝纖維化、肝硬化、肝損傷、肝炎等。
[0014]本發明方解如下:因久罹肝疾，克伐日久，正氣必定大虧，故本方取冬蟲草，補虛損益精氣，先扶其正，固本培元，為君藥；配以西洋參補助氣血，扶正祛邪，黃芪補中益氣，託毒外舉，以扶正；任以虎杖，消症散積，破瘀通經；鱉甲，軟堅散結，平肝潛陽；穿山甲，通經絡，活淤血，消腫痛，三七，散瘀消腫，定痛止血，以祛邪，合以金錢草，清利肝膽溼熱；白芍，養血柔肝，定痛止血，大黃，消痛散腫，推陳致新，活血通經，上藥攻補兼施，進退有章，輔蟲草，扶正祛邪，共為臣藥。石斛，滋陰養胃，砂仁，行氣調中，黃連，涼肝膽，解熱毒，黃芹，清熱燥溼，解毒，佛手，理氣和中，舒肝解鬱，桑椹子，滋陰補血，山藥，清熱解毒，黃精，補中益氣，諸藥相佐以緩解肝疾日久，所致脾胃失和，血瘀肝絡之症。
[0015]經動物實驗證明，將本發明藥物用於四氯化碳導致的肝纖維化動物模型和肝硬化動物模型，能明顯改善小鼠體重和改善小鼠外周血中谷丙轉氨酶(ALT)和穀草轉氨酶(AST)和鹼性磷酸酶(AKP)的含量和改善組織學形態的病理變化和降低細胞漿周圍的a -SMA的表達。
本發明的積極效果在於:由純天然藥物配製而成，處方簡單，經藥效試驗，配伍的協同效果確切，對肝損傷有很好的治療作用，毒副作用小，臨床症狀消失迅速，無任何毒副作用，治療周期短，治癒後不反彈，治療成本低，同時減輕患者經濟負擔，患者恢復正常後，可以停藥而不易復發。
[0016]【專利附圖】
【附圖說明】:
圖1:橄欖油正常對照組。小鼠肝組織無病變，肝組織內肝細胞胞漿豐富，無明顯脂肪變性及水變性，肝細胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，肝細胞排列整齊。
[0017]圖2:肝纖維化動物模型組。肝組織受損，中央靜脈周圍，匯管區炎症細胞浸潤。肝細胞脂肪變性，部分肝細胞水樣變性，排列紊亂，纖維組織明顯增生形成大量纖維間隔，纖維間隔內有散在炎症細胞浸潤。
[0018]圖3:本發明藥物實施例1治療肝纖維化組。可見肝細胞脂肪變性不明顯，內有少量炎症細胞浸潤。肝組織輕度改變。有少量纖維間隔。
[0019]圖4:本發明藥物實施例2治療肝纖維化組。肝細胞脂肪變性不明顯，炎症細胞浸潤減輕，纖維間隔形成數量減少。
[0020]圖5:本發明藥物實施例3治療肝纖維化組。肝細胞脂肪變性不明顯，基本無炎症細胞浸潤減輕，纖維間隔形成數量減少。
[0021]圖6:橄欖油正常對照組。肝細胞排列整齊，很少有a-SMA表達的陽性細胞。
[0022]圖7:肝纖維化動物模型組。在肝細胞胞漿內和肝組織纖維間隔內，竇周間隙，匯管區較多a-SMA表達。
[0023]圖8:本發明藥物實施例1治療肝纖維化組。可見中央靜脈周圍，纖維間隔和纖維間隔少數間質細胞及匯管區周圍少數肝細胞胞漿a -SMA表達。
[0024]圖9:本發明藥物實施例2治療肝纖維化組。可見中央靜脈周圍，纖維間隔和纖維間隔少數間質細胞及匯管區周圍少數肝細胞胞漿a -SMA表達。
[0025]圖10:本發明藥物實施例3治療肝纖維化組。可見中央靜脈周圍，纖維間隔和纖維間隔少數間質細胞及匯管區周圍少數肝細胞胞漿a -SMA表達。
[0026]圖11:橄欖油正常對照組。小鼠肝組織無病變，肝組織內肝細胞胞漿豐富、無明顯脂肪變性及水變性，中央靜脈呈放射狀排列，肝細胞排列整齊。
[0027]圖12:肝硬化動物模型組。肝組織嚴重破壞，多個中央靜脈周圍炎症細胞浸潤，細胞點狀壞死。膽管周圍膽汁淤積較嚴重，固縮的核較多，點狀壞死多，嗜酸性形成。假小葉形成，肝組織小葉內、小葉間有大量炎性細胞浸潤，小葉結構不清，出現肝細胞脂肪變性、部分肝細胞水樣變性，排列紊亂，
圖13:本發明藥物實施例1治療肝硬化組。肝細胞脂肪出現輕微變性，內有少量炎症細胞浸潤。並逐漸恢復整齊排列。
[0028]圖14:本發明藥物實施例2治療肝硬化組。可肝細胞脂肪出現輕微變性，內有少量炎症細胞浸潤。並逐漸恢復整齊排列。
[0029]圖15:本發明藥物實施例3治療肝硬化組。肝細胞脂肪出現輕微變性，內有少量炎症細胞浸潤。並逐漸恢復整齊排列。
[0030]圖16:橄欖油正常對照組。肝細胞排列較為整齊，結構比較規整，有少量a -SMA表達的陽性細胞。
[0031]圖17:肝硬化動物模型組。肝肝組織纖維間隔和胞漿內，竇周間隙，匯管區有大量a-SMA表達的陽性細胞。表達量增多並呈複雜的條索狀排列。在假小葉周圍有a-SMA的表達。
[0032]圖18:本發明藥物實施例1治療肝硬化組。可見中央靜脈周圍和匯管區周圍及肝細胞胞漿表達少量a -SMA。
[0033]圖19:本發明藥物實施例2治療肝硬化組。可可見中央靜脈周圍和匯管區周圍及肝細胞胞漿表達少量a -SMA。
[0034]圖20:本發明藥物實施例3治療肝硬化組。可見中央靜脈周圍和匯管區周圍及肝細胞胞漿表達少量a -SMA。
【具體實施方式】
[0035]實施例1
