一種用作結合對的特異性結合反應培養基的水溶液的製作方法

2023-08-13 21:28:56 5

專利名稱：一種用作結合對的特異性結合反應培養基的水溶液的製作方法
專利說明一種用作結合對的特異性結合反應培養基的水溶液 本發明涉及用作結合對的特異性結合反應培養基的水溶液。
背景技術：
公知使用一種或多種抗體在一種試樣中檢測試驗物質(分析物)的免疫測定技術。免疫測定技術方法的發展增強了該試驗的敏感性。儘管在近些年來有所發展，但仍然希望消除非特異性的結合反應、交叉反應以及基質之中存在的化合物的影響。免疫測定法取決於結合成員對的第一結合成員(如一種抗原或配體)與結合成員對的第二結合成員(如一種抗體或受體)特異性結合的能力。為了測定這種結合的延續，用可檢測部分標記含有這種結合成員的一方的共軛物。這種結合成員對可以是一種抗原和針對該抗原的抗體。免疫測定法可以以競爭性的免疫測定法形式或以夾心免疫測定法形式進行。在競爭性的免疫測定法形式中抗原可以被固定到固相材料上，而結合到固相材料上的可檢測部分的數量能夠被檢出、計量並將其與試樣中存在的抗體的數量相關聯。固相材料的實例包括珠子、顆粒、微粒等等。在夾心免疫測定法形式中，將含有例如一種抗體的試樣與一種蛋白質例如抗原相接觸。所述抗原被固定在固相材料上。固相材料的實例包括珠子、顆粒、微粒等等。所述固相材料通常用一種已被可檢測部分標記的第二抗原或抗體生成。然後分別在所述固相材料上第二抗原或抗體分別與相應抗體或抗原結合，在一個或多個洗滌步驟以去掉未結合的物質之後，加入一種指示劑物質例如顯色物質，使其與可檢測部分反應，產生可檢測信號，如顏色變化。然後檢出該顏色變化，計量並將其與試樣之中存在的抗體數量相關聯。此外應注意還需要各種稀釋劑和緩衝液用於優化處理微粒、抗原、共軛物及參與化學反應的其他試驗組分。為了在免疫測定法中獲得最佳結果，用於結合夥伴之間結合反應(例如抗體和抗原反應或配體和受體生成複合體)的溶液必須提供一種培養基以優化抗體結合抗原的能力，或必須提供一種培養基以優化配體結合受體的能力，同時強有力的降低甚至防止非特異性相互作用、低親合性結合和基質效應，以免生成錯誤信號。為了消除非特異性相互作用和交叉反應，有人在結合反應之後將洗滌劑加入洗滌步驟所用的緩衝液中以去除非特異性結合。對於免疫測定法，像western印記分析、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等，使用含有補充有牛血清白蛋白和0.01到0.05(v/v)Tween20的磷酸鹽緩衝鹽水的溶液作為培養基，用於結合夥伴(例如抗體和抗原)之間的結合反應。但是常常發現用現有技術的這種緩衝液不能避免非特異性或低親合性結合、交叉反應和基質效應。例如，當研究一種涉及多元分析物檢測的CRP試驗時，由於應用多元抗體而帶來的交叉反應和基質效應看來已成為一個問題，其不能通過利用常規的免疫測定緩衝液解決。因此本發明的目的是提供一種溶液，作為用於結合成員對的特異性結合反應的培養基使用，其中強有力的降低或甚至防止非特異性結合、低親合性結合、交叉反應和基質效應。此外，本發明的目的是提供一種免疫測定方法，其中非特異性和低親合性結合、交叉反應和基質效應被降低或防止。發明概述本發明的目的是通過使用一種水溶液作為用於結合成員對的特異性結合反應的培養基而實現的，其中第一結合成員識別其互補的第二結合成員，該溶液含有a)控制pH的一種緩衝液；b)選自下組的化合物A-由通式I R1-[[CR2R3]p-O]q-R4定義的化合物，其中R1是氫或羥基，各單元中R2獨立地是氫或羥基，R3是氫、甲基、乙基，R4是氫或烷基，p是2到10的一個整數，q是1到100的一個整數，附帶條件是該化合物至少攜帶兩個羥基；-多元醇；-糖類；c)非離子洗滌劑。在化合物A的通式I中，如果R4是氫，相鄰的殘基R2也是氫。如果R1是羥基，相鄰的殘基R2是氫。在一個優選具體實施方式
