提高蚓激酶口服吸收生物利用度的方法
2023-09-16 02:26:20 1
專利名稱：提高蚓激酶口服吸收生物利用度的方法
技術領域：
本發明屬於藥物劑型和製劑技術領域，涉及改善或提高蚓激酶口服吸收生物利用度的方法，即在口服給藥時將蚓激酶與吸收促進劑或/和酶抑制劑混合製成的腸溶組合製劑，有效改善或提高體內血漿中蚓激酶濃度，從而提高蚓激酶療效。
背景技術：
血栓疾病一直是困擾人類的重要疾病，是導致心、腦和外周血管時間的最後關鍵環節，是致死和致殘的直接原因。我們正面臨著血栓疾病的巨大挑戰。蚓激酶(earthworm fibrinolytic enzyme，EFE)是從一種被稱為「地龍」的蚯蚓中提取出的蚯蚓溶纖蛋白酶，具有直接溶解纖維蛋白的纖溶酶活性，又具有類尿激酶的纖溶酶原激活活性，因此既能溶解陳舊血栓又能抑制新血栓形成。實驗表明該酶具有抗凝、溶纖、改善血液流變學性質，可以口服。目前在國內已上市腸溶口服膠囊製劑，用於治療腦血栓、中風後遺症等疾病，是預防和治療血栓疾病的有效藥物。
到目前為止，肽和蛋白類藥物的給藥途徑仍然是以注射為主。但是頻繁的注射造成病人治療的依從性差，而口服給藥仍是目前最受歡迎，最方便的一種給藥途徑，因此開發肽和蛋白類藥物的口服製劑勢在必行。北京大學張強教授課題組曾研究蛋白質大分子藥物水蛭素的口服吸收機理，並初步證實了水蛭素分子口服吸收主要是通過腸黏膜上皮細胞的內吞作用實現跨膜轉運。有研究者採用免疫組化方法研究證實了將體外十二指腸段與蚓激酶分子溫浴一段時間後可在腸上皮細胞包內檢測到蚓激酶分子的存在。
到目前為止，多肽和蛋白(如胰島素、胰島素樣生長因子和表皮生長因子)口服吸收機制的研究工作仍不系統、不深入。因此當眾多的具有生物活性的治療性多肽和蛋白不斷湧出的時候，當人們渴望比注射更安全，更方便的給藥途徑的時候，尤其是對於某一種多肽蛋白類藥物已經證明口服吸收有效的時候，投入大量的工作去探討增加這類藥物口服吸收生物利用度勢在必行。
本發明意外的發現將蚓激酶與吸收促進劑或/和酶抑制劑混合製成腸溶組合製劑時，可以有效提高體內血漿中蚓激酶濃度，從而改善或提高蚓激酶療效。
發明內容
本發明提供一種蚓激酶藥物製劑，該製劑含有有效量的藥物活性成分蚓激酶和適宜的可促進蚓激酶吸收的成分，如一種或幾種吸收促進劑或/和酶抑制劑。
本發明提出了改善或提高蚓激酶口服吸收生物利用度的方法，其特徵在於口服給藥時將蚓激酶與吸收促進劑或/和酶抑制劑混合製成一種腸溶組合製劑，能有效改善或提高體內血漿中蚓激酶濃度。
本發明所述的吸收促進劑選自膽酸鹽，陰離子表面活性劑，非離子表面活性劑，中鏈甘油酯，水楊酸，醯基胺基酸，醯基肉鹼，Na2-EDTA，卵磷脂，殼聚糖。優選的是去氧膽酸鈉、Na2-EDTA、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉、辛酸鈉、泊羅沙姆、羥丙基-β-環糊精，更優選的是殼聚糖，Na2-EDTA。
發明所使用的吸收促進劑，其在製劑中的重量百分比可在0.01％-10％之間，優選的是0.1-10％，更優選的是1-10％。
發明所述的酶抑制劑選自桿菌肽，酪蛋白，抑氨肽酶素B(Bestatin)，亮抑肽酶(leupeptin)，甘氨膽酸鈉，胱蛋白(cystatin)，Aprotinin，糜蛋白酶抑制劑，胰凝乳蛋白酶抑制劑，氨肽酶抑制劑(amastatin)，屈來賽多，Bowman-Birk抑制劑和大豆胰蛋白酶抑制劑。優選的是亮抑肽酶(leupeptin)，Aprotinin，桿菌肽。
