紅背葉根在製備治療慢性肝炎藥物中的應用的製作方法
2023-08-13 12:06:16 1
專利名稱：紅背葉根在製備治療慢性肝炎藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥單方紅背葉根的用途，尤其涉及紅背葉根在製藥中的用途。
背景技術：
紅背葉根為雙子葉植物藥大戟科植物紅背山麻杆Alchomea trewioides(Benth.)Muell.-Arg.的根。紅背葉別名紅背娘、紅帽頂(《廣西中草藥》)，紅羅裙(廣州空軍《常用中草藥手冊》)。紅背葉的形態特徵為灌木或小喬本，嫩枝有毛。單葉互生，闊心形或卵圓形，長6～15釐米，寬4～10匣米，先端長漸尖。基部淺心形或近截平，基出脈3條，基部有紅色腺體和2條線狀附屬體，上面綠色，近無毛，下面淺綠而帶紅色。被柔毛，嫩葉紫紅色，邊緣有不規則的小鋸齒；葉柄長達7釐米，越至上部越短，老時變為紅紫色。雄花序腋生，總狀，長7～10釐米，苞片披針形，腋內有花4～8朵聚生，萼片2～3，雄蕊8；雌花序較短，頂生，花密集，萼片6～8，披針形，子房卵形，花柱3。蒴果球形，被灰白色毛，徑8～10毫米。花期3～6月，果期5-8月。
紅背葉生山坡、荒地的灌叢中。分布我國中部和東南、華南，通常以根、葉入藥。其味甘，性平。清熱解毒，祛風除溼，散瘀止血，平喘，殺蟲止癢。傳統應用於治腸炎腹瀉，痢疾，黃疸型肝炎，尿路感染和結石，腎炎，小便不利，血尿，血崩，白帶，溼疹，蕁麻疹，癰瘡腫毒，瘡瘍久不收口等症。近代醫學研究表明，紅背葉根中含大量生物鹼和酚性物質，具有止咳、祛痰作用，抗乙醯膽鹼作用和輕度抑制金黃色與白色葡萄球菌作用。
有報導的方例為黃疸型肝炎，該方例以紅背山麻杆鮮全株500克，水煎洗身；另用木各虎咪(一點紅)、山螺螄殼各15克，水煎服。但是，目前尚無用紅背葉根製備治療慢性肝炎藥物的報導。
發明內容
本發明的目的是提供紅背葉根的新用途，即在製藥中的應用。
具體是，本發明提供紅背葉根在製備治療慢性肝炎的藥物中的應用。
本發明所述藥物是以紅背葉根為原料的水提取物與常規用量的醫學上可接受的輔料混合製成的臨床上可接受的固體口服製劑。
本發明所述的固體口服製劑具體是臨床上可接受的顆粒劑、膠囊劑或片劑，優選顆粒劑。
本發明所述水提物可採用常規的水提方法或水提再進一步醇沉除雜得到，其製備方法的具體步驟如下所述紅背葉根加8～12倍水，煎煮1.5～2小時，殘渣再加5～8倍量水煎煮1～1.5小時，合併提取液後過濾，濃縮，濃縮液的體積與原藥材質量比為1ml∶1g，加入乙醇至醇的體積含量為60-90％，靜置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮，乾燥至粉末狀即可，浸膏得率為6～12％。
上述方法得到的本發明紅背葉根的水提取物為棕褐色粉末。
本發明所述的固體口服製劑的製備方法即為藥典上所規定常規製備方法，即將紅背葉根的水提取物與固體口服製劑常用的輔料按臨床上可接受配比混合製得。
本發明所述的固體口服製劑具有抗肝炎病毒和阻止肝纖維化的作用，可在臨床上用以治療慢性肝炎和肝硬化，服用方法為口服，每日劑量的有效量相當於原材料30～50克紅背葉根，每日服用2-3次。
以下通過實驗來進一步說明本發明的藥物作用原理和有益效果1.抗肝纖維化作用1.1動物模型的製備、分組及藥物處理 普通級SD大鼠46隻，雌雄各半，體重約230±17g，南方醫科大學實驗動物中心提供。從造模即日起隨機均分為5組正常對照組、CCL4模型組、本發明藥物的中劑量組(灌胃給藥，0.36g/kg)和低劑量組(灌胃給藥，0.18g/kg)、秋水仙鹼組(灌胃給藥，0.9×10-5g/kg)。模型組及給藥組上午皮下注射40％四氯化碳花生油(頭次0.5ml/100g，後每隔三日皮下注射量為0.3ml/100g)，下午給藥組予相應藥物水溶液或煎劑，模型組予生理鹽水灌胃(每日一次，每次1ml/100g)；正常組予等量的生理鹽水做對照。模型及給藥組予高脂飲食(79.5％玉米粉+20％豬油+0.5％膽固醇)，正常組予正常飲食，約六周。造模結束後處理，動物禁食不禁水約12小時後，10％水合氯醛腹腔麻醉，腹主動脈採血，真空負壓採血管收集，取肝、脾稱重，肝左葉標本常規固定包埋切片HE及Mallory三色染色，光鏡下觀察肝組織細胞的病理改變及肝臟纖維的增設程度。