中，化合物A的分子式中的q是從1到50的一個整數，更優選從1到30。本發明的發明人意外地發現本發明的水溶液可以降低免疫測定中的交叉反應、基質效應、非特異性結合和低親合性結合。此外，還發現使用本發明水溶液時可以防止嗜異性的抗體(人抗小鼠抗體)帶來的影響。另外，即使在應用於血漿的情況下，用該緩衝液能夠避免風溼(rheuma)因子、血紅蛋白、膽紅素和甘油三脂帶來的負效果。在這裡「結合成員對」包括一個「第一結合成員」和一個「第二結合成員」。兩種結合成員會彼此特異性結合。結合成員對的第一結合成員可以分別是抗原或配體。第二結合成員(如分別為抗體或受體)特異性地識別並結合第一結合成員(如分別為抗原或配體)。第二結合成員是相應的結合成員，因此也稱為「相應結合成員」。技術人員會理解術語「第一」結合成員和「第二」結合成員分別可以是例如抗原和相應抗體，或反之亦然。本發明的水溶液代表一種通用緩衝液，其在各種基質(例如血漿，血清等)中進行的免疫測定和結合反應中作為培養基。在應用多分析物的情況下，例如如果使用蛋白質晶片，需要同步孵育幾個(或多個)分析物和幾個抗體，經常發生非特異性結合和交叉反應。在很多情況下觀察到這種不希望得到的結合反應。利用現有技術公知的標準ELISA緩衝液不能防止這種交叉反應影響。另外在現有技術中，與其它參照的方法相比，所採用的天然樣品可導致基質效應，這會引起錯誤的測量值。在此術語「基質」指天然樣品(例如血清)之中存在的所有化合物；術語「基質」特別是指有機的、尤其是生物化合物，例如蛋白質。本發明的水溶液分別可以用作結合對的結合反應的培養基，作為用於免疫測定和結合反應的樣品稀釋緩衝液以及抗體和抗原的稀釋緩衝液。進一步可應用於多分析物免疫測定和蛋白質分析(proteomics)，其中能夠防止不希望得到的螢光體標記抗體的交叉反應。螢光體標記抗體往往會以非特異性方式結合其它蛋白質。使用本發明的水溶液能夠避免這種影響。在免疫測定如ELISA和蛋白質晶片中，使用本發明的緩衝液可以展示出進一步的積極效果。當用本發明緩衝液孵育帶有固定抗體的表面時，該固定化抗體的活性有所增強。這使得分析物與固定化抗體的結合增強。總之，本發明緩衝液除降低非特異性信號和非特異性影響之外，還會增強分析物和抗體之間特異性結合反應陽性作用帶來的特異性信號。這種固定化抗體活性的所致增強提供更高的相應試驗的敏感性。本發明的緩衝液可以用於免疫測定ELISA、EIA、FIA、側向流式試驗(lateral-flow-test)、蛋白質晶片、多分析物試驗、western印記、點印記、免疫組織化學、受體配體試驗和免疫PCR。
發明詳述在本發明一優選具體實施方式
中，該水溶液進一步包括與免疫阻斷非特異抗體結合有效量的蛋白質。此蛋白質優選選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、酪蛋白、胎牛血清。進一步優選該蛋白質以0.1到2％(w/v)的濃度存在於水溶液中，更優選0.5到1.5％(w/v)範圍。這些蛋白質不能被免疫測定所用的任何抗體識別。這種未被識別的蛋白質可以免疫阻斷由樣品之中可能存在的分子或化合物帶來的非特異性抗體結合。在另一具體實施方式
