可作為α-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法
2023-04-27 15:32:36 2
專利名稱：：可作為α-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法，屬於中草藥活性成分製備及化學化工
技術領域：
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背景技術：
：糖尿病是一種多病因的代謝疾病，其特點是慢性高血糖，並且伴隨著因胰島素分泌及作用缺陷而引起的糖、脂肪和蛋白質代謝紊亂。目前發達國家糖尿病的患病率在6-10%以上，我國患者人數在4000萬以上，患病率約為2~4%，成為繼心血管和腫瘤之後的第三位"健康殺手"，特別是隨著全球人口的老齡化，該病的發病率呈持續上升趨勢。糖尿病可導致失明、心腦血管疾病、腎功能衰竭、神經病變、肢體損壞以致截肢、昏迷等多種併發症，造成多器官、多系統的廣泛損傷，具有較高的致殘率，從而嚴重地影響患者的生活質量。根據病因不同，糖尿病分為稱為I型的胰島素依賴型和稱為II型的非胰島素依賴型。其中I型糖尿病主要依賴胰島素來治療，II型糖尿病不能單純依靠補充胰島素，還需要口服降糖藥，常用的降糖藥主要包括胰島素促泌劑、胰島素增敏劑和a-葡萄糖苷酶抑制劑三類。a-葡萄糖苷酶包括位於小腸腔的a-澱粉酶、小腸刷狀緣的麥芽糖酶、ct-糊精酶和蔗糖酶等。正常人進食後，食物中的碳水化合物如澱粉先經a-澱粉酶作用生成麥芽糖、麥芽三糖、a-糊精等，隨後和蔗糖一起通過蔗糖酶等a-糖苷酶水解作用生成葡萄糖、半乳糖和果糖，經腸壁細胞吸收而被機體利用。糖尿病患者因代謝障礙而導致血糖濃度發生異常改變。預防和治療這類疾病的有效方法之一是限制或延緩多糖在消化道內分解，為此就必須降低a-葡萄糖苷酶活性。a-葡萄糖苷酶抑制劑通過可逆地佔據僅一葡萄糖苷酶與糖的絡合位點，抑制僅一葡萄糖苷酶催化多糖降解為單糖，從而延緩腸道碳水化合物的吸收。與其他口服降糖藥及胰島素治療相比，a-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物最顯著的特徵是能有效阻止糖尿病患者的餐後血糖升高，使患者血糖平穩且緩慢地維持在一定水平，改善血糖穩定指數；由於抑制了a-葡萄糖苷酶對腸道碳水化合物的分解速度，避免了餐後可能發生的血糖過高。另外，a-葡萄糖苷酶抑制劑往往具有調節脂肪生成、抗AIDS病毒感染等作用。因此，a-葡萄糖苷酶抑制劑成為安全高效的抗糖尿病藥物而成為了研究熱點。樺褐孔菌是一種藥用真菌，主要分布在北緯45。-50°的寒冷地區，含有以多糖、三萜類、甾體類和多酚類化合物為主的多種成分，具有抗腫瘤、抗氧化、降血糖、抗炎、止痛、抗血小板凝集、抗病毒、增強機體免疫力等多種藥理活性。從16世紀開始，俄羅斯、波蘭、芬蘭等國的居民就已經開始食用，並且用於防治胃腸道、糖尿病、癌症等多種疾病。但到目前為業尚未發現有關從樺褐孔菌中提取a-葡萄糖苷酶抑制劑的方法見諸報導。
發明內容為了解決上述問題，本發明的目的在於提供一種提取物對a-葡萄糖苷酶具有很強的抑制活性，^f且工藝簡單、操作方便的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法。為了達到上述目的，本發明提供的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法包括按順序進行的下列步驟(1)將樺褐孔菌粉碎後過30目篩，然後以8oy魂度的乙醇作為提取溶劑加熱回流提取35次，每次12小時，合併提取液，離心或抽濾分離上清液，並將上清液濃縮乾燥後獲得乙醇浸膏；(2)將上述乙醇浸膏分散於蒸餾水中，然後用石油醚振蕩萃取36次，每次24小時，將萃取液和水相萃餘物分離；(3)將上述水相萃餘物用乙酸乙酯振蕩萃取36次，每次24小時，然後將萃取液合併濃縮並乾燥，即可獲得對a-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的樺褐孔菌提取物。