植物耐鹽性相關蛋白GhSnRK2-6及其編碼基因與應用的製作方法
2023-05-09 21:46:41
植物耐鹽性相關蛋白GhSnRK2-6及其編碼基因與應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種植物耐鹽性相關蛋白GhSnRK2-6及其編碼基因與應用。本發明所提供的蛋白來源於陸地棉，由序列表序列2所示的胺基酸組成。實驗證明，將含有序列表序列1的第309位至第1452位所示DNA分子（即所述蛋白的編碼基因）的重組載體p2301M-GhSnRK2-6轉化擬南芥得到的T3代純合轉基因株系，其種子發芽後置於含不同濃度（100、150、200mM）NaCl的MS固體培養基中培養10天的單株鮮重顯著高於野生型擬南芥和轉空載體對照株系。本發明為提高植物耐鹽性提供了一個新的基因和方法，在植物遺傳改良和耐逆性研究方面具有重要意義。
【專利說明】植物耐鹽性相關蛋白GhSnRK2-6及其編碼基因與應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種植物耐鹽性相關蛋白GhSnRK2-6及其編碼基因與應用。
【背景技術】
[0002] 鹽脅迫，作為一種非生物脅迫，嚴重影響著作物的生長和產量，並且土壤鹽漬化程 度呈現逐年增長的趨勢，因此，培育耐鹽性作物是育種工作者的主要目標之一。目前，基因 工程育種已經成為增強作物抗逆性的重要方法之一。
[0003] 棉花是一種重要的經濟作物，並且與玉米、水稻、小麥等農作物相比，是一種中度 耐鹽作物。以棉花為研究材料，現已有部分脅迫應答相關基因的克隆與功能驗證，主要集中 於編碼功能蛋白的基因（如Na+/H+逆轉運蛋白、金屬硫蛋白、水通道蛋白等)和調控基因（如 轉錄因子、蛋白激酶、乙稀應答因子等)。薛彤彤等（2009)研究發現GhMT3a能夠提高轉基因 菸草的非生物脅迫耐性，表明GhMT3a可能參與植物體內的活性氧清除，從而提高植物非生 物脅迫的耐性。芥菜編碼膜聯蛋白的基因 AnnBjl能顯著提高棉花對高鹽、甘露醇、PEG和 H202等非生物脅迫的耐性，可能參與棉花體內的活性氧清除等生命活動。SnRK2是植物中 特有的蛋白激酶，參與環境脅迫應答。目前在棉花中尚無該蛋白激酶成員相關報導。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是一種植物耐鹽性相關蛋白GhSnRK2_6及其編碼基因與應用。
[0005] 本發明所提供的耐鹽性相關蛋白，來源於陸地棉（Gossypium hirsutum L.)，名稱 為GhSnRK2-6,是如下a)或b)的蛋白質：
[0006] a)由序列表序列2所示的胺基酸序列組成的蛋白質；
[0007] b)將序列表序列2的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和 /或添加且與植物耐鹽性相關的由（a)衍生的蛋白質；
[0008] 序列表序列2所示的胺基酸序列由361個胺基酸殘基組成。
[0009] 為了使上述（a)中的蛋白便於純化，可在由序列表序列2所示的胺基酸序列組成 的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標籤。
[0010] 表1標籤的序列
[0011]
【權利要求】
1. 一種蛋白質，是如下a)或b)的蛋白質： a) 由序列表序列2所示的胺基酸序列組成的蛋白質； b) 將序列表序列2的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或 添加且與植物耐鹽性相關的由（a)衍生的蛋白質。
2. 權利要求1所述蛋白質的編碼基因。
3. 根據權利要求2所述的基因，其特徵在於：所述蛋白質的編碼基因為如下1) -6)基 因中的任意一種： 1) 其核苷酸序列是序列表序列1中第309位至第1452位所示的DNA分子； 2) 其核苷酸序列是序列表序列1中第310位至第1395位所示的DNA分子； 3) 其核苷酸序列是序列表序列1所示的DNA分子； 4) 其核苷酸序列是序列表序列3所示的DNA分子； 5) 與1)或2)或3)或4)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、 至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至 少具有99%同源性且編碼權利要求1所述蛋白質的DNA分子； 6) 在嚴格條件下與1)或2)或3)或4)或5)限定的DNA序列雜交且編碼權利要求1 所述蛋白質的DNA分子。
4. 含有權利要求2或3所述基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系、重組菌或重組病 毒。
5. 根據權利要求4所述的重組載體，其特徵在於：所述重組載體為將權利要求2或3所 述基因插入載體P2301M得到的重組表達載體； 所述載體P2301M是按照包括如下步驟的方法製備得到的：用EcoR I和Hind III對 載體PJM19進行雙酶切，回收0. 8kb的目的片段，與經EcoR I和Hind III雙酶切的載體 PCAMBIA2301的骨架連接，獲得所述載體p2301M。
6. 權利要求1所述的蛋白質或權利要求2或3所述的基因在調控目的植物耐鹽性中的 應用。
7. -種提高目的植物耐鹽性的方法，包括將權利要求2或3所述基因導入目的植物中 的步驟。
8. -種培育轉基因植物的方法，是將權利要求2或3所述基因導入目的植物中，得到耐 鹽性高於所述目的植物的轉基因植物。
9. 根據權利要求7或8所述的方法，其特徵在於：所述導入是通過權利要求5所述重 組載體實現的。
10. 根據權利要求6- 9中任一所述的應用或方法，其特徵在於：所述目的植物為單子 葉植物或雙子葉植物，所述雙子葉植物具體可為擬南芥。
【文檔編號】A01H5/00GK104140462SQ201310163548
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2013年5月7日 優先權日:2013年5月7日
【發明者】華金平, 蘇瑩, 張曦, 甄軍波, 王玉美 申請人:中國農業大學