基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法
2023-05-25 03:29:06
基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法
【專利摘要】本發明公開了一種基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，包括如下步驟：1、蛤或其加工水煮液的前處理：分離蛤肉，清洗，勻漿；或收集加工蛤過程中廢棄的蛤水煮液，過濾去除去雜質。2、酶轉化：適當pH條件下加入酶，進行酶轉化反應；3、去除蛋白質：適當pH值條件下沉澱並離心去除酸性、鹼性蛋白質。4、超濾設備去除大分子物質：通過超濾設備截去大分子多糖多肽以保留牛磺酸。5、電滲析脫除鹽離子。6、離子交換層析：通過強酸性陽離子交換樹脂吸附收集牛磺酸。7、乙醇重結晶：加入一定體積的乙醇，析出牛磺酸晶體。本發明方法充分利用廢棄原料，且具有操作簡單、安全、成本低廉、綠色環保、可連續生產、牛磺酸得率高等優點。
【專利說明】基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種工業化利用酶轉化方法連續製備蛤或其水煮液中牛磺酸的方法。
【背景技術】
[0002]蛤類，例如菲律賓蛤仔，俗稱沙蜆子，是一類雙殼貝類，隸屬於簾蛤科，廣泛分布於我國的南北海域。其主要特點為生長迅速、繁殖周期短、對鹽和溫度的適應能力強且滋味鮮美、營養豐富、價格便宜。是我國第二大貝類養殖產品，因此對蛤及其加工副產物的深度開發利用有著極其重要的經濟價值。新鮮的蛤肉中含有豐富的蛋白質、脂肪、鈣、磷、鐵等礦物質、維生素、胺基酸、牛磺酸。
[0003]牛磺酸(Taurine)學名2_氨基乙磺酸，因首次從牛膽汁中分離出來，故俗稱為牛膽酸、牛膽素。牛磺酸是一種含硫的非蛋白質結構胺基酸，是人體必需的胺基酸之一，具有很強的生物活性。牛磺酸在魚、貝類中含量十分豐富。通過深入研究發現，牛磺酸能增加細胞抗氧化、抗自由基損傷及抗病毒侵害的能力，它還是良好的護肝劑，具有增強視力、促進大腦發育、解除疲勞、提高工作效率、降低膽固醇、抑制膽結石、消炎、鎮痛的作用，同時具有一定的抗腫瘤活性。在臨床上牛磺酸可用於治療急慢性肝炎、感冒、高血壓、動脈硬化和癌症等疾病。
[0004]牛磺酸的需求量大幅增加，我國有20000噸/年的潛在市場，美國年消費量達6000噸以上，日本產量近2000噸。
[0005]針對日益增長的需求量，更多的提取牛磺酸的技術日益更新。目前，國內外主要依靠化學合成法提取牛磺酸，多採用乙氯乙烷法、乙醇胺法、乙撐亞胺法等方法。但這些化學合成法存在原料毒性大、工藝操作複雜、回收困難、環境汙染嚴重等問題。
[0006]目前對於海洋資源的綜合利用，一方面是從低值的水產品中獲取相對高附加值的產品；另一方面是對水產品加工過程中產生的廢棄物再回收利用。由於生產廢棄物給環境帶來較大的壓力，對其利用無疑會帶來較高的環境效益。利用海洋產品加工的下腳料提取牛磺酸，既可以提高海洋資源利用率，又可以降低環境汙染。我國海洋生物資源豐富，從魚貝類及其下腳料中提取牛磺酸，具有巨大經濟效益。所以研究如何高效地從海洋生物中提取牛磺酸具有重要的現實意義。
【發明內容】
[0007]針對上述存在的問題，本發明涉及一種可以替代傳統化學合成法提取牛磺酸或者採用水煮法提取牛磺酸的技術，即在蛤及其水煮液中加入蛋白酶類，利用酶轉化法，提取牛磺酸，本發明成本低廉、綠色環保、操作簡單、提取效率高，充分使用廢棄原料並能通過酶轉化的作用有效的提高牛磺酸的得率。
[0008]為了達到上述目的，本發明提供了一種基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，包括如下步驟:
[0009]S1、利用蛤製備反應液；
[0010]S2、取胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、鹼性蛋白酶中的一種，根據所選取的酶對所述反應液調節酶轉化反應適宜的PH值，將所選取的酶加入所述反應液中進行酶轉化反應；之後，滅酶活，得到酶轉化溶液；
[0011]S3、所述酶轉化溶液去除酸性、鹼性蛋白質；
[0012]S4、通過超濾設備去除大分子物質，保留牛磺酸；
[0013]S5、電滲析脫除鹽離子；
[0014]S6、通過強酸性陽離子交換樹脂吸附收集牛磺酸流出液；
[0015]S7、流出液中加入一定體積的乙醇，析出牛磺酸晶體。
[0016]優選方式下，步驟S2具體包括工序:
[0017]S21、向所述反應液中加入溶液中乾物質質量份數為0.1%?10%的胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、鹼性蛋白酶中的一種；調節PH至所用酶的適宜環境(適宜環境為:胃蛋白酶pHl?3、木瓜蛋白酶pH5?9、胰蛋白酶pH7?9、鹼性蛋白酶pH8?11)，20?50°C酶解0.5?10小時；
[0018]S22、冷卻，調pH至6?8 (此步驟能有效保證產品的最後得率)；
