一株解澱粉芽孢桿菌及其在水產養殖中的應用的製作方法
2023-05-25 11:44:26
一株解澱粉芽孢桿菌及其在水產養殖中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一株解澱粉芽孢桿菌及其在水產養殖中的應用。解澱粉芽孢桿菌（Bacillusamyloliquefaciens）SIP0902菌株保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M2014323。本發明的解澱粉芽孢分離自凡納濱對蝦的腸道，是一種內源性菌株，該菌株對包括副溶血弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌等7種水產動物致病弧菌均具有較強的拮抗效果。該菌株製備的解澱粉芽孢桿菌粉劑，可明顯增強凡納濱對蝦非特性免疫功能，提高對蝦抗病原菌感染能力。
【專利說明】一株解澱粉芽孢桿菌及其在水產養殖中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬於微生物工程【技術領域】，具體涉及一株解澱粉芽孢桿菌及其在水產養殖 中的應用。
【背景技術】
[0002] 水產養殖在我國農業經濟中具有舉足輕重的地位。但隨著集約化、規模化、工廠 化等高密度養殖模式的迅猛發展及整個養殖環境的持續惡化，水產養殖病害頻繁爆發每年 給水產養殖造成了巨大的經濟損失；抗生素的使用在早期的水產養殖生產中發揮了重要作 用，是人們防止水產動物病害的首選方案；但病原微生物耐藥性的不斷增強以及人們對抗 生素濫用、水產品藥物殘留等關係人類健康問題的關注，迫使抗生素以及一些化學藥品的 在水產養殖的應用都將受到嚴格限制；因此開發環境友好及可持續發展戰略的病害防控技 術及產品是水產養殖業亟需解決的問題。
[0003] 生物拮抗是自然界普遍存在的現象，某些種類的微生物通過競爭營養成分、產生 抑菌物質、降解信號分子等不同方式以達到抑制其他微生物生長的目的。微生物防控技術 就是基於這種自然法則，通過在飼料或養殖環境施加有益微生物控制腸道或水環境中致病 微生物的數量，維持養殖動物腸道健康及良好的養殖環境。作為抗生素的一種替代方案，益 生菌的使用在保證養殖動物生產性能及健康狀況的同時，也能避免藥物殘留等潛在的水產 品安全風險，可以創造較好的經濟和社會效益。
[0004] 現有的益生菌產品種類繁多，主要包括光合細菌、酵母菌、乳酸菌及芽孢桿菌。其 中芽孢桿菌屬於芽孢桿菌科，廣泛分布於養殖環境及動物腸道，因為具有較強的胞外酶分 泌能力以及容易生產、保存等優點，在水產養殖中具有非常廣泛的應用。同時由於芽孢桿菌 種類繁多，不同種屬甚至同一種屬不同菌株之間，其特性(如胞外酶分泌能力、拮抗物質的 種類及效果)可能也千差萬別。因此在眾多的芽孢桿菌中篩選到具有廣譜抗菌效果，來源於 對蝦腸道、適用於水產養殖的獨特菌株尤為重要。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在於提供一株解澱粉芽孢桿菌及其在水產養殖中的應用。
[0006] 本發明所採取的技術方案是： 解澱粉芽抱桿菌(ifeciBiAs 已於 2014 年 7 月 4 日保藏 於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO :M 2014323。
[0007] 解澱粉芽孢桿菌SIP0902在製備抑菌製劑中的應用。
[0008] 解澱粉芽孢桿菌SIP0902在製備水產免疫增強劑中的應用。
[0009] 解澱粉芽孢桿菌SIP0902在製備養殖水體改善劑中的應用。
[0010] 一種抑菌製劑，其含有解澱粉芽孢桿菌SIP0902。
[0011] 一種水產免疫增強劑，其含有解澱粉芽孢桿菌SIP0902。
[0012] 一種水產養殖調水劑，其含有解澱粉芽孢桿菌SIP0902。
[0013] 一種解澱粉芽孢桿菌SIP0902菌粉的製備方法，包括如下步驟： (1) 將解澱粉芽孢桿菌SIP0902菌種劃線於種子固體培養基中進行種子培養； (2) 種子培養結束後，從平板挑取一個單菌落接種於解澱粉芽孢桿菌發酵液中發酵培 養，培養溫度控制在28-37°C ; (3) 當發酵液0D600值達到1. 5-2. 0時，停止發酵，取發酵液離心，棄上清液獲得溼 菌泥，並在菌泥中加入冷凍乾燥保護劑，混合均勻後進行冷凍乾燥既得解澱粉芽孢桿菌 SIP0902 粉劑。