指標測定 (1)光鏡標本石蠟包埋，常規切片，HE和Mallory三色染色，TGFβ1的免疫組化；(2)血清ALT、AST、ALB、GLB的檢測由南方醫科大學生化室用AU5400全自動生化分析儀測定；(3)血清HA、LN、III前膠原、IV型膠原的檢測由南方醫科大學核醫學科用放免法測定；(4)TGFβ1和TIMP-1的檢測採用ELISA法，按試劑說明書操作測定。
統計方法 上述各項指標均計算均數(x)與標準差(SD)，用統計軟體SPSS 11.5進行方差分析。
實驗結果1.2動物觀察 (1)脫毛現象約造模三周左右，模型及藥物組大鼠出現不同程度的脫毛現象(從頭頸部兩側開始，遍及全身)，程度以模型組最明顯，次之秋水仙鹼組、本發明藥物組。(2)形態及皮毛狀況模型組大鼠皮毛枯槁、乾澀，喜靜少動，動作遲緩；正常組大鼠皮毛濃密、光潔，體態自如；藥物組老鼠介於兩者之間。(3)體重及存活狀況造模結束後，模型組及藥物組大鼠體重均有不同程度的下降，以模型組最明顯，而正常組大鼠體重程增長趨勢；模型組大鼠有2隻死亡，餘組存活情況良好。
1.2.1肝功 (血清中ALB、GLB、ALT、AST)的變化及比較 本發明藥物組可降低血清中的ALT和AST，而秋水仙鹼對血清中的ALT和AST也呈一定程度的降低趨勢。各藥物組對血清中的白蛋白較模型組有增加趨勢，但對血清中球蛋白的影響不明顯(見表1)。
1.2.2肝纖維化指標(血清中HA、LN、III前膠原、IV型膠原)的變化及比較 本發明藥物組可降低血清中的HA，而秋水仙鹼對血清中的HA的降低趨勢不明顯。各藥物組對血清中III前膠原有抑制作用，但對血清中的LN、IV型膠原影響不明顯(見表1)。
1.2.3血清中TGFβ1和TIMP-1的變化及比較 本發明藥物組可明顯降低血清中的TGFβ1和TIMP-1，以中劑量組最為明顯(與正常對照組比較無明顯統計學意義差異)，秋水仙鹼對血清中的TGFβ1和TIMP-1也呈一定程度的降低趨勢(見表1)。
1.2.4肝組織病理變化 光鏡下形態學變化HE染色標本觀察，正常組沒有肝細胞變性、壞死；模型組見肝小葉內有較廣泛的肝細胞點狀壞死，伴明顯的淋巴細胞浸潤，肝細胞再生明顯，有嚴重的脂質空泡存在，部分肝小葉內可見到橋接樣壞死，肝小葉破壞；藥物組肝小葉中有較少的點狀壞死和淋巴細胞浸潤。Mallory三色染色標本觀察，正常組肝小葉間無纖維間隔；模型組肝小葉結構被嚴重破壞，匯管區可見大量纖維組織增生，界板破壞較嚴重，分割包繞肝小葉，並伴有部分假小葉形成；藥物組內纖維組織增生則不明顯，界板破壞少。
表1本發明藥物製劑對肝纖維化大鼠肝功、肝纖維化指標、轉化生長因子及金屬蛋白酶組織抑制因子的影響(x±sd)
注*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001結果表明，對ccl4複合因素所致的肝纖維化模型中，對大鼠血清中的致肝纖維化的兩大重要因子(TGF-β1、TIMP-1)，肝纖維指標(HA、III型前膠原)，肝功指標(ALT、AST)都有顯著降低，有著保肝、降酶、抗肝纖維化的作用。
2.抗B型肝炎病毒作用2.1體外試驗將中藥紅背葉根提取物用全培液分別稀釋成1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.25mg/ml、15.63mg/ml、7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml)等20個實驗濃度，加於96孔細胞板，用MTT法測定細胞毒性。根據細胞毒性實驗結果，將穩定表達HBV-DNA及HBeAg、HBsAg的2.2.15細胞接種入24孔板，24小時細胞貼壁後，棄去上清液，分別加入含有六種不同濃度中藥紅背葉根(7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml、0.25mg/ml)的細胞全培養液，陽性對照藥物為幹擾素(賽若金1001U、2001U、4001U)，於第4、8天留取培養液作為檢測標本，同批次試劑同一時間定量檢測HBeAg(美國雅培試劑)、HBsAg(美國雅培試劑)。
