一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法
2023-09-09 22:41:55 1
專利名稱：一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法
技術領域：
本發明涉及植物快速繁殖技術領域，尤其涉及一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法。
背景技術：
紅花石蒜的自然繁殖率相當低，平均每年僅產生I 2個子球。組織培養是紅花石蒜快速獲得再生小鱗莖的常用途徑，也是最終實現大量繁殖的有效方式。與一般繁殖方式相比，組織培養不受季節和空間的限制，繁殖率高，而且高效的離體再生體系也是進一步建立遺傳轉化體系的基本條件。儘管有關紅花石蒜的離體快繁已有較多報導，但汙染和褐化問題嚴重，成活率低， 初代誘芽周期長(出芽時間一般需要30 40天，出芽率一般為60%左右)，且小鱗莖生長發育緩慢(第一年直徑增加2. Ocm左右)，這些都是紅花石蒜組織培養方法難以突破的瓶頸。
發明內容
本發明提供了一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法，通過扦插培育獲得幼嫩的外植體材料，再通過液體懸浮培養，能夠誘導紅花石蒜快速產生大量優質的叢生芽。一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法，包括(I)取紅花石蒜的鱗莖扦插於基質中，培育60 90d，獲得幼嫩的小鱗莖；(2)小鱗莖經消毒後，接種於液體培養基中進行誘導培養；(3)誘導出芽後，轉移到固體培養基中進行增殖培養，獲得叢生芽；其中，所述的液體培養基中含有濃度為O. 5 I. Omg/L的α -萘乙酸和濃度為
3.O 5. Omg/L的6-苄氨基腺嘌呤。步驟⑴中，所述的基質可以由泥炭和珍珠巖混合而成。優選地，所述的泥炭和珍珠巖的體積比為3 : I 4 : 1，疏鬆通氣，最有利於插穗的生長。通過所述的扦插獲得的小鱗莖為幼嫩的一年生小鱗莖，能大量、快速地獲得；且小鱗莖含少量或不含內生菌，接種後汙染率極低。步驟⑵中，所述的消毒包括將小鱗莖洗淨，以基盤為中心縱切為2 4塊，用 70% 80%乙醇浸泡30 60s，接著用重量體積濃度為O. I % O. 2%的升汞浸泡3 5min,最後用蒸懼水衝洗乾淨。優選地，所述的液體培養基中還含有濃度為20 40g/L的蔗糖，利於芽生長。所述誘導培養的培養條件優選為於24 26°C、轉速80 IOOrpm的恆溫搖床中， 暗培養30 45d。採用該培養條件能快速誘導出芽。步驟(3)中，所述固體培養基的配方優選為鹿糖20 40g/L，瓊脂8 10g/L， α -萘乙酸O. 5 I. Omg/L, 6-苄氨基腺嘌呤3. O 5. Omg/L。所述增殖培養的培養條件優選為於24 26°C的恆溫培養室中培養90 180d。
本發明提供的上述方法可以用於紅花石蒜的組織培養中，具體為對上述方法獲得的叢生芽進行生根培養、移栽等，即可獲得紅花石蒜的組織培養植株。本發明方法以紅花石蒜鱗莖扦插培育獲得的小鱗莖作為外植體材料，外植體幼嫩且便於大量獲得，汙染率低；同時，採用液體懸浮培養的誘導培養方式，出芽量大且迅速，一個月後即可獲得大量優質的叢生芽。採用本發明方法，具有出芽時間短、出芽率和增殖率高、小鱗莖生長發育迅速等優點。
圖I為本發明對比例I圖2為本發明對比例I圖3為本發明實施例I圖4為本發明實施例I
出芽情況。
以雙鱗片作外植體，培養40d時的出芽情況；
以雙鱗片作外植體，培養160d時的出芽情況；
鱗莖扦插3個月後獲得的幼嫩小鱗莖；
小鱗莖經液體培養一個月再轉至固體培養基後160d時的
具體實施例方式實施例I(I)於春夏季取成熟紅花石蒜的鱗莖(平均周徑13. 40cm,平均鮮重34. 89g,平均鱗片數15層)，以基盤為中心按照「十」字形進行四分切割，獲得的鱗莖塊置於基質(泥炭和珍珠巖的體積比為3 I)中進行扦插；90d後每個鱗莖塊產生I 6個直徑約I. Ocm的小鱗莖，可作外植體材料。(2)將扦插獲得的幼嫩小鱗莖去根、去殘留的母鱗片，洗淨，切去鱗莖上部1/2的部分；再以基盤為中心「十」字形縱切為4塊，用70%乙醇浸泡30s，接著用重量體積濃度為
