一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法
2023-09-21 05:56:35 4
一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法
【專利摘要】本發明公開了一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，屬於植物快繁【技術領域】，包括以下步驟：1)選取消毒滅菌處理後的1～2cm莖尖或帶芽莖段作為外植體；2)將外植體放置於誘導培養基中培養產生叢芽，15～20天繁殖出大量叢生芽；3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖；4)經生根培養後，直接放入育苗袋移植獲得種苗。本發明解決了美國紅樹莓苗無性繁殖存在的種苗攜帶病毒、品種退化、產量低等問題,無需採集大量外植體來獲得無菌苗，且不採取激素混用而達到提高增殖率和減少變異的目的，省去了組培苗營養缽移栽的環節，提高移栽成活率，與傳統繁殖方式相比，產量提高約90％，對緩解市場供需矛盾有積極意義。
【專利說明】一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於植物快繁【技術領域】，具體涉及一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法。
【背景技術】
[0002]樹莓(blue raspberry)又稱木莓、覆盆子,是薔薇科懸鉤子屬植物,多年生小灌木類，屬漿果類果樹，約有450多種，主要分布在北半球的寒帶、溫帶，少數分布在熱帶、亞熱帶和南半球。目前，世界樹莓發展很快，主要有:俄羅斯、美國、智利、澳大利亞、波蘭、加拿大、英國等30多個國家。在國際市場上被譽為黃金水果「水果之王」。特別是美國紅樹莓，由於色美味香，口感獨特，且對多種現代病具有良好的預防和治療效果，歐美人稱其為「貴族水果」。我國栽培歷史較晚，近兩年市場上較為多見。其果實為聚合漿果柔嫩多汁、色澤宜人、風味獨特、營養豐富，屬於不飽和脂肪酸，可促進前列腺素分泌荷爾蒙。樹莓果經榨汁後可以製成果醬、果汁、果酒、果凍等，也可廣泛應用於醫療保健、化妝品等方面。樹莓栽培周期短、見效快、分枝多、產量高、生長快、受益長，經濟效益顯著。隨著我國果樹業的發展，樹莓將成為第三代無汙染的綠色保健型水果。紅樹莓常規的繁殖方法有分根法、分株法、扦插法和壓條法等。但上述繁殖方法繁殖速度慢，對母本材料要求高，用量大，還受到季節的限制，難以進行規模化、標準化生產和優良品種的大面積推廣。此外，目前運用組織培養方法繁殖生產種苗的方法成本較高、培養周期較長，在育苗過程中採取激素，對種苗的變異性和存活率。因此，需要尋找一種新的成本低、時間短、無激素培養、成活率高的無性繁殖方法來擴大美國紅樹莓繁殖量，進行美國紅樹莓苗木的產業化生產，以滿足市場需求。本發明採用獨特的培養配方，解決了目前美國紅樹莓苗無性繁殖存在的種苗攜帶病毒、品種退化、有效產量低等問題。本發明之方法高效、快速，周期短、繁殖率高、成本低廉，無需通過採集大量外植體來獲得無菌苗，且不採取激素混用而達到提高增殖率和減少變異的目的，省去了組培苗營養缽移栽的環節，提高移栽成活率，與傳統繁殖方式相比，產量提高約90 %，完全實現了美國紅樹莓優良品種種苗的規模化和標準化生產，對緩解美國紅樹莓的市場供需矛盾有積極意義。
【發明內容】
[0003]本發明解決的問題在於提供一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，本方法是一種周期短、繁殖率高、無激素培養、成本低廉的無病毒攜帶的育苗方法。
[0004]本發明是通過以下技術方案來實現:
[0005]快速繁殖美國紅樹莓的方法，包括以下步驟:
[0006]I)選取消毒滅菌處理後的美國紅樹莓的莖尖或帶芽莖段作為外植體:所截取的外植體為I?2cm莖尖或帶芽莖段；
[0007]2)將美國紅樹莓外植體放置於誘導培養基中直接誘導培養產生叢芽:將外植體轉接至叢生芽誘導及增殖培養基，15?20天繁殖出大量叢生芽；
[0008]3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖:將叢生芽轉接至生根壯苗培養基，約20天後，可獲得高7?9cm、根系發達、根莖粗壯的美國紅樹莓苗；
[0009]4)經生根培養後，直接放入育苗袋移植獲得美國紅樹莓種苗
[0010]所述步驟I)中消毒滅菌方法是在無菌超淨臺中，將經洗滌劑清洗過的I?2cm莖尖或帶芽莖段，依次在體積濃度為80%?90%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為1%的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2?3次。
[0011]所述步驟2)中叢生芽誘導劑增殖培養基的配置為MS固體培養基添加0.8?
