轉基因油菜標準樣品、其建立方法及應用的製作方法

2023-09-19 22:45:30

專利名稱：轉基因油菜標準樣品、其建立方法及應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於轉基因食品檢測技術領域，具體涉及轉基因油菜RT73的標準樣品製備、其建立方法及其在檢測轉基因油菜RT73中的應用。
背景技術：
近年來，轉基因作物培育技術取得突破進展，陸續推出了ー批新品種，在改善農作物品質、提高產量等方面發揮了巨大作用。然而，人們對轉基因食品的安全性問題存在著很多的爭論。轉基因作物的生態風險、可能帶來的環境問題、作為食品對人體健康影響的問題、產品加貼標籤問題、運輸問題、國際貿易問題、智慧財產權問題等已引起世界廣泛性的關注。轉基因產品的安全性問題已由學術觀點分岐，發展到智慧財產權、環境問題、經濟問題甚至政治問題。歐盟和ー些國家相繼出臺了轉基因產品管理法規，我國於2002年3月開始實施《農業轉基因生物安全管理條例》及其三個配套管理辦法。2001年，歐盟要求對轉基因食品進行標識管理，並提出對非轉基因食品只要不是有意汙染，允許含有1%的轉基因產品(閾值)，而不用標識。日本、韓國、澳大利亞等不同國家限量閾值不同，從1%_5%不等。轉基因食品的檢測是這些g在保護生物和生態安全、維護消費者權益、促進貿易和經濟健康發展的法規和政策的基本依據，其標準化將為制訂、實施和改進這些法規和政策提供有力保證。國內外轉基因食品的檢測研究剛剛起步，許多問題都有待解決，標準樣品則是該領域尚未解決的重要問題。開展轉基因成分檢驗標準樣品的研製在保證測試結果的可比性和溯源性、保障食品安全、解決貿易爭端，促進經濟發展等方面均具有重要的意義。更為嚴峻的問題是目前國外僅有轉基因大豆粉、轉基因玉米粉M0N810等少數幾個品種的標準物質，價格非常昂貴，手續繁多，周轉時間長，不能適時地滿足檢驗檢疫工作的需要；日本正在加緊研製轉基因產品檢測的分子DNA參考標準物質，用於轉基因產品的定量檢測；2005年，我們率先在國內研製成功了轉基因大豆粉國家ニ級標準物質，填補了我國在轉基因成分檢測標準樣品方面的空白，但轉基因油菜籽等標準樣品仍是空白。

發明內容
鑑於國內轉基因標準樣品緊缺的狀況，本項轉基因油菜RT73標準樣品的製備完成，對全面深入的研究解決轉基因成分檢測標準樣品的製備技術和穩定性保證技術，積極開展我國轉基因產品檢測標準樣品的研製，添補該測量領域的空白，具有很重要的現實意 義。轉基因油菜籽RT73品系簡介抗草甘膦轉基因油菜(Roundup Ready )RT73品系含有的外源基因是1)耐除草劑基因CP4 EPSPS，受FMV35S+CTP2啟動子和E9 3』終止子調控；2)標記篩選基因G0Xv247，啟動子和終止子分別為FMV35S+CTP1和E9 3』。質粒圖譜為
權利要求
1.轉基因油菜RT73標準樣品，其特徵在於，通過下述方法製備 a取油菜籽原料放在研缽中，於通風櫥內加入乙醚並用研棒攪拌、研磨，待乙醚蒸發後，將其過100目標準篩，收集粉末備用； b向步驟a所獲得的粉末中加入等質量的水，攪拌均勻後，靜置lh，棄上清，將沉澱物製備成凍乾粉； c以轉基因油菜RT73為原料，按照步驟a和b所述方法製備凍乾粉；d以非轉基因油菜籽為原料，按照步驟a和b所述方法製備凍乾粉；e將步驟c製備的凍乾粉與步驟d製備的凍乾粉按2. 5 :100的重量比例混合後，向混合粉末中加入等質量的水，攪拌均勻後，靜置lh，棄上清，將沉澱物製備成凍乾粉並分裝，(T4°C貯存； 上述步驟ITe中任一步驟所述的凍乾粉，其製備方法為 ①樣品預凍先把樣品在_80°C冷凍2h； ②冷凍過程關好冰凍乾燥機的乾燥室門，開始乾燥室製冷；乾燥室溫度降至_35°C時，開始冷卻阱製冷；冷卻阱製冷溫度降至_40°C時，將步驟①處理的樣品迅速放入乾燥室內，關好乾燥室門；啟動真空泵開始抽真空；當真空度降至O. 5Torr時，結束冷凍過程； ③樣品乾燥乾燥室的溫度設置為15°C，當真空度降至O.ITorr時，樣品已乾燥好； ④關閉真空泵，使乾燥室與外界大氣相通，待內外氣壓平衡後，打開乾燥室門，取出樣品，迅速旋緊瓶蓋。
2.—種轉基因油菜RT73的Real-Time PCR檢測試劑盒，其特徵在於，包括轉基因油菜檢測基因和陽性標準對照品 陽性標準對照品是權利要求I所述的轉基因油菜RT73標準樣品，最小取樣量為IOOmg ； 轉基因油菜檢測基因，包括 RT73基因的檢測引物和探針序列 正向引物SEQIDN0:1 反向引物SEQ ID NO :2 探針SEQ ID NO 3 FatA基因的檢測引物和探針序列 正向引物SEQ ID NO :4 反向引物SEQ ID NO :5 探針SEQ ID NO :6。
全文摘要
本發明公開一種轉基因油菜RT73的標準樣品製備、其建立方法及其在檢測轉基因油菜RT73中的應用，分別以轉基因油菜RT73或非轉基因油菜為原料，將原料研磨、過篩、加水，攪拌、靜置、將沉澱物製備成凍乾粉；再將二者以科學的比例混合，並重複「加水，攪拌、靜置、將沉澱物製備成凍乾粉」的過程，分裝,0℃~4℃貯存；通過上述方法獲得轉基因油菜RT73的標準樣品，也可以應用於轉基因油菜RT73的Real-Time PCR檢測試劑盒。這對全面深入的研究解決轉基因成分檢測標準樣品的製備技術和穩定性保證技術，積極開展我國轉基因產品檢測標準樣品的研製，添補該測量領域的空白，具有很重要的現實意義。
文檔編號C12Q1/68GK102703590SQ20121017336
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月30日 優先權日2012年5月30日
發明者於兵, 徐君怡, 曹冬梅, 曹際娟 申請人:於兵, 徐君怡, 曹冬梅, 曹際娟