中，該水溶液含有選自下列的鹽NaCl、KCl、NH4Cl。進一步優選該水溶液具有100mM到1.5mM的離子強度，更優選200mM到1M，甚至更優選200mM到800mM，特別更優選200mM到600mM，最優選250mM到500mM。本發明人意外地發現用作用於結合反應的培養基的該緩衝液在200mM到600mM範圍內的高離子強度會進一步降低非特異性結合和交叉反應，同時沒有負面影響特異性結合反應。在特定優選具體實施方式
中，該水溶液緩衝液選自Tris(三(羥甲基)-氨基甲烷)、Pipes(哌嗪-1，4-雙-2-乙烷磺酸)、Mes(4-嗎啉代乙烷磺酸)、Hepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪-乙烷磺酸)、磷酸鹽緩衝液。在另一優選具體實施方式
中，化合物A選自下組聚亞烷基二醇，聚丙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙二醇，單糖，雙糖，三糖，蔗糖，甘露糖，海藻糖，多元醇，甘油和其混合物。在一優選具體實施方式
中化合物A的濃度在0.5到25％(v/v)範圍之內，優選2.0到20％(v/v)，更優選2.0到15％(v/v)，進而更優選2.0到10％(v/v)，甚至更優選2.0到7％(v/v)，最優選約5％(v/v)。如果化合物A是液相，該濃度則為％(v/v)。如果該化合物A是固體(例如糖類)，該濃度應被理解為％(w/v)。在另一優選具體實施方式
中，該水溶液含有選自下述的通式化合物作為非離子洗滌劑a)具有取代基R1和R2(R1-Ph-R2)的取代的苯基，其中R1是C1-C9烷基，R2是-O-[CH2-CH2-O]a-H基團，其中「a」是5到40的一個整數，其中R2相對於R1在對位、間位或鄰位； ，其中n、x、y和z都是5到40的一個整數，R是脂肪酸殘基。進一步優選該非離子型洗滌劑選自十二烷基聚(乙二醇醚)m，其中m是5到40的整數；1-O-n-辛基-β-D-吡喃葡糖苷(n-辛葡糖苷)(n-Octylglucoside)；烷基酚聚(乙二醇-醚)m，其中m是5到40的整數，優選m＝11(Nonidet P40)；1-O-n-十二基-β-D-吡喃葡糖基(1-4)α-D-吡喃葡糖苷；十二烷基聚-(乙二醇醚)m，其中m是5到40的整數，優選m＝23(Brij35；)；聚(氧乙烯)(20)-脫水山梨醇單脂肪酸酯，優選選自聚(氧乙烯)(20)-脫水山梨醇一油酸酯(Tween80)，聚(氧乙烯)(20)-脫水山梨醇單月桂酸酯(Tween20)，聚(氧乙烯)(20)-脫水山梨醇單棕櫚酸酯(Tween40)，聚(氧乙烯)(20)-脫水山梨醇一硬脂酸酯)；辛基酚聚(乙二醇醚)m，其中m是5到40的整數，優選m＝10(TritonX-100)。在優選具體實施方式
中，非離子型洗滌劑的濃度在0.1到1.0％(v/v)範圍之內。優選非離子型洗滌劑的濃度在0.15到1.0％(v/v)，更優選在0.2到1.0％(v/v)範圍內，進而更優選在0.2和0.8％(v/v)範圍內，甚至更優選0.25％到0.6％(v/v)範圍內，最優選約0.25％(v/v)。本發明的一個重要特點是存在如權利要求1所述的化合物A和所述非離子型洗滌劑。相對於現有技術免疫測定法中孵育溶液的濃度，所述兩種組分(化合物A和非離子型洗滌劑)的每一種均以更高的濃度存在於本發明的水溶液中。在另一優選具體實施方式