發明所使用的酶抑制劑，其在製劑中的重量百分比可在0.01％-10％之間，優選的是0.1-10％，更優選的是1-10％。
發明所述的吸收促進劑和酶抑制劑可以單獨使用，也可以混合使用，混合使用時，吸收促進劑與酶抑制劑的比例可在1∶100-100∶1之間。優選的是1∶50-50∶1，更優選的是1-20∶20-1混合使用的吸收促進劑和酶抑制劑與蚓激酶一起製成的腸溶組合製劑，同樣可以促進蚓激酶口服吸收，本發明優選的混合使用的吸收促進劑和酶抑制劑是殼聚糖或Na2-EDTA和亮抑肽酶(leupeptin)或Aprotinin或桿菌肽的混合。優選的比例是1∶20-20∶1，更優選是是1∶10-10∶1。
更優選的是Na2-EDTA和桿菌肽的混合，它們的比例是1-2∶5-10，優選的是1∶5本發明優選的配方組成是蚓激酶1-2份，Na2-EDTA1-2份，桿菌肽5-10份，右旋糖苷50-100份，其餘為腸溶材料。更優選的是蚓激酶1份，Na2-EDTA1份，桿菌肽5份，右旋糖苷50份。
本發明優選腸溶製劑，腸溶製劑使用上述吸收促進劑和酶抑制劑效果比普通製劑優良，所述腸溶製劑是通過在製劑中加入腸溶材料，使製劑口服後，在胃中不溶解，進入小腸或大腸後在腸道的鹼性環境下溶解並吸收的製劑，所述腸溶製劑可根據現有技術的製備方法製備，所用腸溶材料可以是任何一種或幾種已知的腸溶材料，如丙烯酸樹脂、蟲膠、醋酸纖維素酞酸酯和羥丙甲纖維素酞酸酯，本發明優選的腸溶製劑的腸溶材料是丙烯酸樹脂和羥丙甲纖維素酞酸酯。
本發明的製劑，是口服的腸溶製劑，劑型可以是任何適宜口服的劑型，優選的如腸溶膠囊、腸溶片劑、腸溶微粒、腸溶溶液或腸溶混懸液，其製備可以採用製劑學常規技術，如將一定比例的吸收促進劑(去氧膽酸鈉、Na2-EDTA、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉、辛酸鈉、泊羅沙姆、羥丙基-β-環糊精)與一定比例的蚓激酶混合製成腸溶製劑(包括腸溶膠囊、腸溶包衣片、腸溶微粒)。
將一定比例的酶抑制劑(桿菌肽，酪蛋白，抑氨肽酶素B(Bestatin)，亮抑肽酶(leupeptin)，甘氨膽酸鈉，胱蛋白(cystatin)，Aprotinin，糜蛋白酶抑制劑，胰凝乳蛋白酶抑制劑，氨肽酶抑制劑(amastatin)，屈來賽多，Bowman-Birk抑制劑和大豆胰蛋白酶抑制劑)與一定比例的蚓激酶混合製成腸溶製劑(包括腸溶膠囊、腸溶包衣片、腸溶微粒)。
將一定比例的酶抑制劑(桿菌肽，酪蛋白，貝他定(Bestatin)，亮抑肽酶(leupeptin)，甘氨膽酸鈉，Aprotinin，糜蛋白酶抑制劑，胰凝乳蛋白酶抑制劑，氨肽酶抑制劑(amastatin)，屈來賽多，Bowman-Birk抑制劑和大豆胰蛋白酶抑制劑)和一定比例的吸收促進劑(去氧膽酸鈉、Na2EDTA、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉、辛酸鈉、泊羅沙姆、羥丙基-β-環糊精)與一定比例的蚓激酶混合製成腸溶製劑(包括腸溶膠囊、腸溶包衣片、腸溶微粒)。
