一種提高細胞內ros檢測靈敏度的方法
2023-09-15 14:22:35 1
專利名稱:一種提高細胞內ros檢測靈敏度的方法
技術領域:
本發明涉及一種提高細胞內ROS檢測靈敏度的方法。
背景技術:
細胞內ROS(活性氧)的檢測是醫學科研實驗中的常用檢測指標,ROS的產生通過DCFH-DA(2』,7』二氯螢光素二乙酸酯)螢光染料進行檢測。但由於ROS產生後存在時間較短而且不穩定,而且在各種研究中採用的細胞種類不同,所以在檢測中結果經常不理想。本發明提供一種提高細胞內ROS檢測靈敏度的方法。
技術方案本發明是以下技術方案進行的1、培養細胞長滿單層後,用胰蛋白酶消化並混懸於含100mL/L FCS的DMEM培養液中,調整細胞數為2×107/L,以每孔100μL加入96孔培養板中。
2、置於37℃、50mL/L CO2/950mL/L空氣的培養箱,24h後加入不同濃度的刺激物,並設對照組加入等量DMEM,繼續孵育1小時。
3、去掉刺激物,加入DCFH-DA,再孵育1-2小時,孵育時間根據細胞種類進行調整。
4、去掉DCFH-DA,用PBS洗滌2次,檢測細胞螢光強度。激發波長488nm,發射波長530nm。
特徵孵育時間根據細胞種類進行調整。
權利要求
1.一種提高細胞內ROS檢測靈敏度的方法。其特徵在於,該方法按下列步驟順序進行(1)培養細胞長滿單層後,用胰蛋白酶消化並混懸於含100mL/L FCS的DMEM培養液中,調整細胞數為2×107/L,以每孔100μL加入96孔培養板中。(2)置於37℃、50mL/L CO2/950mL/L空氣的培養箱,24h後加入不同濃度的刺激物,並設對照組加入等量DMEM,繼續孵育1小時。(3)去掉刺激物,加入DCFH-DA,孵育時間根據細胞種類進行調整。(4)去掉DCFH-DA,用PBS洗滌2次,檢測細胞螢光強度。激發波長488nm,發射波長530nm。
2.根據權利要求1所述的改良的細胞內活性氧檢測方法,其特徵在於去掉刺激物後加入DCFH-DA孵育時間根據細胞種類進行調整。
全文摘要
一種提高細胞內ROS檢測靈敏度的方法。培養細胞長滿單層後,置於37℃、50mL/L CO
文檔編號C12Q1/02GK1818621SQ200610049810
公開日2006年8月16日 申請日期2006年3月14日 優先權日2006年3月14日
發明者劉慧剛, 徐立紅 申請人:浙江大學