褐飛蝨Nlcdc2基因及其編碼產物與應用的製作方法

2023-09-21 09:27:10

褐飛蝨Nlcdc2基因及其編碼產物與應用的製作方法
【專利摘要】褐飛蝨Nlcdc2基因及其編碼產物與應用，屬於生物【技術領域】。本發明一方面公開了褐飛蝨Nlcdc2基因序列和褐飛蝨Nlcdc2基因的編碼蛋白胺基酸序列，另一方面公開了褐飛蝨Nlcdc2基因在控制褐飛蝨存活率和繁殖力中的應用。本發明主要針對與褐飛蝨生殖相關的細胞分裂周期基因Nlcdc2進行研究，探明了該基因在褐飛蝨生殖發育中的表達規律和相關功能，明確了其作為害蟲防治新靶標的潛力，為發展基於Nlcdc2的害蟲防治新策略奠定了基礎。
【專利說明】褐飛蝨基因及其編碼產物與應用

【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物【技術領域】，具體涉及褐飛蝨細胞分裂周期基因犯《/以及其編碼 產物與應用。

【背景技術】
[0002] 褐飛風(Ai7學arraia /嘆6?5· St&l)是一種繁殖力強且為害嚴重的水稻害蟲，主 要以刺吸韌皮部汁液和傳播水稻病毒的方式為害水稻植株。近年來，褐飛蝨頻頻爆發成災， 已發展成為亞洲稻區的重要害蟲。目前，褐飛蝨的防治主要依賴於噴施化學農藥和推廣水 稻抗性品種等措施。但實踐表明，褐飛蝨會對農藥產生很強的抗藥性，致使化學防治變得防 不勝防；與此類似，褐飛蝨在與水稻抗蟲品種相互作用的過程中，可以逐漸發展為能夠適應 水稻品種抗性的新種群，致使推廣的抗蟲品種逐漸喪失其原有的抗性。褐飛蝨防治工作因 缺乏理想的靶標信息而難以採取針對性的策略。


【發明內容】

[0003] 針對現有技術存在的問題，本發明的目的在於設計提供褐飛蝨犯《/以基因及其 編碼產物與應用的技術方案。
[0004] 所述的褐飛蝨基因，其特徵在於含有SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
[0005] 所述的褐飛蝨yV/cifcJ?基因的編碼蛋白，其特徵在於含有SEQ ID No. 2所示的氨基 酸序列。
[0006] 所述的褐飛蝨基因在控制褐飛蝨存活率中的應用。
[0007] 所述的褐飛風基因在控制褐飛風繁殖力中的應用。
[0008] 本發明主要針對與褐飛蝨生殖相關的細胞分裂周期基因進行研究，探明 了該基因在褐飛蝨生殖發育中的表達規律和相關功能，明確了其作為害蟲防治新靶標的潛 力，為發展基於的害蟲防治新策略奠定了基礎。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0009] 圖1為褐飛蝨RACE產物及核心序列的PCR擴增電泳圖； 圖1 中：M: DNA分子量標準 DL2000 marker;l: 3'RACE產物-250bp左右；2: 5'RACE 產物-750bp左右；3、4 :已知核心片段序列-500bp左右； 圖2為褐飛蝨全長cDNA序列及胺基酸序列分析圖； 圖3為褐飛蝨及其他昆蟲的CDK1的系統進化樹； 圖4為褐飛風和的擴增標準曲線； 圖5為褐飛蝨#^^和，的熔解曲線； 圖6為褐飛蝨不同發育時期Nlcdc2的表達量變化圖； 圖6中：Nl: 1齡若蟲；N2: 2齡若蟲；N3: 3齡若蟲；N4: 4齡若蟲；N5: 5齡若蟲；F1: 羽化第1 d;F3:羽化第3d; F5:羽化第5 d;F7:羽化第7 d; 圖7為dsRNA幹擾片段電泳圖； 圖 7 中：M: DNA 分子量標準 DL2000 marker;l:合成的 dsNlcdc2 (500 bp) 2:合 成的 dsGFP (350 bp); 圖8為yV/cifcJ?幹擾後存活率的變化圖； 圖9為褐飛蝨取食dsRNA後#人^^表達量變化圖； 圖9中：1:詞餵後1 d ;2:詞餵後2 d ; 4:詞餵後4 d ;6:詞餵後6 d ;圖中數值 為平均值土標準誤（N=3, n=10) 表示統計分析表明飼餵dsGFP與飼餵dsNlcdc2 0. 1 存在顯著差異（T檢驗，P〈0. 05) ; 表示統計分析表明飼餵dsGFP與飼餵dsNlcdc2 0. 5存在極顯著差異（T檢驗，P〈0.01); 圖10為幹擾後褐飛風卵巢發育圖； 圖10中：A圖為對照組(餵食dsGFP)褐飛蝨解剖後卵巢；B圖為實驗組(餵食dsNlcdc2) 褐飛蝨解剖後卵巢； 圖11為褐飛風RNAi後代個體數量圖。

【具體實施方式】
[0010] 以下結合實施例來進一步說明本發明。
[0011] 實施例1 :褐飛風基因的克隆與序列分析 RACE PCR及核心片斷的PCR擴增 以褐飛蝨cDNA為模板，以引物Nlcdc2-Fl和Nlcdc2-Rl(表1)進行核心序列PCR擴增， 獲得預期大小的目標片段，測序結果表明該片段大小為500 bp左右，經比對與轉錄組提供 序列一致（圖1)。經NCBI Blastp分析發現，該基因推導的胺基酸序列與黑脈金斑蝶 (EHJ71170)同源基因編碼的胺基酸序列同源性達71%，如表2所示。根據核心 序列測序結果設計RACE引物(表1)進行全長cDNA的克隆，5' RACE獲得750 bp左右的特異 性序列，3' RACE獲得250 bp左右的特異性序列（圖1)。這3段序列經過DNAMAN拼接得到 的細胞分裂周期基因cDNA序列的全長為1215 bp，該基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所 /_J、1 ο
[0012] 表I克隆、螢光定量PCR及合成dsRNA所涉及到的引物

【權利要求】
1. 褐飛蝨基因，其特徵在於含有SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。
2. 如權利要求1所述的褐飛蝨基因的編碼蛋白，其特徵在於含有SEQ ID No. 2 所示的胺基酸序列。
3. 如權利要求1所述的褐飛蝨#人^^基因在控制褐飛蝨存活率中的應用。
4. 如權利要求1所述的褐飛風基因在控制褐飛風繁殖力中的應用。
【文檔編號】C12N15/12GK104232651SQ201410342832
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年7月18日 優先權日:2014年7月18日
【發明者】俞曉平, 郝培應, 馬豔, 申屠旭萍, 陸潮峰 申請人:中國計量學院