中提供了水溶液，其中所述非離子型洗滌劑與化合物A的比率為1∶15到1∶25，優選約1∶20。在一個特別優選具體實施方式
中，所述水溶液含有2到7％(v/v)範圍內的化合物A和0.2到0.8％(v/v)範圍內的非離子型洗滌劑。優選該水溶液具有200mM到1mM的離子強度，更優選200mM到800mM，尤其更優選200mM到600mM，最優選250mM到500mM。優選所述水溶液含有選自下述的化合物作為化合物A聚亞烷基二醇，聚丙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙二醇，甘油及其混合物，更優選選自下述的化合物聚丙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙二醇，最優選乙二醇。本發明的水溶液優選不含有二硫蘇糖醇。還優選本發明水溶液不含有β-巰基乙醇。在另一優選具體實施方式
中，水溶液的pH被調整在5.6到9.6範圍內，優選6.0到9.0範圍內，進一步優選6.5到8.0範圍內，最優選6.8到7.4範圍內。所述水溶液的一個特別優選具體實施方式
是具有降低非特異性結合、交叉反應及基質幹擾影響的能力。與標準條件相比，本發明的水溶液尤其能夠防止KD值達10-7的低親合性結合。進一步優選該水溶液能夠防止KD值為10-7M的低親合性結合，並與標準條件相比，將KD值為10-7M到10-8M範圍內的中親合性結合降低至少90％。更進一步優選該水溶液能夠防止KD值為10-7M的低親合性結合，並與標準條件相比，將KD值為10-7M到10-9M範圍內的中親合性結合降低至少90％。在此「標準條件」由以下條件構成的水溶液代表50mM PBS(磷酸鹽緩衝鹽水，pH 7.4)，150mM NaCl，1％(w/v)BSA(參見表1參考文獻實施例)。與用另一標準溶液獲得的測量值相比，結果是相同的，即由50mM PBS(pH 7.4)，100mMNaCl，0.05％(v/v)Tween20組成的水溶液。除了降低非特異性低親合性結合以及基質效應的影響，尤其優選該水溶液能夠增強抗體的結合活性，優選固定化抗體的結合活性，以及配體和受體之間的結合活性。使用本發明溶液可以將固定化抗體的結合活性增強大約10％或更多。本發明的目的還可由之前所述本發明水溶液的濃縮物解決，優選2到10倍濃縮，更優選3到5倍濃縮。更進一步，本發明的目的通過利用本發明水溶液解決，將其作為結合對的結合反應的培養基，其中第一結合成員特異性識別並結合其互補的第二結合成員。優選將該水溶液作為抗體抗原結合反應的培養基，在一個替代性具體實施方式
中該水溶液作為受體配體結合反應的培養基。在其它優選具體實施方式
中，該水溶液作為樣品、試劑、配體、受體、抗原、抗體的稀釋緩衝液。該水溶液還可優選在免疫測定法中結合反應進行之後作為洗滌緩衝液。本發明進一步提供一種在結合對的特異性結合反應過程中降低非特異性結合和/或交叉反應和/或基質幹擾影響的方法，其中第一結合成員識別其互補的第二結合成員，該方法包括利用本發明水溶液作為該特異性結合反應的培養基。本發明另一方面是本發明的水溶液可以作為試劑盒的一個組分。在此術語「試劑盒」是指各種試劑及相關物質，如緩衝液、包含固定化結合成員的載體以及進行試驗所需要的各試劑的集合。