O.I %的升汞浸泡5min，最後用蒸餾水衝洗乾淨。(3)經消毒後的材料無菌接種到液體培養基中，置於25°C、轉速IOOrpm的恆溫搖床中，暗培養；一個月後產生較多叢生芽，葉片迅速伸長，出芽率高達85. 7%，增殖率可達 231% ；其中，液體培養基的配方為蔗糖30g/L，0-萘乙酸0.5!1^/1，6-苄氨基腺嘌呤 5. 0mg/Lo(4)將材料轉至固體培養基繼續培養；培養160d時腋芽數最多可達10個；其中，固體培養基的配方為蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，α -萘乙酸O. 5mg/L，6_苄氨基腺嘌呤5. Omg/L。對比例I常規雙鱗片法組織培養紅花石蒜(I)將鱗莖去除褐色皮膜、去根，用洗滌劑清洗；切除鱗莖上部2/3的部分，以鱗莖基盤為中心十字縱切，再用流水衝洗30min ;用70%乙醇浸泡30s，接著用重量體積濃度為
O.I %的升汞浸泡lOmin，最後用蒸餾水衝洗乾淨。(2)消毒後去掉鱗莖塊最外層鱗片，並將材料邊緣部分切除，再將鱗莖塊由外層向內層分切獲得若干個帶基盤的雙鱗片，接種至蔗糖30g/L，瓊脂8g/L，α -萘乙酸O. 5mg/L, 6-節氨基腺嘌呤5. Omg/L的固體培養基,於25°C恆溫培養室培養160天。
權利要求
1.一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法，包括(1)取紅花石蒜的鱗莖扦插於基質中，培育60 90d，獲得幼嫩的小鱗莖；(2)小鱗莖經消毒後，接種於液體培養基中進行誘導培養；(3)誘導出芽後，轉移到固體培養基中進行增殖培養，獲得叢生芽；其中，所述的液體培養基中含有濃度為O. 5 I. Omg/L的α -萘乙酸和濃度為3. O 5.Omg/L的6-苄氨基腺嘌呤。
2.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，步驟(I)中，所述的基質由泥炭和珍珠巖混合而成。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述的泥炭和珍珠巖的體積比為3 I 4 I。
4.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，步驟(2)中，所述的消毒包括將小鱗莖洗淨，以基盤為中心縱切為2 4塊，用70% 80%乙醇浸泡30 60s，接著用重量體積濃度為O. 1% O. 2%的升萊浸泡3 5min,最後用蒸懼水衝洗乾淨。
5.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，步驟(2)中，所述的液體培養基中還含有濃度為20 40g/L的蔗糖。
6.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，步驟(2)中，所述誘導培養的培養條件為 於24 26°C、轉速80 IOOrpm的恆溫搖床中，暗培養30 45d。
7.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，步驟(3)中，所述固體培養基的配方為 蔗糖20 40g/L，瓊脂8 10g/L，α-萘乙酸O. 5 I. Omg/L，6-苄氨基腺嘌呤3. O 5.0mg/Lo
8.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於，步驟(3)中，所述增殖培養的培養條件為 於24 26°C的恆溫培養室中培養90 180d。
全文摘要
本發明公開了一種紅花石蒜誘導叢生芽的方法，包括取紅花石蒜的鱗莖扦插於基質中，培育60～90d，獲得幼嫩的小鱗莖；小鱗莖經消毒後，接種於液體培養基中進行誘導培養；誘導出芽後，轉移到固體培養基中進行增殖培養，獲得叢生芽；其中，所述的液體培養基中含有濃度為0.5～1.0mg/L的α-萘乙酸和濃度為3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤。本發明以紅花石蒜鱗莖扦插培育獲得的小鱗莖作為外植體材料，外植體幼嫩且便於大量獲得，汙染率低；同時，採用液體懸浮培養的誘導培養方式，出芽量大且迅速，一個月後即可獲得大量優質的叢生芽。採用本發明，具有出芽時間短、出芽率和增殖率高、小鱗莖生長發育迅速等優點。
文檔編號A01H4/00GK102577817SQ201210065658
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月13日 優先權日2012年1月13日
發明者佘琳芳, 吳昀, 夏宜平, 常樂, 張琳, 肖鬱綿, 陳菁珏 申請人:浙江大學