綜合起來，本發明提高口服蚓激酶生物利用度的原理可能包括以下幾點1、由於吸收促進劑能有效地改善腸道黏膜通透性、延長黏膜組織滯留時間以及增強黏膜上皮細胞的跨膜轉運，蚓激酶可通過增強滲透和延長滯留時間達到腸道黏膜跨膜轉運量增加的目的。2、酶抑制劑能有效抑制腸道內消化酶對蚓激酶分子的降解破壞作用，使得活性藥物分子在腸道黏膜組織中保有量增加。簡單地說，吸收促進劑和酶抑制劑或兩者合用的方式與蚓激酶聯合使用時可使得血液中蚓激酶量顯著增加，從而提高了口服蚓激酶療效。
本發明的目的是將吸收促進劑和酶抑制劑或兩者合用與蚓激酶混合製成腸溶組合製劑，可使得血液中蚓激酶量顯著增加，從而提高了口服蚓激酶療效。吸收促進劑能有效地改善腸道黏膜通透性、延長黏膜組織滯留時間以及增強黏膜上皮細胞的跨膜轉運，蚓激酶可通過增強滲透和延長滯留時間達到腸道黏膜跨膜轉運量增加的目的。酶抑制劑能有效抑制腸道內消化酶對蚓激酶分子的降解破壞作用，使得活性藥物分子在腸道黏膜組織中保有量增加。本發明結合了吸收促進劑和酶抑制劑能促進蚓激酶跨越腸道黏膜屏障的策略，從而提高了血漿中生物大分子蚓激酶濃度，能夠提高蚓激酶的治療效果。
本發明用吸收促進劑與蚓激酶混合製成的腸溶組合製劑，可以顯著地提高血漿中蚓激酶濃度，進一步提高口服蚓激酶的治療效果。
本發明與已上市蚓激酶腸溶膠囊比較，可以顯著改善印激酶藥物的口服吸收生物利用度。其作用機制可能與吸收促進劑和酶抑制劑能促進蚓激酶跨越腸道黏膜屏障有關，提高了血漿中生物大分子蚓激酶濃度，從而能夠提高蚓激酶的治療效果。
本發明工藝簡單，能有效地改善口服蚓激酶腸溶膠囊的生物利用度。可直接將一定比例的吸收促進劑和酶抑制劑各自單獨或同時使用與與蚓激酶混合均勻製備成適宜的口服劑型，如腸溶膠囊、片劑、微粒、溶液或混懸液。因此只需用簡單的混合工藝即可，適於大工業生產。
圖1十二指腸部位給藥時各種吸收促進劑影響蚓激酶吸收的血藥濃度-時間曲線(n＝5)圖2十二指腸部位給藥時各種酶抑制劑影響蚓激酶吸收的血藥濃度-時間曲線(n＝5)圖3十二指腸部位給藥時殼聚糖(2.0％)影響蚓激酶吸收的血藥濃度-時間曲線(n＝5，mean±S.D)
具體實施例方式
本發明提出的改善或提高蚓激酶口服吸收生物利用度的實施方式詳細說明如下實施例1蚓激酶腸溶組合製劑製備工藝將4mg蚓激酶、20mg桿菌肽、4mg Na2-EDTA及172mg右旋糖苷混合均勻後，裝入腸溶膠囊即可的200mg蚓激酶組合製劑。
實施例2、蚓激酶與吸收促進劑聯合用藥將一定比例的吸收促進劑(去氧膽酸鈉、Na2EDTA、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉、辛酸鈉、泊羅沙姆、羥丙基-β-環糊精)與一定濃度的FITC螢光標記的蚓激酶混合配製成溶液。以單獨使用蚓激酶為對照。採用十二指腸部位給藥方式，先用手術打開腹腔，將一定體積的藥物溶液一次性注射入腸腔內，開始眼眶取血，測定各時間點血漿中藥物濃度。
實施例3、蚓激酶與酶抑制劑聯合用藥將一定比例的酶抑制劑(桿菌肽、酪蛋白、貝他定(Bestatin)、亮抑肽酶、Aprotinin、胰酶抑制劑、甘氨膽酸鈉)與一定濃度的FITC螢光標記的蚓激酶混合配製成溶液。以單獨使用蚓激酶為對照。採用十二指腸部位給藥方式，先用手術打開腹腔，將一定體積的藥物溶液一次性注射入腸腔內，開始眼眶取血，測定各時間點血漿中藥物濃度。