因此，本發明提供一種通過免疫測定至少一種待測分析物的檢測試劑盒，其中待測分析物是結合成員對的第一結合成員，其中該第一結合成員特異性結合其互補的結合成員，該試劑盒包含a)含有本發明水溶液的容器；b)在其上固定有所述互補結合成員以捕獲分析物的載體；以及c)任選地，能夠免疫識別與互補結合成員結合的分析物的試劑，其中所述試劑(抗體)軛合一種檢測手段；以及d)任選地，能與所述檢測手段反應以產生可檢測反應產物的試劑。一種典型試劑盒例如可用作ELISA試劑盒用於檢測比如在血清中的抗體。在該情況下根據b)所述載體在其上含有互補結合成員，例如病毒抗原，用於捕獲分析物。所述分析物是血清上抗體。根據c)，能免疫識別所述分析物的試劑則是一種抗-抗體，其能夠識別所述被捕獲的抗體。
實現發明的最佳方式本發明特徵在於作為用於結合成員對的特異性結合反應的培養基使用的水溶液，其中第一結合成員識別其互補第二結合成員，包括a)控制pH的緩衝液；b)選自下述的化合物A由通式I R1-[[CR2R3]p-O]q-R4定義的化合物，其中R1是氫或羥基，各單元中R2獨立地是氫或羥基，R3是氫、甲基、乙基，R4是氫或烷基，p是2到10的一個整數，q是1到100的一個整數，附帶條件是該化合物至少攜帶兩個羥基；-多元醇；-糖類；c)非離子洗滌劑。在結合對的特異性結合反應過程中降低非特異性結合和/或交叉反應和/或基質幹擾影響的本發明方法，其中第一結合成員識別其互補的第二結合成員，即，用於免疫測定，該方法的特徵在於包括利用上述水溶液。優選地，發現含有2到7％(v/v)範圍內的化合物A和0.2到0.8％(v/v)範圍內的非離子型洗滌劑的水溶液有用的。優選該水溶液具有200mM到1mM的離子強度，更優選200mM到800mM，尤其更優選200mM到600mM，最優選250mM到500mM。優選所述水溶液含有選自下述的化合物作為化合物A聚亞烷基二醇，聚丙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙二醇，甘油及其混合物，更優選選自下述的化合物聚丙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙二醇，最優選乙二醇。下述實施例更詳細地說明本發明。但是，所述實施例僅僅用於說明，並非限制本發明的範圍。


圖1顯示在夾心試驗中與CRP結合的檢測抗體C6的數量，450nm下吸光度對CRP濃度[ng/ml]作圖。所述檢測抗體C6與蛋白質CRP的結合反應是在標準條件下如實施例1所述進行，分別使用本發明的樣品緩衝液(參見表1)。根據本發明溶液的樣品緩衝液I到III很好地降低了基質效應的影響。樣品緩衝液I顯示出最佳靈敏度。參照緩衝液的低靈敏度由強烈的基質效應造成。
圖2顯示在由多克隆的檢測抗體P2的非特異性結合所引起的高背景信號下兩種不同緩衝液的影響，所述P2非特異性結合捕獲抗體P3(根據實施例2)。在該實驗中無分析物存在。與參照實施例緩衝液II的高背景信號相比，樣品緩衝液I顯著地降低了非特異性結合。
實施例 實施例1降低基質效應 向微孔板(C8 StarWell Module，NUNC)的各孔中加入100μl稀釋的捕獲抗體C2(最終濃度1μg/ml在PBS-緩衝液中)並用板密封墊覆蓋。捕獲抗體靶向CRP(c-反應蛋白)。然後在室溫下孵育該板5小時。去除密封墊，以每孔300μl的洗滌緩衝液(10mM磷酸鹽，350mMNaCl，0.05％Tween，pH 7.4)洗滌該板4次。然後向各孔加入200μl阻斷溶液(PBS-緩衝液，pH 7.4，1％BSA)。用板密封墊覆蓋後4℃孵育過夜。在兔血清(0-5ng/ml)中稀釋分析物CRP(c反應蛋白)並在室溫下孵育30min。