愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA群的製作方法

2023-09-16 17:34:05 2

專利名稱：愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA群的製作方法
技術領域：
本發明涉及愛滋病病毒靶細胞⑶4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA 群。具體的講是在人microRNA組範圍內篩選愛滋病相關miRNA，利用細胞模型和基因芯 片技術相結合的方法建立的愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達 miRNA群，屬生物醫學領域。
背景技術：
microRNA(miRNA)是新近發現的一類約有18-24個核苷酸的內源性非編碼小分 子單鏈RNA，通過不完全互補的方式與編碼蛋白mRNA的3』端非編碼區結合，引起靶mRNA 的降解、活性降低或翻譯受抑，從而在轉錄後水平對基因表達進行調控。miRNA在細胞的 個體發育、增殖、凋亡、分化和應激中扮演著重要的角色，與腫瘤、心臟病、糖尿病和愛滋病 等多種疾病都有著密切聯繫，某些miRNA的產生過程與HIV-1 (human immunodeficiency virus-type 1，人類免疫缺陷病毒)的生活周期相關聯。因此推測在愛滋病的發生過程中， 存在特徵性的miRNA表達譜。HIV-1天然的靶細胞⑶4+T細胞的活化和增殖是HIV-1得以大量繁殖和廣泛播散 的先決條件，1996年Levine等人意外發現，經同時包被在磁珠上的⑶3、⑶28抗體(「⑶3/ CD28 beads")刺激後，活化、增殖的CD4+T細胞，反而獲得了既能抵抗感染又能清除病毒 的能力——來自HIV-1感染者的CD4+T細胞活化後，能逐漸清除已感染的病毒，來自健康成 人的CD4+T細胞活化後，能抵抗HIV-1而不被感染。我們以此特殊效應為基礎，同時以高度 易感並促進病毒增殖的PHA/IL-2活化細胞為反證，構建細胞模型並篩選出愛滋病相關的 miRNA表達圖譜，用以直接篩選安全有效的抗愛滋細胞藥物。

發明內容
本發明的目的在於提供愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表 達miRNA群。本發明採用高通量的人microRNA晶片，通過比較未刺激、⑶3/⑶28磁珠刺激及 PHA/IL-2刺激三種狀態的⑶4+T細胞miRNA表達差異，篩選得到一組愛滋病病毒靶細胞 ⑶4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA群，共包含5個miRNA，其部分或全部組合 作為篩查抗愛滋細胞藥物的標誌；該群miRNA在CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1狀態時高表 達，miRNA群中的5個miRNA的名稱及序列見表1 ；表1抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA群(共5個miRNA)microRNA名字 序列
權利要求
一組愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV 1的特異表達miRNA群，其特徵在於該特異表達miRNA群包含的miRNA名稱分別為hsa mir 130b、hsa mir 18a、hsa mir 19b、hsa mir 34a、hsa mir 363，其部分或全部組合作為篩查抗愛滋細胞藥物的標誌；該群miRNA在CD4+T細胞抵抗和清除HIV 1狀態時高表達。
2.權利要求1所述的愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達 miRNA群，其特徵在於5個miRNA由SEQ ID NO :1_5所示的核苷酸序列組成。
全文摘要
本發明涉及愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA群，屬生物醫學領域。本發明通過採用高通量的人miRNA晶片，比較未刺激、CD3/CD28磁珠刺激及PHA/IL-2刺激三種狀態的CD4+T細胞miRNA表達差異，篩選得到愛滋病病毒靶細胞CD4+T細胞抵抗和清除HIV-1的特異表達miRNA群，該特異表達miRNA群共包含5個miRNA，由SEQ ID NO1-5所示的核苷酸序列組成。本特異表達miRNA群中的各miRNA所調控的靶基因均參與了造成不同生物學效應的顯著功能(Gene Ontology，GO)和信號轉導通路(pathway)，同時在信號轉導網絡(Signal-Net)和基因的調控網絡(GeneRelNet)中處於關鍵結點或重要地位，並有望基於其中單個、多個或全部miRNA建立晶片、分子雜交和RT-PCR的方法檢測樣本中這些miRNA的表達水平，根據這些miRNA的表達水平診斷愛滋病及篩選抗愛滋細胞藥物。
文檔編號C12Q1/68GK101974530SQ201010293220
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月27日 優先權日2010年9月27日
發明者張華堂, 徐雯雯, 郭彥, 陳玲, 韓妙君 申請人:中國科學院昆明動物研究所