高穩定性化學發光底物及檢測方法
2023-09-21 00:18:20 1
專利名稱：高穩定性化學發光底物及檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種超微量分析方法。特別是涉及化學發光分析技術。
化學發光分析技術是現代微量分析方法之一，由於其靈敏度高(可達10-18mol)、簡便快速(計數1秒/管)、線性好(可兩點校準標準曲線)、有效期長(可達1年)、安全無害(無放射性和致畸物汙染)等優點而成為取代放免和酶聯的重要技術。以辣根過氧化物酶(HRP)標記的化學分析法是在免疫反應完成後，加入HRP的底物H2O2，在鹼性條件下，HRP催化H2O2，使發光底物魯咪諾發生化學反應而發光，用光信號測量儀記錄這種光信號(一般測1秒，單位為CPS)。這種底物的一個配方是H2O2(7.3mM)、對碘苯酚(0.37mM)、魯咪諾(3.1mM)。由於該配方使用中是直接加入H2O2，所以存在著兩個突出的缺點一是H2O2本身不穩定，隨放置時間的延長而逐步被破壞；二是產生的光信號不穩定，達到高峰以後，隨時間而很快衰減，從加樣到檢測光信號的時間，對每個樣品必須嚴格控制，否則會對檢測結果造成或大(競爭法)或小(夾心法)的偏差而導致誤檢。
本發明的目的是提供一種既適用於自動化分析，也適用於手工分析，成本低和光信號穩定性好的高穩定性化學發光底物及檢測方法。
本發明所述的高穩定性化學發光底物，該化學發光底物由A、B兩種液體組成，並且在HRP標記的免疫反應後被加入混勻，其中A液為氧化酶類，B液為氧化酶的相應底物。
本發明所述的高穩定性化學發光底物檢測方法，以辣根過氧化物酶HRP標記的化學發光免疫反應完成後，加入HRP的底物，採用內源H2O2的方式，將可產生H2O2的A、B兩種反應液混勻，利用在一定時間範圍內，所述兩種反應液產生H2O2速率是基本不變的原理，使化學發光反應保持穩定。
本發明與傳統的技術相比較具有如下優點1、光信號的穩定性好，可以適應自動和手動分析。
2、檢測結果準確，成本低。
本發明關鍵解決了H2O2的穩定性的控制問題。傳統的方式由於只能一次性加入H2O2，不可能邊反應邊測量邊添加H2O2，我們稱之為「外源」H2O2的方式。本發明將H2O2改為「內源」式，即控制H2O2的反應量，使其達到恆速、均勻地供應的目的。方法之一是以葡萄糖氧化酶作用於葡萄糖而產生H2O2，在一定的時間範圍內H2O2的產生速率是基本不變的，這就使化學發光化學發光反應也保持穩定，因此，出現光信號「平臺」。這就從理論和實踐上，解決了傳統方法由於光信號隨時間很快衰減而使檢測結果不可靠的問題。所述化學發光底物由A液和B液組成；B液為含有葡萄糖、魯咪諾、對碘苯酚等，A液含葡萄糖氧化酶及其穩定劑等。在HRP標記的免疫反應後加入A液和B液，混勻幾分鐘後，即可測到穩定信號。
本發明所述化學發光底物中產生H2O2的系統還可以由下列成份組成(1)A液含有黃嘌呤氧化物、B液含有水楊醛；(2)A液含有半乳糖氧化酶、B液含有乳糖；(3)A液含有葡萄糖氧化酶、B液含有葡萄糖。
權利要求
1.一種高穩定性化學發光底物，其特徵在於該化學發光底物由A、B兩種液體組成，並且在HRP標記的免疫反應後被加入混勻，其中A液為氧化酶類，B液為氧化酶的相應底物。
2.一種高穩定性化學發光底物檢測方法，以辣根過氧化物酶HRP標記的化學發光免疫反應完成後，加入HRP的底物，其特徵在於採用內源H2O2的方式，將可產生H2O2的A、B兩種反應液混勻，利用在一定時間範圍內，所述兩種反應液產生H2O2速率是基本不變的原理，使化學發光反應保持穩定。
全文摘要
一種高穩定性化學發光底物及檢測方法,其特徵在於:該化學發光底物由A、B兩種液體組成,並且在HRP標記的免疫反應後被加入混勻,其中A液中含有葡萄糖,B液中含有葡萄糖氧化酶。本發明的優點是光信號的穩定性好,可以適用於自動或手工分析,檢測結果準確和成本低。
文檔編號G01N33/535GK1333464SQ01118410
公開日2002年1月30日 申請日期2001年5月30日 優先權日2001年5月30日
發明者王京 申請人:王京