[0019]S23、80?100°C滅酶活5?30分鐘。
[0020]此外，步驟SI可選用蛤肉或蛤水煮液製備反應液，具體為:蛤肉按其體積比加入1:1?1:100的水之後進行勻漿處理，獲得所述反應液；或者，蛤水煮液濃縮至乾物質含量為I %?30%之間，離心去除不溶於水的雜質，獲得所述反應液。所述水煮液可以是蛤加工過程中的廢棄液(現有技術都予以拋棄)，從而進一步提高產品價值，提升利潤。
[0021]步驟S3可參考現有技術的方式，具體可參考《文蛤中牛磺酸》【龔麗芬，黃慰生，謝曉蘭，鄭志福，胡東紅.文蛤中牛磺酸的提取(I).精細化工.2003，20 (7)，393-395】，先調節溶液酸性，有酸性蛋白沉澱，可以離心脫除，後調節溶液鹼性，有鹼性蛋白沉澱，可以離心脫除。調節酸或鹼的順序可以改變。本發明提供了一種優選方式，具體為步驟S3包括工序:
[0022]S31、向處理後的酶轉化溶液中加lmol/L?6mol/L HCl調pH至2?4，即有酸性蛋白質沉澱，離心分離，取上清液:
[0023]S32、上清液用lmol/L?6mol/L NaOH調pH至8?10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0024]步驟S4:將除蛋白後的溶液進行超濾處理，以超濾膜截去大分子的多肽多糖類物質，收集濾出液。步驟S5中適宜的電滲析工藝參數為:電壓IV?20V，流速0.5mL/min?4L/min,樣品濃度 lmg/mL ?100mg/mL。
[0025]上述步驟S6和S7可參考現有技術的方式實現，如《貽貝廢棄液中天然牛磺酸的提取研究》【崔忠艾，李蘋蘋，王道波，樊鎮棣，杜延兵.貽貝廢棄液中天然牛磺酸的提取研究.安徽農業科學.2010，38(16):8671-8673】。其中，步驟S6包括如下工序:
[0026]S61、將提取液通過強酸性陽離子交換樹脂柱，蒸餾水洗脫，取電導率開始下降至穩定期間的流出液；
[0027]S62、將提取液上6X60cmNa+型強酸性樹脂柱，上樣體積為300mL，蒸餾水洗脫，洗脫速度為20mL/min，接取電導率開始下降至電導率穩定期間的流出液。
[0028]步驟S7包括如下工序:
[0029]S71、上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。
[0030]S72、粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到純度較高的牛磺酸晶體。
[0031]最優方式下，溶液經冷凍乾燥或真空乾燥的方法得到牛磺酸。
[0032]水產品中的牛磺酸以游離形式存在，且易溶於熱水，不溶於乙醇，所以可採用熱水提取，離子交換提純，乙醇沉澱等方法得到白色結晶。本發明利用酶轉化法提取蛤水煮液中的牛磺酸，具有操作簡單、成本低、得率高、綠色環保、安全可連續生產。其主要步驟包括:1、收集企業生產廢棄蛤水煮液,過濾去除水不溶性雜質；2、水煮液中加入蛋白酶適宜pH條件下進行酶轉化反應；3、適當pH值條件下沉澱並離心去除酸性、鹼性蛋白質；4、通過超濾設備去除大分子物質，保留牛磺酸；5、電滲析脫除鹽離子；6、通過強酸性陽離子交換樹脂吸附收集牛磺酸流出液；7、流出液中加入一定體積的乙醇，析出牛磺酸晶體。
[0033]本發明具有如下優點；
[0034]1、整個提取過程不使用任何的有機溶劑，減少了環境汙染，保證了工作人員的自身安全。
[0035]2、所得牛磺酸提純品無任何有毒試劑的混入，安全可靠。
[0036]3、可充分利用低值蛤或其加工後產生的廢棄水煮液，提高廢棄液的利用率。
[0037]4、採用酶轉化法提取牛磺酸，通過酶轉化的方法可有效的提高得率。
[0038]5、採用超濾處理及電滲析技術，在有效提高牛磺酸的純度的同時也可去除掉水產品中存在的重金屬元素。
[0039]6、可實現全自動連續化生產，設備簡單，操作易行，降低勞動強度。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0040]圖1是酶轉化前後牛磺酸在產物中含量的變化情況。
【具體實施方式】
[0041]實例一
[0042]蛤去殼，清洗，按體積比1:10加入水，勻漿；採取酶輔助提取方法，勻漿液中加入鹼性蛋白酶粉末，加入量為底物量的2.5%，以Imol/LNaOH調節溶液pH至10，37°C反應3.5小時，反應結束，調PH6，沸水浴中滅酶活lOmin，冷卻。
[0043]以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用4mol/L NaOH調至pH為10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0044]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓IV,流速4L/min,樣品濃度lmg/mL。濾出液以6mol/LHCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0045]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫，洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到2.4%。