1.0mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25?35g/Kg蔗糖和4?6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23?25°C，相對溼度75?90%，光照時間10?12小時/天，光照強度3000?5000Lx。
[0012]所述步驟3)中所述生根壯苗培養基為1/2MS固體培養基添加0.2?0.5mg/Kg乙酸、50?60g/Kg香蕉汁、165?200g/Kg番爺汁、8?12g/Kg活性炭、10?25g/Kg果糖和4?6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23?25°C，相對溼度75?90%，光照時間10?12小時/天，光照強度3000?5000Lx。
[0013]所述步驟4)中的生根苗移至室外散射光下鍛鍊6?10天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I?2分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土 = 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得紅樹莓種苗。
[0014]與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果:
[0015]本發明採用獨特的培養配方，解決了目前美國紅樹莓苗無性繁殖存在的種苗攜帶病毒、品種退化、有效產量低等問題。本發明之方法高效、快速，周期短、繁殖率高、成本低廉，無需通過採集大量外植體來獲得無菌苗，且不採取激素混用而達到提高增殖率和減少變異的目的，省去了組培苗營養缽移栽的環節，提高移栽成活率，與傳統繁殖方式相比，產量提高約90%，完全實現了美國紅樹莓優良品種種苗的規模化和標準化生產，對緩解美國紅樹莓的市場供需矛盾有積極意義。
【具體實施方式】
[0016]下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而不是限定。
[0017]實施例1
[0018]一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0019]I)將經洗滌劑清洗過的2cm莖尖，依次在體積濃度為80%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2次。
[0020]2)處理後的莖尖轉接至叢生芽誘導劑增殖培養基中培植:在MS固體培養基添加0.8mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25/Kg果糖和4g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23°C，相對溼度75%，光照時間10小時/天，光照強度3000LX。
[0021]3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖:將幼苗轉接至1/2MS固體培養基添加0.2mg/Kg乙酸、50/Kg香蕉汁、165/Kg番茄汁、8g/Kg活性炭、10/Kg果糖和4g/Kg瓊脂的生根壯苗培養基中培養，培養條件為:溫度23°C，相對溼度75%，光照時間10小時/天，光照強度3000LX，約30天後，可獲得高6cm、根系發達、根莖粗壯的美國紅樹莓苗。
[0022]4)生根苗移至室外散射光下鍛鍊6天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒2分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得美國紅樹莓種苗
[0023]實施例2
[0024]一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0025]I)將經洗滌劑清洗過的Icm帶芽莖段，依次在體積濃度為90%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2次。
[0026]2)處理後的莖尖轉接至叢生芽誘導劑增殖培養基中培植:在MS固體培養基添加
0.9mg/Kg6-苄氨基嘌呤、28/Kg果糖和5g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度25°C，相對溼度85%，光照時間11小時/天，光照強度4000LX。
[0027]3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖:將幼苗轉接至1/2MS固體培養基添加0.3mg/Kg乙酸、50/Kg香蕉汁、185/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、15/Kg蔗糖和5g/Kg瓊脂的生根壯苗培養基中培養，培養條件為:溫度25°C，相對溼度90%，光照時間11小時/天，光照強度4000LX，約30天後，可獲得高6cm、根系發達、根莖粗壯的美國紅樹莓苗。
[0028]4)生根苗移至室外散射光下鍛鍊8天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得紅樹莓種苗
[0029]實施例3
[0030]一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0031]I)將經洗滌劑清洗過的Icm帶芽莖段，依次在體積濃度為90%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2次。
[0032]2)處理後的莖尖轉接至叢生芽誘導劑增殖培養基中培植:在MS固體培養基添加Img/Kg6-苄氨基嘌呤、30/Kg果糖和6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23°C，相對溼度85 %，光照時間11小時/天，光照強度3000Lx。
[0033]3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖:將幼苗轉接至1/2MS固體培養基添加0.3mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、180/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、12/Kg果糖和4g/Kg瓊脂的生根壯苗培養基中培養，培養條件為:溫度23°C，相對溼度85%，光照時間12小時/天，光照強度3000LX，約30天後，可獲得高6cm、根系發達、根莖粗壯的美國紅樹莓苗。