所述的步驟(1)中乙醇與樺褐孔菌的用量比為812mL:lg，回流提取溫度為6080°C。所述的步驟(2)中乙醇浸膏與蒸餾水的用量比為lg:2050mL。所述的步驟(2)中石油醚的用量為乙醇浸膏重量的1030倍。所述的步驟(3)中乙酸乙酯的用量為乙醇浸膏重量的1030倍。本發明提供的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法是首先採用乙醇對樺褐孔菌加熱回流而獲得乙醇浸膏，然後將乙醇浸膏充分分散於蒸餾水中，並用石油醚進行萃取，以除去浸膏中對a-葡萄糖苷酶無抑制活性的低極性組分，再用乙酸乙酯對萃餘物進行萃取，從而獲得對a-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的提取物，得率為244%。試驗證明，利用本發明提供的製備方法所獲得的樺褐孔菌提取物對a-葡萄糖苷酶具有很強的抑制活性，400畔劑量時抑制率達到80.5%，ICs。為103.9pg/mL,因此可用於降糖藥物的開發。另外，本製備方法還具有工藝簡單、操作方便等優點。具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明提供的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法進行詳細說明。實施例1:^(1)將100g樺褐孔菌粉碎後過30目篩，然後以1000mL80%濃度的乙醇作為提取溶劑，在7(TC的溫度下加熱回流提取3次，每次1小時，合併提取液，離心分離上清液，並將上清液濃縮乾燥後獲得16.2g乙醇浸膏；(2)將上述乙醇浸膏分散於324mL蒸餾水中，然後用162mL石油醚振蕩萃取3次每次2小時，將萃取液和水相萃餘物分離；(3)將上述水相萃餘物用162mL乙酸乙酯振蕩萃取3次，每次2小時，然後將萃取液合併濃縮並乾燥，即可獲得2.lg對a-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的棕褐色粉狀樺褐孔菌提取物。實施例2:(1)將100g樺褐孔菌粉碎後過30目篩，然後以1200mL80賺度的乙醇作為提取溶劑，在75。C的溫度下加熱回流提取3次，每次2小時，合併提取液，抽濾,分離上清液，並將上清液濃縮乾燥後獲得18.lg乙醇浸膏；(2)將上述乙醇浸膏分散於543raL蒸餾水中，然後用362mL石油醚振蕩萃取4次，每次2小時，將萃取液和水相萃餘物分離；(3)將上述水相萃餘物用362mL乙酸乙酯振蕩萃取4次，每次2小時，然後將萃取液合併濃縮並乾燥，即可獲得3.3g對a-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的棕褐色粉狀樺褐孔菌提取物。實施例3:(1)將100g樺褐孔菌粉碎後過30目篩，然後以1200mL80，度的乙醇作為提取溶劑，在75"C的溫度下加熱回流提取5次，每次2小時，合併提取液，抽濾，分離上清液，並將上清液濃縮乾燥後獲得22.3g乙醇浸膏；(2)將上述乙醇浸膏分散於1115mL蒸餾水中，然後用669mL石油醚振蕩萃取45次，每次4小時，輳苯取液和水相萃餘物分離；(3》將上述水相萃餘物用669mL乙酸乙酯振蕩萃取4次，每次4小時，然後將萃取液合併濃縮並乾燥，即可獲得4.0§對a-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的棕褐色粉狀樺褐孔菌提取物。