[0046]實例二
[0047]蛤去殼，清洗，按體積比1:10加入水，勻漿；採取酶輔助提取方法，勻漿液中加入酸性蛋白酶粉末，加入量為底物量的2.5%，以4mol/LHCl調節溶液pH 1，45°C反應3.5小時，完成後，調pH7，沸水浴中滅酶lOmin，冷卻。
[0048]以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用4mol/L NaOH調pH至8，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0049]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓15V,流速100mL/min,樣品濃度8g/mL。濾出液以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0050]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫，洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到1.8%。
[0051]實例三
[0052]收集企業生產蛤水煮液，去除不溶性雜質；以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用4mol/L NaOH調至pH為9，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓IV,流速0.5mL/min,樣品濃度lmg/mL。濾出液以6mol/LHCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0053]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫，洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到0.182g/L。
[0054]實例四
[0055]收集企業生產蛤水煮液，去除不溶性雜質；採取酶輔助提取方法，水煮液中加入鹼性蛋白酶粉末，加入量為底物量的2.5%，以Imol/LNaOH調節溶液pH至10，37°C反應3.5小時，反應結束，調PH8，沸水浴中滅酶活lOmin，冷卻。
[0056]以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用6mol/L NaOH調至pH為10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0057]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓IV,流速lL/min,樣品濃度lmg/mL。濾出液以6mol/LHCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0058]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫，洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到0.316g/L。
[0059]實例五
[0060]收集企業生產蛤水煮液，去除水不溶性雜質。採取酶輔助提取方法，水煮液中加入胃蛋白酶，加入量為底物量的2.5%，以lmol/L的HCl調節溶液pH至1，20°C反應3.5小時，反應結束，調pH至7，沸水浴中滅酶活lOmin，冷卻。
[0061]以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用4mol/L NaOH調pH至8，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0062]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓5V,流速100mL/min,樣品濃度2mg/mL。濾出液以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0063]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫,洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到0.284g/L。
[0064]實例六
[0065]收集企業生產蛤水煮液，去除水不溶性雜質。採取酶輔助提取方法，水煮液中加入木瓜蛋白酶，加入量為底物量的2.5%，以6moI/LNaOH調至溶液pH 8，50°C反應3.5小時，完成後，調pH8，沸水浴中滅酶活20min，冷卻。