在不同的樣品緩衝液以及參照實施例緩衝液(參見表1)中稀釋生物素標記的檢測抗體C6(靶向CRP)。在各製備物中的最終濃度是4μg/ml。含有CRP的兔血清標準物被含有檢測抗體的樣品緩衝液以1∶2稀釋。在室溫下將其孵育30min。去除板密封墊並用300μl洗滌緩衝液洗滌該板4次。輕敲該板，使其乾燥，徹底去除殘餘洗滌緩衝液。向各孔加100μl CRP製劑。用板密封墊覆蓋該板並在室溫下輕微振蕩孵育4h。然後再次洗滌該板。向各孔加入100μl稀釋的NeutrAvidinTM-辣根過氧化酶軛合物(最終濃度0.05μg/ml在PBS緩衝液中)。在室溫下輕微振蕩孵育該板1h。然後再次洗滌該板。將等體積的ImmunoPureTMBSubstrat的兩種溶液混合，並立即加100μl到各孔中。在室溫下孵育該板直至出現期望的顏色。顏色從澄清變化為亮藍。在最後的步驟中，向各孔加入150μl 2M H2SO4停止反應，用ELISA板讀數器(Molecular設備)在450nm下閱讀吸光度。圖1畫出了不同緩衝液對基質效應的影響。表1顯示該試驗的結果。在表1中非特異性結合、低親合性結合及基質效應的降低在「結果」一欄中用「+」表示。與參照實施例緩衝液(″-″)相比，「+」的數目表示非特異性結合、低親合性結合及基質效應降低的數量。圖1顯示與CRP結合的檢測抗體C6的數量，在450nm下吸光度對CRP的濃度[ng/ml]作圖。樣品緩衝液I顯示出最佳靈敏度。參照緩衝液的低靈敏度由強烈的基質效應造成。
實施例2降低多克隆檢測抗體的非特異性結合 接下來的實驗中，向微孔板(C8 StarWell Module，NUNC)的各孔中加入250μl稀釋的捕獲抗體P3(多克隆兔抗蛋白酶，自有製劑，最終濃度1g/ml在PBS-緩衝液中)並用板密封墊覆蓋。在室溫下孵育該板4小時。去除密封墊後，以每孔300μl的洗滌緩衝液(10mM磷酸鹽，350mM NaCl，0.05％Tween，pH 7.4)洗滌該板4次。然後向各孔加入200u l阻斷溶液(PBS-緩衝液，pH 7.4，1％BSA)。再次用密封墊覆蓋後4℃孵育過夜。分別在參照實施例緩衝液I I或樣品緩衝液I(參見表1)中稀釋生物素標記的多克隆檢測抗體P2(多克隆兔抗蛋白酶，自有製劑)(在各製劑中的最終濃度為10μg/ml)，並加入各孔(250μl每孔；五倍的重複實驗)。在室溫下孵育該板2h。去除板密封墊並用300μl洗滌緩衝液洗滌4次。輕敲該板，使其乾燥，徹底去除殘餘洗滌緩衝液。向各孔加入250μl稀釋的NeutrAvidinTM-辣根過氧化酶軛合物(最終濃度0.5μg/ml在PBS緩衝液中)。在室溫下輕微振蕩孵育該板1h。然後再次洗滌該板。將等體積的ImmunoPureTMB Substrat的兩種溶液混合，並直接加100μl到各孔中。在室溫下孵育該板直至出現期望的顏色。顏色從澄清變化為亮藍。在最後的步驟中，向各孔加入150μl 2M H2SO4停止反應，用ELISA板讀數器(Molecular設備)在450nm下閱讀吸光度。圖2顯示了在由多克隆的檢測抗體P2的非特異性結合所引起的高背景信號下兩種不同緩衝液的影響，所述P2非特異性結合捕獲抗體P3。圖2表明本發明的樣品緩衝液I能夠降低背景信號。在該實驗中未使用分析物。另外使用多克隆血清作為抗體。多克隆血清包含許多不同的抗體，這些抗體均靶向靶蛋白質。許多抗體能夠以低或更低的親合性結合，有些抗體則能以中親合性結合，而只有一種或少數抗體能以高親合性結合。如圖2所示，通過利用本發明的緩衝液，可以防止相應抗體的低親合性結合，至少降低中親合性結合。因此，由於本發明水溶液的特性，一旦將一種分析物加入這樣的試驗中，信噪比將會提高。