稱取冬蟲草lg，西洋參IOg,鰵甲15g,穿山甲5g,石斛15g,虎仗20g,砂仁IOg,大黃IOg,黃芪6g，黃連6g，黃芹10g，佛手15g，金錢草30g，白芍20g，三七3g，桑椹子15g，山藥10g，黃精15g共18味 藥，分別粉碎成100-200目細粉，混合均勻即可。
[0036]實施例2
稱取冬蟲草3g，西洋參13g，鱉甲18g，穿山甲8g，石斛18g，虎仗20g，砂仁12g，大黃13g，黃芪Sg,黃連Sg,黃芹12g，佛手18g，金錢草28g，白芍22g，三七3g，桑椹子18g，山藥10g，黃精15g共18味藥，分別粉碎成100-200目細粉，混合均勻即可。
[0037]實施例3
稱取冬蟲草5g，西洋參15g，鱉甲20g，穿山甲10g，石斛20g，虎仗25g，砂仁15g，大黃15g,黃芪10g，黃連10g，黃芹10g，佛手15g，金錢草30g，白芍20g，三七8g，桑椹子20g，山藥15g，黃精20g共18味藥，分別粉碎成100-200目細粉，混合均勻即可。
[0038]通過以下實驗表明本發明藥物對肝損傷動物的治療效果:
實驗動物及材料:實驗用ICR雄性小鼠由吉林省吉林大學白求恩醫學院實驗動物中心提供，六月齡，體重18-22克。本發明藥物中各種藥材均購自正規中藥銷售渠道，經超微粉碎機、粉碎成粉末。分析純CCl4購自北京化學工廠。橄欖油購自山東魯花集團有限公司。小鼠ALT酶聯免疫分析試劑盒、小鼠AST酶聯免疫分析試劑盒、小鼠AKP酶聯免疫分析試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。羧甲基纖維素鈉(CMC)購自濰坊力特複合材料有限公司，0.5%CMC為本實驗中藥複方的混懸劑,蒸懼水配製。本實驗中造模試劑是指按CC14:橄欖油=1:5比例配製。兔抗a-SMA抗體購自Epitomics公司。羊抗兔二抗及相應S-P試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。
[0039]實驗方法:
造模方法為模型組及各藥物治療組腹腔注射CCl4造模試劑600 μ 1/kg,對照組腹腔注射等劑量橄欖油；每周造模2次，肝纖維化模型連續造模7周，肝硬化模型連續造模11周，通過病理切片檢測模型成功後，採用灌胃方式給予藥物治療。本發明藥物的各治療組劑量為:低劑量組0.75g/kg中藥複方；中劑量組1.5g/kg中藥複方；:高劑量組2.25g/kg中藥複方肝纖維化治療15天中藥複方，肝硬化治療30天，對照組給予等劑量的中藥複方混懸液(0.5%羧甲基纖維素鈉)
分別於藥物治療結束後，採集各組小鼠血清，進行APK、ALT、AST肝功能血清學檢測；取肝組織用於常規HE染色及免疫組化染色方法進行a-SMA檢測。
[0040]外周血清ALT測定原理及方法
谷丙轉氨酶(ALT)在37° C及PH7.4的條件下，作用於丙氨酸及a_酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及穀氨酸。反應30分鐘以後(固定時間)加入2，4- 二硝基苯肼(DNPH)鹽酸溶液，即終止反應，同時DNPH與酮酸中羧基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在鹼性條件下呈紅棕色，於505nm比色讀取吸光度並計算酶活力。測定方法如表1。
[0041]表1:外周血清ALT測定方法
【權利要求】
1.一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑，其特徵在於是由以下藥物按重量份數比製成的: 冬蟲草I~5，西洋參10~15，鱉甲15~20，穿山甲5~10，石斛15~20，虎仗20~25，砂仁10~15，大黃10~15，黃芪6~10，黃連6~10，黃芹10~15，佛手15~20，金錢草25~30，白芍20~25，三七3~8，桑椹子15~20，山藥10~15，黃精15~20。
2.根據權利要求1所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑，其特徵在於是由以下藥物按重量份數比製成的: 冬蟲草1，西洋參10，鱉甲15，穿山甲5，石斛15，虎仗20，砂仁10，大黃10，黃芪6，黃連6，黃芹10，佛手15，金錢草30，白芍20，三七3，桑椹子15，山藥10，黃精15。
3.根據權利 要求1或2所述的一種治療肝纖維化及肝硬化的中藥製劑的製備方法，包括以下步驟: 按比例稱取藥物，分別粉碎成100-200目細粉，混合均勻即可。
【文檔編號】A61K36/9064GK104013899SQ201410287152
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月25日 優先權日:2014年6月25日
【發明者】喬萍, 陳娟, 楊念, 鄭海箏, 石卓, 張鐵嶺, 祁婧, 孫旭, 溫劍平, 溫得中, 孫冬梅 申請人:吉林大學