一種捕蠅草組織培養育苗方法與流程
2023-10-06 21:49:14
本發明涉及植物組織培養育苗技術領域，具體涉及一種捕蠅草組織培養育苗方法。
背景技術：
捕蠅草（Dionaea muscipula），英文名稱為Venus Flytrap，是原產於北美洲的一種多年生草本植物，是一種非常有趣的食蟲植物。隨著人們生活水平日益改善，越來越多的花友開始種植捕蠅草。然而，在原產地的捕蠅草在生存上卻受到人類活動的威脅。人口快速增加因而剝奪捕蠅草的生存空間，而且因為人為幹預、自然野火的發生，使得這些原產地開始長出一些小型灌木，遮蔽捕蠅草的陽光，造成一些捕蠅草品種的瀕臨滅絕。
捕蠅草的繁殖方式主要是播種繁殖和葉插繁殖。
採用播種繁殖存在的問題為：捕蠅草可以自花授粉，但通常得進行人工授粉才確實會結果，捕蠅草因雌雄蕊不會一起成熟，人工授粉較難成功，捕蠅草的種子不耐保存，且種子非常細小直徑不到一毫米，不易保存，極易損壞。
採用葉插繁殖存在的問題為：採用葉插繁殖新芽形成很慢，並且不同品種對溫溼度，光照等要求不一樣，葉插繁殖難以成功。
採用傳統播種繁殖、葉插繁殖，有著成功率極低，繁殖效率緩慢等缺點，難以滿足捕蠅草市場需求。目前，關於捕蠅草的繁殖研究很少，國內進行工廠化生產捕蠅草的企業很少，還沒有一種關於捕蠅草組織培養育苗的方法，因此在一定程度上制約了捕蠅草的工廠化生產。
技術實現要素：
本發明要解決的技術問題是：提供一種捕蠅草組織培養育苗方法，提高捕蠅草組培苗栽培的成活率，節約成本，為捕蠅草工廠化生產提供關鍵技術。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的：
一種捕蠅草組織培養育苗方法，包括以下步驟：
（1）培養基製備：培養基包括誘導增殖培養基和生根培養基，誘導增殖培養基為2/3MS+6-BA01mg/L+IBA0.2mg/ml+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L+ph5.9；生根培養基為1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+活性碳0.2g/L+瓊脂5g/L+ph5.9；將配製好的誘導增殖培養基和生根培養基分別以每瓶80ml裝入培養瓶中，採用121℃、0.5MPa進行滅菌25min後冷卻凝固備用；
（2）外植體製備：在春夏季節，選用成熟健壯4年以上的捕蠅草作為外植體母體，取新發出且鮮綠的芽頭作為外植體，並進行消毒、清洗；
（3）誘導培養：接種器具進行滅菌，雙手消毒後，將步驟（2）中製備得到的外植體在超淨工作檯內，按無菌操作要求把外植體置於步驟（1）製備得到的誘導增殖培養基中，外植體傷口處接觸到誘導增殖培養基，蓋好培養瓶蓋後放置於消毒後的培養室內進行培養30天，即可誘導培養出完整小植株；
（4）生根培養：將誘導培養得到的完整小植株在超淨工作檯內按無菌要求轉接入步驟（1）製備得到的生根培養基中進行生根培養2~3個月；
（5）套袋馴化：將生根培養得到幼苗取出，用1000倍多菌靈浸泡10min後流水衝洗後種植於泥炭土與珍珠巖混合基質中，用透光的袋子罩住整株植株，放置在散光通風處悶養20-30天後取走袋子即可。
優選的，步驟（2）中外植體消毒、清洗步驟是：先用流水衝洗30min，之後用吸水紙吸乾水份，然後於超淨工作檯上用75%的乙醇浸泡1~3min，期間不斷搖晃外植體，再用無菌水衝洗3~5遍後用無菌鑷子取出放置在濃度為0.1~0.2%升汞中浸泡3~5min，期間不斷搖晃外植體，再用無菌水衝洗5~8遍後用無菌鑷子取出放置在無菌吸水紙上吸乾水份，即可。
優選的，步驟（3）中，進行誘導培養時，培養室溫度控制在25℃，溼度40~50%，光照4500Lux每天10小時。
優選的，步驟（4）中，生根培養的溫度控制在25℃，光照5500Lux每天12小時。
優選的，步驟（5）中，泥炭土與珍珠巖混合基質中泥炭土與珍珠巖的體積比為4:1。
本發明的有益效果：採用上述方法後，本發明解決了傳統播種繁殖、葉插繁殖成功率極低、繁殖效率緩慢等問題，運用本發明進行捕蠅草組織培養育苗，培養基繁殖係數達到4~5，繁殖一批僅需4~6個月的時間，具有繁殖係數高、繁殖速度快的特點，而且繁育出來的種苗具有與母體相同的植物特徵，抗性好。大大解決了捕蠅草繁殖困難的問題，有利於捕蠅草進行規模化、工廠化生產。
具體實施方式
下面結合具體的實施例對發明進行進一步介紹：
一種捕蠅草組織培養育苗方法，包括以下步驟：
（1）培養基製備：培養基包括誘導增殖培養基和生根培養基，誘導增殖培養基為2/3MS+6-BA01mg/L+IBA0.2mg/ml+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L+ph5.9；生根培養基為1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+活性碳0.2g/L+瓊脂5g/L+ph5.9；將配製好的誘導增殖培養基和生根培養基分別以每瓶80ml裝入培養瓶中，採用121℃、0.5MPa進行滅菌25min後冷卻凝固備用；
（2）外植體製備：在春夏季節，選用成熟健壯4年以上的捕蠅草作為外植體母體，取新發出且鮮綠的芽頭作為外植體，並進行消毒、清洗；其中，外植體消毒、清洗步驟是：先用流水衝洗30min，之後用吸水紙吸乾水份，然後於超淨工作檯上用75%的乙醇浸泡1~3min，期間不斷搖晃外植體，再用無菌水衝洗3~5遍後用無菌鑷子取出放置在濃度為0.1~0.2%升汞中浸泡3~5min，期間不斷搖晃外植體，再用無菌水衝洗5~8遍後用無菌鑷子取出放置在無菌吸水紙上吸乾水份，即可；
（3）誘導培養：接種器具進行滅菌，雙手消毒後，將步驟（2）中製備得到的外植體在超淨工作檯內，按無菌操作要求把外植體置於步驟（1）製備得到的誘導增殖培養基中，外植體傷口處接觸到誘導增殖培養基，蓋好培養瓶蓋後放置於消毒後的培養室內進行培養30天，培養室溫度控制在25℃，溼度40~50%，光照4500Lux每天10小時，即可誘導培養出完整小植株；
（4）生根培養：將誘導培養得到的完整小植株在超淨工作檯內按無菌要求轉接入步驟（1）製備得到的生根培養基中進行生根培養2~3個月，生根培養的溫度控制在25℃，光照5500Lux每天12小時；
（5）套袋馴化：將生根培養得到幼苗取出，用1000倍多菌靈浸泡10min後流水衝洗後種植於泥炭土與珍珠巖混合基質中，泥炭土與珍珠巖的體積比為4:1，用透光的袋子罩住整株植株，放置在散光通風處悶養20-30天後取走袋子即可。
以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限於這些說明。對於本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬於本發明的保護範圍。