萬古黴素沉澱方法
2023-09-16 06:19:05 2
專利名稱：：萬古黴素沉澱方法
技術領域：
：本發明涉及抗生素生產
技術領域：
，具體涉及一種萬古黴素的沉澱方法。技術背景萬古黴素(Vancomycin)是1956年Micormick等從一株東方擬無枝酸菌發酵液中分離得到的一種糖肽類抗生素，是放線菌產生的糖肽類抗生素中具有代表性的一種。萬古黴素用於治療革蘭氏陽性菌引起的感染疾病，特別是目前臨床上對由p—內醯胺類抗生素引起的耐藥金黃色葡萄球菌引起的嚴重感染疾病有較好的療效。由於萬古黴素的意義及其重要性，人們一直在尋找這種抗生素髮酵混合物中分離萬古黴素的方法。萬古黴素的發酵和分離方法在美國專利(專利號3067099)中公布，之後也有專利公開過萬古黴素的回收方法，包括使用與水混合的非溶劑如異丙醇、乙醇或丙酮淨化發酵液，沉澱後分離產物(美國專利號4440753);使用磷酸鹽離析產物(歐洲專利號0145484);使用銅鹽離析產物(美國專利號4845194);調整發酵液pH到7.8，在不攪拌的情況下沉澱產物(歐洲專利號0323150);通過咪唑/萬古黴素混合後過濾回收(美國專利號4868285)。在抗生素的生產過程中，萬古黴素發酵液中不僅含有抗生素，而且還有不溶的菌絲體懸浮在未反應的中間體稀溶液中，還有新陳代謝雜質以及產物。提取抗生素是非常困難的，需要經過分離，富集和純化的步驟，這些多級步驟不僅價格昂貴，而且每步都會造成萬古黴素的損失。美國專利(專利號5235037)公開了一種萬古黴素的沉澱方法，用於從萬古黴素水溶液中分離萬古黴素，該方法通過往萬古黴素水溶液中添加鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽來沉澱萬古黴素，但是，該沉澱過程控制性不強，混合液過濾困難，得到的萬古黴素鹼顏色較深，粉末呈粘狀，難以溶解。
發明內容本發明的目的在於提供一種萬古黴素的沉澱方法，相比現有的沉澱方法，本發明的方法使沉澱過程易控制，混合液易過濾。本發明的萬古黴素沉澱方法是這樣實現的首先將萬古黴素水溶液的pH調節至8.0—9.5,然後往水溶液中加入銨鹽，攪拌20—40分鐘後，避光靜置15—20小時，最後獲得萬古黴素鹼沉澱。根據本發明，所述銨鹽的加入量為2_10%，優選的是2—7%。根據本發明，所述銨鹽包括NH4HC03或(NH4)2C03。通過本發明的方法沉澱萬古黴素後，經過抽濾即可獲得萬古黴素鹼的粉末。本發明的優點在於，沉澱過程易控制，混合液易過濾，得到的萬古黴素鹼顏色淺，粉末鬆散，易溶解。具體實施方式以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用於說明本發明而非用於限定本發明的範圍。根據本發明，萬古黴素發酵液可以通過任何產萬古黴素的菌株在適當的條件下發酵獲得，例如通過東方擬無枝酸菌^^co/flro;w'sSIPI—43419發酵獲得(見申請號為CN01132048.6的中國發明專利申請)。根據本發明，所述萬古黴素水溶液，是指萬古黴素發酵液經陶瓷膜過濾得到濾液，再使濾液通過大孔吸附樹脂，然後解吸得到含有萬古黴素的洗脫液，洗脫液經活性炭脫色過濾後再通過鈉濾濃縮得到濃縮液。以下實施例中所涉及的百分比(％)，除特別說明外，均指重量百分比。實施例l一ll、從萬古黴素水溶液中沉澱萬古黴素按表1所示，分別取萬古黴素水溶液(效價110632u/ml，有效組分含量81.32%)，將溶液的pH值調節值8.0—9.5，然後加入適量的銨鹽，攪拌20—40分鐘後，避光靜置15一18小時，獲得萬古黴素鹼沉澱。獲得的萬古黴素鹼經抽濾後即得到萬古黴素鹼的粉末。測定萬古黴素鹼的效價，同時以高效液相色譜法(HPLC)測定其中的有效組分含量，結果列於表l。同時取取萬古黴素水溶液(效價110632u/ml，有效組分含量81.32%)，以專利號為5,235,037的美國專利所報導的方法沉澱萬古黴素以作為對照(CK)，比較兩種方法所獲得的萬古黴素鹼的性狀。表l、萬古黴素的沉澱tableseeoriginaldocumentpage511CK(US5，235，037)觀察獲得的萬古黴素鹼的性狀，結果如下實施例1一3、6—8所獲得的萬古黴素鹼的顏色較淺、且粉末鬆散，實施例4和9獲得的萬古黴素鹼的顏色較淺、粉末不鬆散，略有結塊現象，而實施例5和10的沉澱則呈現粘稠，不能過濾的情況，且顏色較深。相比之下，作為對照的實施例ll獲得的萬古黴素鹼則顏色較深，且粉末略顯粘稠。分別以上述獲得的萬古黴素鹼進行溶解性的實驗，結果顯示，實施例l一4、6—9獲得的萬古黴素鹼的溶解性較好，而實施例5和10以及作為對照的實施例11獲得的萬古黴素鹼則難以溶解。縱上所述，按照本發明的萬古黴素沉澱方法，在銨鹽加入量為2—10%的情況下，獲得的萬古黴素鹼的質量較佳，且本發明的方法明顯優於現有的如專利號為US5,235,037所報導的方法。權利要求1.一種萬古黴素沉澱方法，用於從萬古黴素水溶液中沉澱萬古黴素，其特徵在於包括以下步驟首先將萬古黴素水溶液的pH調節至8.0-9.5，然後往水溶液中加入銨鹽，攪拌20-40分鐘後，避光靜置15-20小時，最後獲得萬古黴素鹼沉澱。2、如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述銨鹽包括NH4HC03或(NH4)2C03。3、如權利要求l所述的方法，其特徵在於，所述銨鹽的加入量為2_10%重量比。4、如權利要求3所述的方法，其特徵在於，所述銨鹽的加入量為2—7%重量比。全文摘要本發明公開了一種萬古黴素沉澱方法，用於從萬古黴素水溶液中沉澱萬古黴素，包括將萬古黴素水溶液的pH調節至8.0-9.5，然後往水溶液中加入銨鹽，攪拌20-40分鐘後，避光靜置15-20小時，最後獲得萬古黴素鹼沉澱。本發明的優點在於，沉澱過程易控制，混合液易過濾，得到的萬古黴素鹼顏色淺，粉末鬆散，易溶解。文檔編號C07H17/08GK101260134SQ20071003781公開日2008年9月10日申請日期2007年3月5日優先權日2007年3月5日發明者孟根水,廣桂珠,潘一斌,王小勇,石敏敏申請人:浙江醫藥股份有限公司新昌製藥廠