實施例4、蚓激酶與吸收促進劑和酶抑制劑聯合用藥將一定比例的酶抑制劑(桿菌肽、酪蛋白、貝他定(Bestatin)、亮抑肽酶(leupeptin)、Aprotinin、胰酶抑制劑、甘氨膽酸鈉、抑糜蛋白酶素，屈來賽多，Bowman-Birk抑制劑和大豆胰蛋白酶抑制劑)和一定比例的吸收促進劑(去氧膽酸鈉、Na2EDTA、殼聚糖、十二烷基硫酸鈉、辛酸鈉、泊羅沙姆、羥丙基-β-環糊精)與一定濃度的FITC螢光標記的蚓激酶混合配製成溶液。以單獨使用蚓激酶為對照。採用十二指腸部位給藥方式，先用手術打開腹腔，將一定體積的藥物溶液一次性注射入腸腔內，開始眼眶取血，測定各時間點血漿中藥物濃度。
實施例5、吸收促進劑對蚓激酶十二指腸部位吸收的影響圖1中顯示十二指腸給藥時各種吸收促進劑對蚓激酶血藥濃度-時間曲線的影響。以藥-時曲線下面積(AUC)值作為評價指標，比較各吸收促進劑對蚓激酶的吸收促進作用(表1)。結果表明，與單純蚓激酶給藥(Control)相比，各吸收促進劑與蚓激酶一起給藥後的AUC值均有明顯增加，，各吸收促進劑對蚓激酶腸道吸收促進作用的強弱順序為2.5％去氧膽酸鈉(SDCh)＞2.5％EDTA＞2.5％殼聚糖(Chitosan)＞2.5％十二烷基硫酸鈉(SDS)＞2.5％辛酸鈉(Na-Caprylate)＞2.5％泊羅沙姆(Poloxamer-188)＞2.5％羥丙基-β-環糊精(HP-β-CD)。
表1 十二指腸部位給藥時各種吸收促進劑影響蚓激酶吸收的藥物動力學參數比較(n＝5)
實施例6、酶抑制劑對蚓激酶十二指腸部位吸收的影響圖2中顯示十二指腸給藥時各種酶抑制劑對蚓激酶血藥濃度-時間曲線的影響。以藥-時曲線下面積(AUC)值作為評價指標，比較各酶抑制劑對蚓激酶口服吸收量的增加作用(表2)。結果表明，與單純蚓激酶給藥相比，各酶抑制劑與蚓激酶聯合用藥後的AUC值均有明顯增加，但不同的酶抑制劑之間有不同程度的促吸收效果，各種酶抑制劑對蚓激酶腸道吸收促進作用的強弱順序為leupeptin(1％)＞Aprotinin(1％)＞桿菌肽bacitracin(0.5％)＞甘氨膽酸鈉sodium glycocholate(1％)＞酪蛋白casein(0.5％)實施例7、殼聚糖對蚓激酶十二指腸吸收的促進作用採用十二指腸原位結紮法，考察殼聚糖在十二指腸部位對蚓激酶吸收的影響，結果見圖3和表2。AUC/Area比值用來表示十二指腸原位結紮蚓激酶吸收效果，其中Area為所截取腸段的面積。從實驗結果來看，2％殼聚糖組蚓激酶吸收量與未加殼聚糖組相比，有非常顯著的促進吸收的效果(P＜0.01)。
表2 十二指腸部位給藥時殼聚糖(2.0％)影響蚓激酶吸收的藥物動力學參數比較
實施例8蚓激酶腸溶組合製劑製備工藝將4mg蚓激酶、20mg亮抑肽酶、4mg殼聚糖，及172mg右旋糖苷混合均勻後，裝入腸溶膠囊即可的200mg蚓激酶組合製劑。
實施例9蚓激酶腸溶組合製劑製備工藝將4mg蚓激酶、20mg Aprotinin、4mg卵磷脂，及172mg右旋糖苷混合均勻後，裝入腸溶膠囊即可的200mg蚓激酶組合製劑。
實施例10蚓激酶腸溶組合製劑製備工藝將8mg蚓激酶、10mg桿菌肽、8mg Na2-EDTA及300mg右旋糖苷混合均勻後，裝入腸溶膠囊即可的蚓激酶組合製劑。