[0034]4)生根苗移至室外散射光下鍛鍊6天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得紅樹莓種苗
[0035]實施例4
[0036]一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0037]I)將經洗滌劑清洗過的2cm帶芽莖段，依次在體積濃度為80%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2次。
[0038]2)處理後的莖尖轉接至叢生芽誘導劑增殖培養基中培植:在MS固體培養基添加
0.8mg/Kg6-苄氨基嘌呤、30/Kg果糖和6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23°C，相對溼度90%，光照時間12小時/天，光照強度5000Lx。
[0039]3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖:將幼苗轉接至1/2MS固體培養基添加0.2mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、200/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、15/Kg果糖和4g/Kg瓊脂的生根壯苗培養基中培養，培養條件為:溫度25°C，相對溼度90%，光照時間12小時/天，光照強度5000LX，約30天後，可獲得高8cm、根系發達、根莖粗壯的美國紅樹莓苗。
[0040]4)生根苗移至室外散射光下鍛鍊8天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得紅樹莓種苗。
[0041]實施例5
[0042]一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0043]I)將經洗滌劑清洗過的2cm莖尖，依次在體積濃度為90%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2次。
[0044]2)處理後的莖尖轉接至叢生芽誘導劑增殖培養基中培植:在MS固體培養基添加
0.8mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25/Kg果糖和6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度25°C，相對溼度75%，光照時間12小時/天，光照強度5000Lx。
[0045]3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖:將幼苗轉接至1/2MS固體培養基添加0.5mg/Kg乙酸、60/Kg香蕉汁、200/Kg番茄汁、8/Kg活性炭、10/Kg果糖和6g/Kg瓊脂的生根壯苗培養基中培養，培養條件為:溫度25°C，相對溼度85%，光照時間10小時/天，光照強度5000LX，約30天後，可獲得高8cm、根系發達、根莖粗壯的美國紅樹莓苗。
[0046]4)生根苗移至室外散射光下鍛鍊6天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土= 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得紅樹莓種苗。
【權利要求】
1.一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，其特徵在於，包括以下步驟: 1)選取消毒滅菌處理後的美國紅樹莓的莖尖或帶芽莖段作為外植體； 2)將美國紅樹莓外植體放置於誘導培養基中直接誘導培養產生叢芽； 3)切割叢生芽放置於生根壯苗培養基中使其大量繁殖。 4)經生根培養後，直接放入育苗袋移植獲得美國紅樹莓種苗。
2.根據權利要求1所述的一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，其特徵在於:所述步驟I)美國紅樹莓外植體進行消毒滅菌處理:在無菌超淨臺中，將經洗滌劑清洗過的I?2cm莖尖或帶芽莖段，依次在體積濃度為80%?90%的酒精中消毒處理30秒、在質量濃度為I %的聚維酮碘溶液中滅菌處理5分鐘、在體積濃度為1.5%的次氯酸鈉溶液中消毒處理10分鐘，之後用去離子水清洗2?3次。
3.根據權利要求1所述的一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，其特徵在於:所述步驟2)中所述叢生芽誘導劑培養基是MS固體培養基添加0.8?1.0mg/Kg6-苄氨基嘌呤、25?35g/Kg果糖和4?6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23?25°C，相對溼度75?90%，光照時間10?12小時/天，光照強度3000?5000Lx。
4.根據權利要求1所述的一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，其特徵在於:所述步驟3)中所述生根壯苗培養基的配置為:1/2MS固體培養基添加0.2?0.5mg/Kg乙酸、50?60g/Kg香蕉汁、165?200g/Kg番爺汁、8?12g/Kg活性炭、10?25g/Kg果糖和4?6g/Kg瓊脂；培養條件為:溫度23?25°C，相對溼度75?90%，光照時間10?12小時/天，光照強度3000?5000Lx。
5.根據權利要求1所述的一種美國紅樹莓苗的無激素培養及快速繁殖方法，其特徵在於:所述步驟4)中的生根苗移至室外散射光下鍛鍊6?10天後，取出生根苗，用清水將苗上培養基洗淨，放入質量濃度為I %的百菌清溶液中消毒I?2分鐘，移栽至裝有腐殖土:紅土 = 1:1，其中該混合基質中含有質量比為5%的珍珠巖，即得紅樹莓種苗。
【文檔編號】A01H4/00GK104170731SQ201410258289
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年6月11日 優先權日:2014年6月11日
【發明者】馬純 申請人:陝西恆富源林業有限公司