[0014] 步驟（1)所述種子固體培養基的組成為：葡萄糖1.0%，蛋白腖0.5%，酵母膏 1. 〇%，瓊脂粉1. 5%，pH 7. 0, ％表示質量百分比。
[0015] 步驟（2)所述解澱粉芽孢桿菌發酵液的組成為：酵母膏0.1%，蛋白腖0.5%，澱 粉1. 0%，硫酸亞鐵0. 001%，餘量為水，％表示質量百分比。
[0016] 本發明的有益效果是： 本發明的解澱粉芽孢桿菌SIP0902分離自凡納濱對蝦的腸道，是一種內源性菌株，該 菌株對包括副溶血弧菌、鰻弧菌、溶藻弧菌等7種水產動物致病弧菌均具有較強的拮抗效 果。該菌株製備的解澱粉芽孢桿菌粉劑，可明顯增強凡納濱對蝦非特性免疫功能，提高對蝦 抗病原菌感染能力。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例對本發明作進一步的說明，但並不局限於此。
[0018] 實施例1解澱粉芽孢桿菌SIP0902 解澱粉芽抱桿菌(ifeciBiAs SIP0902 已於 2014 年 7 月 4 日保藏 於中國典型培養物保藏中心（CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION，CCTCC)，地址 為中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC NO :M 2014323。
[0019] 菌株信息如下： 1、來源：解澱粉芽孢桿菌SIP0902分離自健康凡納濱對蝦的腸道，經肌肉注射實驗證 明對凡納濱對蝦無致病性。
[0020] 2、解澱粉芽孢桿菌SIP0902的菌種形態特徵： 菌落特徵：在TSA培養基表明，菌落扁平、圓形，邊緣整齊，表面灰白色，乾燥，不透明， 中間具有典型的白色圓圈。不能在TCBS培養基生長。
[0021] 細胞特徵：革蘭氏染色陽性，短杆狀，無莢膜，可形成中生芽孢，大小0. 6-0. 7 μιηΧΟ. 8-1. 0 觸。
[0022] 芽孢特徵：中生，孢囊不膨大，方形。
[0023] 生理生化特徵：見表1。
[0024] 表1解澱粉芽孢桿菌生理生化特徵
【權利要求】
1. 解澱粉芽孢桿菌) SIP0902,保藏於中國典型培養物 保藏中心，保藏編號為CCTCC N0:M 2014323。
2. 權利要求1所述的解澱粉芽孢桿菌SIP0902在製備抑菌製劑中的應用。
3. 權利要求1所述的解澱粉芽孢桿菌SIP0902在製備水產免疫增強劑中的應用。
4. 權利要求1所述的解澱粉芽孢桿菌SIP0902在製備養殖水體改善劑中的應用。
5. -種抑菌製劑，其含有權利要求1所述的解澱粉芽孢桿菌SIP0902。
6. -種水產免疫增強劑，其含有權利要求1所述的解澱粉芽孢桿菌SIP0902。
7. -種水產養殖調水劑，其含有權利要求1所述的解澱粉芽孢桿菌SIP0902。
8. -種解澱粉芽孢桿菌SIP0902菌粉的製備方法，包括如下步驟： (1) 將解澱粉芽孢桿菌SIP0902菌種劃線於種子固體培養基中進行種子培養； (2) 種子培養結束後，從平板挑取一個單菌落接種於解澱粉芽孢桿菌發酵液中發酵培 養，培養溫度控制在28-37°C ; (3) 當發酵液0D600值達到1. 5-2. 0時，停止發酵，取發酵液離心，棄上清液獲得溼 菌泥，並在菌泥中加入冷凍乾燥保護劑，混合均勻後進行冷凍乾燥既得解澱粉芽孢桿菌 SIP0902 粉劑。
9. 根據權利要求8所述的製備方法，其特徵在於，步驟（1)所述種子固體培養基的組成 為：葡萄糖1. 〇%，蛋白腖0. 5%，酵母膏1. 0%，瓊脂粉1. 5%，pH 7. 0, ％表示質量百分比。
10. 根據權利要求8所述的製備方法，其特徵在於，步驟（2)所述解澱粉芽孢桿菌發酵 液的組成為：酵母膏0.1%，蛋白腖0.5%，澱粉1.0%，硫酸亞鐵0.001%，餘量為水，％表示 質量百分比。
【文檔編號】C12N1/20GK104195067SQ201410319443
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月7日 優先權日:2014年7月7日
【發明者】王芸, 林黑著, 牛津, 王珺, 陳素文, 周傳朋 申請人:中國水產科學研究院南海水產研究所