[0066]以lmol/L NaOH調至pH為10，S卩有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。再用6mol/L的HCl調節溶液pH至4，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0067]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓10V,流速3L/min,樣品濃度4mg/mL。濾出液以6mol/L的HCl調節溶液PH至3，待上柱。
[0068]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫,洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到0.332g/L。
[0069]實例七
[0070]收集企業生產蛤水煮液，去除水不溶性雜質。採取酶輔助提取方法，水煮液中加入胰蛋白酶粉末，加入量為底物量的2.5%，以4mol/LNaOH調節溶液pH至9，30°C反應3.5小時，完成後，調pH6，沸水浴中滅酶活20min，冷卻。
[0071]以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用4mol/L調pH至10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0072]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓15V,流速60mL/min,樣品濃度6mg/mL。濾出液以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0073]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫，洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到
0.276g/L。
[0074]實例八
[0075]收集企業生產蛤水煮液，去除水不溶性雜質。採取酶輔助提取方法，水煮液中加入酸性蛋白酶粉末，加入量為底物量的2.5%，以4mol/LHCl調節溶液pH 1，45°C反應3.5小時，完成後，調pH7，沸水浴中滅酶lOmin，冷卻。
[0076]以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液，再用2mol/L NaOH調pH至10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0077]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓15V,流速100mL/min,樣品濃度8g/mL。濾出液以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0078]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫，洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到
0.304g/L。
[0079]實例九
[0080]收集企業生產蛤水煮液，去除水不溶性雜質。採取酶輔助提取方法，水煮液中加入鹼性蛋白酶粉末，加入量為底物量的2.5%，以Imol/LNaOH調節溶液pH至10，37°C反應4小時，完成後，調pH8,沸水浴中滅酶活1min,冷卻。
[0081]以4mol/LNaOH調pH至10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。再用6mol/L的HCl調節溶液pH至3，即有酸性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
[0082]將上清液進行超濾處理，超濾膜截留大分子多糖多肽物質，收集濾出液，再經過電滲析脫除鹽離子，電滲析電壓15V,流速150mL/min,樣品濃度8mg/mL。濾出液以6mol/L的HCl調節溶液pH至3，待上柱。
[0083]取300mL濾出液通過Na離子型酸性樹脂柱，蒸餾水洗脫,洗脫速度為10mL/min，接取電導率開始下降至穩定期間的流出液，上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到牛磺酸固體，經與乙醯丙酮和甲醛比色法測得牛磺酸產品的得率可以達到
0.312g/L。