表1該表表明實施例1的實驗結果結果(＝非特異性、低親合性結合及基質效應的降低)

權利要求
1.一種作為用於結合對的特異性結合反應的培養基使用的水溶液，其中第一結合成員識別其互補的第二結合成員，該溶液含有a)一種控制pH的緩衝液；b)選自下組的化合物A-由通式I R1-[[CR2R3]p-O]q-R4定義的化合物，其中R1是氫或羥基，各單元中R2獨立地是氫或羥基，R3是氫、甲基、乙基，R4是氫或烷基，p是2到10的一個整數，q是1到100的一個整數，附帶條件是該化合物至少攜帶兩個羥基；-多元醇；-糖類；c)非離子洗滌劑。
2.權利要求1的水溶液，進一步包含一種免疫阻斷非特異性抗體結合的有效量的蛋白質。
3.權利要求2的水溶液，其中所述蛋白質選自牛血清白蛋白，卵清蛋白、酪蛋白、胎牛血清。
4.權利要求2或3的水溶液，其中所述蛋白質的濃度在0.1到2％(w/v)範圍之內，優選在0.5到1.5％(w/v)範圍內。
5.權利要求1到4的任一項的水溶液，其中所述溶液包含選自NaCl、KCl、NH4Cl的鹽。
6.權利要求1到5的任一項的水溶液，其中所述溶液具有100mM到1.5M的離子強度，優選200mM到1M，更優選200mM到800mM，進一步更優選200mM到600mM，最優選250mM到500mM。
7.權利要求1到6的任一項的水溶液，其中所述緩衝液選自Tris(三(羥甲基)-氨基甲烷)，Pipes(哌嗪-1，4-雙-2-乙烷磺酸)，Mes(4-嗎啉代乙烷磺酸)，Hepes(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪-乙烷磺酸)，磷酸鹽緩衝液。
8.權利要求1到7的任一項的水溶液，其中所述化合物A選自下組聚亞烷基二醇，聚丙二醇，丙二醇，聚乙二醇，乙二醇，單糖，雙糖，三糖，蔗糖，甘露糖，海藻糖，多元醇，甘油和其混合物。
9.權利要求1到8的任一項的水溶液，其中所述化合物A的濃度在0.5到25％(v/v)範圍之內，優選在2.0到20％(v/v)範圍內，更優選在2到15％(v/v)範圍內，進一步更優選2.0到10％(v/v)範圍內，甚至更優選2.0到7.0％(v/v)範圍內，最優選約5％(v/v)。
10.權利要求1到9的任一項的水溶液，其中所述非離子型洗滌劑為通式化合物，其選自a)具有取代基R1和R2(R1-Ph-R2)的取代的苯基，其中R1是C1-C9烷基，R2是-O-[CH2-CH2-O]a-H基團，其中「a」是5到40的一個整數，其中R2相對於R1在對位、間位或鄰位；b) 其中n、x、y及z都是5到40的整數，R是脂肪酸殘基。
11.權利要求1到9的任一項的水溶液，該非離子型洗滌劑選自十二烷基聚(乙二醇醚)m，其中m是5到40的整數；1-O-n-辛基-β-D-吡喃葡糖苷(n-辛葡糖苷)；烷基酚聚(乙二醇-醚)m，其中m是5到40的整數，優選m＝11(Nonidet P40)；1-O-n-十二烷基-β-D-吡喃葡糖基(1-4)α-D-吡喃葡糖苷；十二烷基聚-(乙二醇醚)m，其中m是5到40的整數，優選m＝23(Brij35；)；聚(氧化乙烯)(20)-脫水山梨醇單脂肪酸酯，優選選自聚(氧化乙烯)(20)-脫水山梨醇一油酸(Tween80)，聚(氧化乙烯)(20)-脫水山梨醇單月桂酸(Tween20)，聚(氧化乙烯)(20)-脫水山梨醇單棕櫚酸(Tween40)，聚(氧化乙烯)(20)-脫水山梨醇一硬脂酸)；辛基酚聚(乙二醇醚)m，其中m是5到40的整數，優選m＝10(TritonX-100)。