第4天標本檢測結果表明5種不同濃度(7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml)中藥紅背葉根與空白對照組、陽性對照組相比，培養液中HBeAg含量有顯著性差異(P＝0.000)；第8天標本檢測結果表明6種不同濃度(7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml、0.25mg/ml)中藥紅背葉根與空白對照組、陽性對照組相比，培養液中HBeAg、HBsAg含量有顯著性差異(P＝0.000)。結果說明中藥紅背葉根可抑制HBV蛋白中HBeAg、HBsAg的表達，有一定的抗B肝病毒作用。
2.2體內試驗發明者觀察了紅背葉根抗鴨B肝病毒的療效，採用經PCR篩選D-HBV陽性三日齡廣州麻鴨40隻隨機分為空白對照(生理鹽水)、紅背葉根高(灌胃給藥，0.72g/kg)、中(灌胃給藥，0.36g/kg)、低劑量組(灌胃給藥，0.18g/kg)和拉米夫定組(灌胃給藥，0.3×10-5g/kg)，分別給予不同劑量紅背葉根和拉米夫定幹預。在用藥前、用藥第7、14、21和停藥第7天取血實時螢光PCR檢測DHBV-DNA含量；治療前後取肝臟組織觀察病理改變情況。
結果見表2，拉米夫定組用藥後迅速降低血清病毒水平，但停藥後反跳。紅背葉根高、中劑量組血清病毒含量下降分別在第14、21天開始顯效(組內p＜0.05，組間p＜0.01)，低劑量組治療期間未見抑制病毒的作用。停藥後紅背葉根高、中劑量組與空白對照組比較仍表現一定的病毒抑制作用(p＜0.05)。此外，紅背葉根高劑量組對肝臟炎症改善較拉米夫定明顯。說明紅背葉根有抑制體內D-HBV複製的作用，作用與劑量和用藥時間相關。其作用較拉米夫定弱，但維持時間長，服藥安全。
表2各組對DHBV-DNA的抑制作用(x±sd)
注與同組給藥前比較用配對t檢驗，*p＜0.05，**p＜0.01；各時間段各組與空白對照組比較▲p＜0.05，▲▲p＜0.01。
3.臨床藥用效果慢性B型肝炎病人48例，均符合2000年西安「全國傳染病寄生蟲病學術會議修訂的病毒性肝炎的診斷標準」。其中男28例，女20例；年齡(43.3±19.3)歲；輕度慢性肝炎28例，中度肝炎20例。患者給藥每日紅背葉根20克，水煎服。12周為1個療程，服1～2療程。
治療過程中觀察下列指標①一般情況包括乏力、胃納、腹脹、肝脾腫大等。②治療前及後4、12、24周分別抽取靜脈血檢測生化指標，包括穀草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、穀氨醯基轉肽酶(GGT)、鹼性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、血清白蛋白(A)、血清球蛋白(G)、總膽紅素(TBILI)、透明質酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、人III型前膠原(PIIIP)、IV型膠原(PIVP)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TRIG)。③治療前後B超。
治療4周後，所有患者症狀均有一定的改善，乏力、納差、腹脹、肝區不適緩解率分別為84.8％(28/33)、82.4％(28/34)、88.0％(22/25)、79.7％(19/24)，尤其是緩解肝區不適較明顯，有肝、脾腫大的患者，經治療24周後，治療組分別為25.0％(5/20)、26.3％(5/19)。