為了驗證利用本發明提供的製備方法所獲得的樺褐孔菌提取物對a-葡萄糖苷酶的抑制活性，本發明人對從上述實施例中獲得的樺褐孔菌提取物進行了體外a-葡萄糖苷酶抑制試驗，試驗方法及結果如下在2.0mL反應體系中分別加入不同濃度的樺褐孔菌提取物溶液0.1mL、40mmol/L的4-硝基苯-a-DHJ比喃葡萄糖苯0.1mL、0.lmol/LpH為6.8的磷酸鹽緩衝液1.7mL以及0.125U/mL的ct-葡萄糖苷酶0.1mL;以不加樺褐孔菌提取物溶液的反應體系為原始酶活體系，不加a-葡萄糖苷酶和4-硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苯的體系作為提取物空白。將上述反應體系在37t:的溫度下保溫30min，然後加入0.1mol/L的碳酸鈉溶液4mL終止反應，于波長400mn處測定在酶的作用下釋放出的對硝基酚的吸光度。其中酶活力單位定義為37°C、pH6.8條件下，反應體系中對硝基酚在400nm處每分鐘吸光值變化0.001規定為一個酶活力單位。一個抑制劑活力單位定義37°C、pH6.8條件下，相同時間內降低l個酶活力單位的吸光值。抑制百分率=[1-(提取物吸光值-提取物空白吸光值)/酶活吸光值]x100%測試結果如表1所示表1樺褐孔菌提取物對a-葡萄糖苷酶的抑制活性tableseeoriginaldocumentpage6權利要求1、一種可作為α-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法，其特徵在於所述的製備方法包括按順序進行的下列步驟(1)將樺褐孔菌粉碎後過30目篩，然後以80％濃度的乙醇作為提取溶劑加熱回流提取3～5次，每次1～2小時，合併提取液，離心或抽濾分離上清液，並將上清液濃縮乾燥後獲得乙醇浸膏；(2)將上述乙醇浸膏分散於蒸餾水中，然後用石油醚振蕩萃取3～6次，每次2～4小時，將萃取液和水相萃餘物分離；(3)將上述水相萃餘物用乙酸乙酯振蕩萃取3～6次，每次2～4小時，然後將萃取液合併濃縮並乾燥，即可獲得對α-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的樺褐孔菌提取物。2、根據權利要求1所述的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法，其特徵在於所述的步驟(1)中乙醇與樺褐孔菌的用量比為812mL:lg，回流提取溫度為6080°C。3、根據權利要求1所述的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法，其特徵在於所述的步驟(2)中乙醇浸膏與蒸餾水的用量比為lg:2050mL。4、根據權利要求1所述的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法，其特徵在於所述的步驟(2)中石油醚的用量為乙醇浸膏重量的1030倍。5、根據權利要求1所述的可作為a-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法，其特徵在於所述的步驟(3)中乙酸乙酯的用量為乙醇浸膏重量的1030倍。全文摘要本發明公開了一種可作為α-葡萄糖苷酶抑制劑的樺褐孔菌提取物製備方法。該製備方法是首先採用乙醇對樺褐孔菌加熱回流而獲得乙醇浸膏，然後將乙醇浸膏充分分散於蒸餾水中，並用石油醚進行萃取，以除去浸膏中對α-葡萄糖苷酶無抑制活性的低極性組分，再用乙酸乙酯對萃餘物進行萃取，從而獲得對α-葡萄糖苷酶具有很強抑制活性的提取物，得率為2～4％。試驗證明，利用本發明提供的製備方法所獲得的樺褐孔菌提取物對α-葡萄糖苷酶具有很強的抑制活性，400μg劑量時抑制率達到80.5％，IC50為103.9μg/mL，因此可用於降糖藥物的開發。另外，本製備方法還具有工藝簡單、操作方便等優點。文檔編號A61K36/06GK101422491SQ20081015291公開日2009年5月6日申請日期2008年11月11日優先權日2008年11月11日發明者盧雪明,陳海霞申請人:天津大學