[0084]本發明利用酶轉化法提取蛤或其水煮液中的牛磺酸，即在蛤或其水煮液中加入轉化蛋白酶，利用酶轉化的原理，提取牛磺酸，實驗表明採用酶對蛤或其煮汁進行轉化後其牛磺酸含量相比之未轉化前，其含量最高可增加到原來的一倍以上(在此步驟中牛磺酸含量可以提高到3.3mg/g)，由此可以提高牛磺酸的得率，見附圖1 ;再利用文獻中報導的方法，進行陽離子樹脂交換和乙醇重結晶法進行純化，既可以減少化學試劑的影響，又可以提高牛磺酸的得率。附圖1是酶轉化前後牛磺酸在此步驟產物中含量的變化情況；圖中橫坐標I表示無酶轉化的牛磺酸含量，2、3、4、5表示採用2中性蛋白酶，3鹼性蛋白酶，4胃蛋白酶，5木瓜蛋白酶等不同酶處理後牛磺酸含量的變化。
[0085]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護範圍並不局限於此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術範圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。
【權利要求】
1.一種基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，包括如下步驟: 51、利用蛤製備反應液； 52、取胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、鹼性蛋白酶中的一種，根據所選取的酶對所述反應液調節酶轉化反應適宜的PH值，將所選取的酶加入所述反應液中進行酶轉化反應；之後，滅酶活，得到酶轉化溶液； 53、所述酶轉化溶液去除酸性、鹼性蛋白質； 54、通過超濾設備去除大分子物質，保留牛磺酸； 55、電滲析脫除鹽離子； 56、通過強酸性陽離子交換樹脂吸附收集牛磺酸流出液； 57、流出液中加入乙醇，析出牛磺酸晶體。
2.根據權利要求1所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，S2步驟具體為: 521、向所述反應液中加入溶液中乾物質質量份數為0.1%?10%的胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、鹼性蛋白酶中的一種；調節PH至所用酶的適宜環境，20?50°C酶解0.5?10小時； 其中，適宜環境為:胃蛋白酶pHl?3、木瓜蛋白酶pH5?9、胰蛋白酶pH7?9、鹼性蛋白酶pH8?11 ； 522、冷卻，調pH至6?8; 523、80?100°C滅酶活5?30分鐘。
3.根據權利要求1或2所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，SI步驟具體為:蛤肉按其體積比加入1:1?1:100的水之後進行勻漿處理，獲得所述反應液； 或者，蛤水煮液濃縮至乾物質含量為1%?30%之間，離心去除不溶於水的雜質，獲得所述反應液。
4.根據權利要求3所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，所述水煮液為蛤加工過程中的廢棄液。
5.根據權利要求1或2所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，所述步驟S3包括工序: 531、向處理後的酶轉化溶液中加lmol/L?6mol/LHCl調pH至2?4，即有酸性蛋白質沉澱，離心分離，取上清液: 532、上清液用lmol/L?6mol/LNaOH調pH至8?10，即有鹼性蛋白沉澱，離心分離，取上清液。
6.根據權利要求1或2所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，所述步驟S4包括如下步驟:將除蛋白後的溶液進行超濾處理，以超濾膜截去大分子的多肽多糖類物質，收集濾出液。
7.根據權利要求1或2所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，所述步驟S5中適宜的電滲析工藝參數為:電壓IV?20V，流速0.5mL/min?4L/min，樣品濃度lmg/mL ?lOOmg/mL。
8.根據權利要求1或2所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，所述步驟S6包括如下工序: 將提取液通過強酸性陽離子交換樹脂柱，蒸餾水洗脫，取電導率開始下降至穩定期間的流出液； 提取液上6X60cmNa+型強酸性樹脂柱，上樣體積為300mL，蒸餾水洗脫，洗脫速度為20mL/min,接取電導率開始下降至電導率穩定期間的流出液。
9.根據權利要求1或2所述基於蛤利用酶轉化法提取牛磺酸的方法，其特徵在於，其特徵在於，所述步驟S7包括如下工序: .571、上述流出液經減壓濃縮，加3倍體積95%乙醇，置於4°C環境下，析出牛磺酸。 . 572、粗品牛磺酸加適量水溶解，再用95%乙醇重結晶，反覆2?3次，可得到純度較高的牛磺酸晶體。
【文檔編號】C12P13/00GK104404094SQ201410609647
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月3日 優先權日:2014年11月3日
【發明者】楊靜峰, 衣萌, 董秀萍, 朱蓓薇, 高榮春, 王梟, 蘭晰然 申請人:大連工業大學