檢測貓叫症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒的製作方法
2023-09-19 20:49:20
專利名稱：檢測貓叫症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種生物技術領域的基因晶片及使用方法、試劑盒，具體涉及一種檢測貓叫症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒。
背景技術：
貓叫症候群(Cri-du-chat syndrome，CDCS)是由於5號染色體短臂缺失所引起的一種較為罕見的染色體病，是常染色體結構畸變所致疾病中常見的一種。新生兒發病率為 1/50000。該病的臨床特點主要是高調的貓叫樣哭聲，生長發育障礙和嚴重的智力低下，並具有特殊面容，如小頭、圓臉、眼距寬、內眥贅皮、眼瞼下垂、斜視、小下頌、耳位低等，此外還有低出生體重、肌張力低下、先天性心臟病等，其中，高調的貓叫樣哭聲是具有診斷意義的特徵。貓叫症候群的大多數病例是在出生時或出生後有異常哭聲而備受注意的，有關貓叫症候群的細胞分子遺傳學診斷目前有以下方法染色體常規顯帶技術分析，常用方法有 G顯帶、R顯帶、T顯帶、C顯帶、Q顯帶；此外，限制性片段長度多態性(restriction fragment length polymorphisms, RFLP)分析,短串聯重複序列(short tandom repeats, STRs)多態性分析、Southern印跡技術和DOP-PCR(變性寡核苷酸引物PCR)技術都可用於貓叫症候群的診斷分析。然而尚無一種快速、低成本、大通量和自動化檢測貓叫症候群基因突變的方法。比較基因組雜交(CGH)晶片分析技術是一種突破性技術，能夠支持研究人員通過微陣列準確研究與疾病有關的染色體的變化。比較基因組雜交(CGH)晶片分析的原理是在一張晶片上用兩份標記不同螢光素的樣品(檢測樣品和對照樣品)同時進行雜交，從而快速而又直觀地檢測實驗樣品和對照樣品之間基因組DNA的拷貝數量的差異。CGH應用於疾病遺傳學的研究，可以提供一個全基因組的掃描圖，提示樣本DNA在整個染色體組的哪個特定位置存在擴增或缺失，那些發生擴增的區域，極有可能存在致病基因，而缺失區域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一種新的技術方案來克服現有技術的上述缺陷和不足。
發明內容
本發明的目的在於克服現有技術的不足，提供一種檢測貓叫症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒。本發明的基因晶片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，時間短，成本低。本發明還提供了前述檢測貓叫症候群的基因晶片的使用方法及試劑盒。本發明的目的是通過以下技術方案實現第一方面，本發明提供了一種檢測貓叫症候群的基因晶片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。優選地，所述固相載體選自載玻片、矽片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。第二方面，本發明還涉及前述檢測貓叫症候群的基因晶片的使用方法，包括以下步驟 (a)製備樣品DNA片段；
(b)螢光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因晶片雜交；(e)掃描檢測基因晶片的雜交信號，獲得結果。第三方面，本發明還涉及一種用於檢測貓叫症候群的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因晶片。優選地，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3_dUTP。優選地，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5_dUTP。本發明具有如下的有益效果本發明的基因晶片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，該晶片多次試驗重複性高；時間短，從樣本抽提到獲得掃描結果可在一天內完成。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解為這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等分子克隆實驗室手冊見New York Cold Spring Harbor Laboratory出版社1989年版中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。實施例本實施例的基因晶片由固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列，所述固相載體為玻片。本實施例基因晶片的固相載也可選用硝酸纖維素膜、矽片、尼龍膜或聚本乙烯。本實施例的寡核苷酸探針由安捷倫公司生產，同時本實施例的基因晶片也由安捷倫公司按照常規方法生產。本實施例基因晶片的使用方法，步驟如下(1)樣品DNA片段的製備取患者、正常人血液，採用常規方法抽提全基因組DNA(gDNA)。將水浴鍋溫度調到371和651，溶化10\8吐作『C (見下表)，短暫渦旋震蕩後離心數秒。對每個反應來說，將gDNA加入到適當的無核酸酶的PCR管中，並加入無核酸酶的水使反應體積達到10. 1 μ L0在冰上準備酶切混合母液，按順序加入以下試劑
權利要求
1.一種檢測貓叫症候群的基因晶片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡核苷酸探針，其特徵在於，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO. 1 50所示的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的檢測貓叫症候群的基因晶片，其特徵在於，所述固相載體選自載玻片、矽片、硝酸纖維素膜、尼龍膜或聚本乙烯。
3.—種如權利要求1所述檢測貓叫症候群的基因晶片的使用方法，其特徵在於，包括以下步驟(a)製備樣品DNA片段；(b)螢光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因晶片雜交；(e)掃描檢測基因晶片的雜交信號，獲得結果。
4.一種用於檢測貓叫症候群的試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒包括權利要求1所述的基因晶片。
5.根據權利要求4所述的用於檢測貓叫症候群的試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy3-dUTP。
6.根據權利要求4所述的用於檢測貓叫症候群的試劑盒，其特徵在於，該試劑盒還包括標記物，所述標記物為Cy5-dUTP。
全文摘要
本發明涉及一種檢測貓叫症候群的基因晶片及使用方法、試劑盒，所述基因晶片包括固相載體和固定在該固相載體上的探針，所述寡核苷酸探針為SEQ ID NO.1-50所示的核苷酸序列；所述使用方法包括如下步驟(a)製備樣品DNA片段；(b)螢光標記上述DNA片段；(c)洗脫上述標記產物；(d)將標記產物與所述基因晶片雜交；(e)掃描檢測基因晶片的雜交信號，獲得結果；本發明還涉及包含前述基因晶片的試劑盒。本發明的基因晶片操作步驟簡單，檢測特異性高，穩定性好，從樣本抽提到得到掃描結果可在一個工作日內完成，成本低，適用於臨床患者基因突變檢測、產前診斷和正常人雜合子攜帶者檢測。
文檔編號C12Q1/68GK102559871SQ20111041007
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月9日 優先權日2011年12月9日
發明者吳茜, 李笑天, 秦勝營, 賀林, 郭奇桑, 龔小會 申請人:上海交通大學, 復旦大學附屬婦產科醫院