實施例11蚓激酶腸溶組合製劑製備工藝將8mg蚓激酶、10mg桿菌肽、8mg Na2-EDTA及300mg右旋糖苷混合均勻後，制粒，壓片，包腸溶衣，即得蚓激酶組合製劑。
權利要求
1.一種蚓激酶腸溶製劑，其特徵在於，製劑中含有有效量的蚓激酶和可促進蚓激酶在腸道吸收的成分，所述可促進蚓激酶在腸道吸收的成分選自吸收促進劑和酶抑制劑或它們的混合。
2.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，所述吸收促進劑選自膽酸鹽，陰離子表面活性劑，非離子表面活性劑，中鏈甘油酯，水楊酸，醯基胺基酸，醯基肉鹼，Na2-EDTA，卵磷脂，殼聚糖；所述酶抑制劑選自桿菌肽，酪蛋白，Camostat，Mesilate，抑氨肽酶素B，亮抑肽酶，甘氨膽酸鈉，胱蛋白，Aprotinin，糜蛋白酶抑制劑，胰凝乳蛋白酶抑制劑，氨肽酶抑制劑，屈來賽多，Bowman-Birk抑制劑和大豆胰蛋白酶抑制劑。
3.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，所使用的吸收促進劑，其在製劑中的重量百分比在0.01％-10％之間。
4.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，發明所使用的酶抑制劑，其在製劑中的重量百分比在0.01％-10％之間。
5.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，所述吸收促進劑和酶抑制劑的混合，吸收促進劑和酶抑制劑的比例在1∶100-100∶1之間。
6.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，所述腸溶製劑是口服的腸溶製劑，選自腸溶膠囊、腸溶片劑、腸溶微粒、腸溶溶液和腸溶混懸液。
7.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，還含有藥物可接受的腸溶材料。
8.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，所述腸溶材料選自丙烯酸樹脂、蟲膠、醋酸纖維素酞酸酯和羥丙甲纖維素酞酸酯。
9.如權利要求1所述的腸溶製劑，其特徵在於，其配方組成為蚓激酶1-2份，Na2-EDTA 1-2份，桿菌肽5-10份，右旋糖苷50-100份，其餘為腸溶材料。
10.如權利要求1所述的腸溶製劑的製備方法，其特徵在於，包括將蚓激酶和可促進蚓激酶在腸道吸收的成分混合的步驟，所述可促進蚓激酶在腸道吸收的成分選自吸收促進劑和酶抑制劑或它們的混合。
全文摘要
本發明屬於藥物劑型和製劑技術領域，涉及改善或提高蚓激酶口服吸收生物利用度的方法，其特徵在於將蚓激酶與吸收促進劑或/和酶抑制劑聯合使用時能有效改善或提高體內血漿中蚓激酶濃度，從而提高蚓激酶療效。本發明的特點在於，將蚓激酶與吸收促進劑或/和酶抑制劑聯合使用，達到增加蚓激酶口服吸收量的目的。
文檔編號A61P7/00GK1814284SQ200510134208
公開日2006年8月9日 申請日期2005年12月12日 優先權日2005年12月12日
發明者王堅成, 李玉華, 張強, 張華 申請人:北京大學