經紅背葉根治療治療4周後，患者肝功能均有不同程度改善；治療12周後，治療組與對照組比較，AST和改善蛋白代謝方面較為明顯(P＜0.05)。48例患者經治療24周後，肝纖維化有不同程度改善，其中LN、PIIIP下降幅度較大(P＜0.05～0.01)。
具體實施例方式
以下是本發明的一些具體實施例，用於進一步說明本發明，但本發明並不僅限於這些實施例。
一、水提物的製備例例1紅背葉根加8倍水提取，第1次提取2小時，第二次加8倍量水提取1.5小時，提取液合併後過濾，濃縮，乾燥即得。
例2紅背葉根加10倍水提取，第1次提取1.5小時，第二次加6倍量水提取1.2小時，提取液合併後過濾，濃縮，乾燥即得。
例3紅背葉根加12倍水提取，第1次提取1.5小時，第二次加5倍量水提取1小時，提取液合併後過濾，濃縮，乾燥即得。
例4紅背葉根水提醇沉提取物的製備方法紅背葉根加8倍水提取，第1次提取2小時，第二次加8倍量水提取1.5小時，提取液合併後過濾，濃縮至1∶1，加入適量乙醇，使醇含量的範圍為60％，靜置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮，乾燥即得。
例5紅背葉根水提醇沉提取物的製備方法紅背葉根加10倍水提取，第1次提取1.5小時，第二次加6倍量水提取1.2小時，提取液合併後過濾，濃縮至1∶1，加入適量乙醇，使醇含量的範圍為75％，靜置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮，乾燥即得。
例6紅背葉根水提醇沉提取物的製備方法紅背葉根加12倍水提取，第1次提取1.5小時，第二次加5倍量水提取1小時，提取液合併後過濾，濃縮至1∶1，加入適量乙醇，使醇含量的範圍為90％，靜置24小時，過濾，濾液回收乙醇，濃縮，乾燥即得。
二、藥物劑型製備例(所述的份均為重量份)例1(顆粒劑)顆粒劑1處方水提取物製備例2所得水提取物1份、蔗糖2.5份、糊精1.5份。
製法將提取物粉加入蔗糖與糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，分裝，即得。
性狀本品為黃褐色的顆粒；味微甜、苦。
用法與用量開水衝服，一次7.5g，一日2～3次。
顆粒劑2處方水提取物製備例5所得水提取物1份、蔗糖2.5份、糊精1.5份。
製法將提取物粉加入蔗糖與糊精，混勻，製成顆粒，乾燥，分裝，即得。
性狀本品為黃褐色的顆粒；味微甜、苦。
用法與用量開水衝服，一次2.5g，一日2～3次。
例2(膠囊劑)處方水提取物製備例4所得水提取物1份、澱粉2份。
製法將提取物粉末加入澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，裝入膠囊即得。
性狀本品為膠囊劑，內容物為深棕色的顆粒或粉末；味微苦。
用法與用量口服，一次3粒，一日2～3次。
例3(片劑)處方水提取物製備例6所得水提取物1份、澱粉2份、硬脂酸鎂適量。
製法將提取物粉末加入澱粉，混勻，製成顆粒，乾燥，加入硬脂酸鎂，壓片即得。
性狀本品為深棕色片劑，味微苦。
用法與用量口服，一次3粒，一日2～3次。
權利要求
1.紅背葉根在製備治療慢性肝炎藥物中的應用。
2.權利要求1所述的治療慢性肝炎的藥物，其特徵是紅背葉根的水提取物與常規用量的醫學上可接受的輔料混合製成的臨床上可接受的固體口服製劑。
3.依據權利要求2所述的治療慢性肝炎的藥物，其特徵是臨床上可接受的顆粒劑、膠囊劑或片劑。
4.依據權利要求2所述的治療慢性肝炎的藥物，其特徵是臨床上可接受的顆粒劑。
全文摘要
本發明提供紅背葉根在製藥中的新用途，具體是提供紅背葉根在製備治療慢性肝炎的藥物中的應用。本發明所述的治療慢性肝炎的藥物，是紅背葉根的水提取物與常規用量的醫學上可接受的輔料混合製成的臨床上可接受的固體口服製劑。該固體口服製劑具有抗肝炎病毒和阻止肝纖維化的作用，可在臨床上用以治療慢性肝炎和肝硬化。
文檔編號A61K9/16GK1939383SQ20061012230
公開日2007年4月4日 申請日期2006年9月25日 優先權日2006年9月25日
發明者呂志平 申請人:南方醫科大學