12.權利要求1到11的任一項的水溶液，其中所述非離子型洗滌劑的濃度在0.1約1.0％(v/v)範圍之內，優選在0.15到1.0％(v/v)範圍內，更優選在0.2約1.0％(v/v)範圍內，進一步更優選0.2到0.8％(v/v)範圍內，甚至更優選0.25％到0.6％(v/v)範圍內，最優選約0.25％(v/v)。
13.權利要求1到12的任一項的水溶液，其中所述非離子型洗滌劑與化合物A的比率為1∶15到1∶25，優選約1∶20。
14.權利要求1到13的任一項的水溶液，其中所述溶液不含有二硫蘇糖醇。
15.權利要求1到14的任一項的水溶液，其中pH被調整在5.6到9.6範圍內，優選6.0到9.0範圍內，更優選6.5到8.0範圍內，最優選6.8到7.4範圍內。
16.權利要求1到15的任一項的水溶液，具有降低非特異性結合、交叉反應及基質幹擾影響的能力。
17.權利要求1到16的任一項的水溶液，能夠防止KD值達10-7M的低親合性結合。
18.權利要求1到17的任一項的水溶液，能夠防止KD值高至10-7M的低親合性結合，並將KD值為10-7M到10-8M範圍內的中親合性結合降低至少90％。
19.權利要求1到18的任一項的水溶液，能夠防止KD值為高至10-7M的低親合性結合，並將KD值為10-7M到10-9M範圍內的中親合性結合降低至少90％。
20.權利要求1到19的任一項的水溶液，能夠增強抗體的結合活性(親合性)，優選固定化抗體的結合活性(親合性)。
21.權利要求1到20的任一項的水溶液的濃縮物，優選2到10倍濃縮物，更優選3到5倍濃縮物。
22.權利要求1到20的任一項的水溶液作為用於結合對的結合反應的培養基的用途，其中第一結合成員特異性識別並結合其互補的第二結合成員。
23.權利要求1到20的任一項的水溶液用作抗體抗原結合反應的培養基的用途。
24.權利要求1到20的任一項的水溶液用作受體配體結合反應的培養基的用途。
25.權利要求1到20的任一項的水溶液用作樣品及試劑優選配體、受體、抗原、抗體的稀釋緩衝液或用作洗滌緩衝液的用途。
26.一種在結合對的特異性結合反應過程中降低非特異性結合和/或交叉反應和/或基質幹擾影響的方法，其中第一結合成員識別其互補的第二結合成員，所述方法包括利用權利要求1到20的水溶液作為該特異性結合反應的培養基。
27一種通過免疫測定至少一種待測分析物的檢測試劑盒，其中待測分析物是結合成員對的第一結合成員，其中該第一結合成員特異性結合其互補的結合成員，該試劑盒包含a)含有權利要求1到20的任一項的緩衝液的容器；b)在其上固定有所述互補結合成員以捕獲分析物的載體；以及c)任選地，能夠免疫識別與互補結合成員結合的分析物的試劑，其中所述試劑軛合一種檢測手段；以及d)任選地，能與所述檢測手段反應以產生可檢測反應產物的試劑。
全文摘要
本發明涉及一種作為用於結合對的特異性結合反應培養基使用的水溶液，其中第一結合成員識別其互補第二結合成員，該溶液含有a)一種控制pH的緩衝液；b)選自下述基團的化合物A由通式IR
文檔編號G01N33/53GK1922487SQ200480042127
公開日2007年2月28日 申請日期2004年2月26日 優先權日2004年2月26日
發明者P·勞赫, T·波利夫克, A·策爾默 申請人:康多爾生物技術有限公司