一種甘草酸的製備方法
2023-10-04 22:27:44 3
一種甘草酸的製備方法
【專利摘要】本發明公開一種高純度甘草酸的製備方法，採用甘草為原料，經超聲波提取後，取上清液，用鹽酸調節pH，離心取沉澱，沉澱用去離子水洗2-3次後置於真空乾燥箱中乾燥，得甘草酸粗品。稱取一定量的甘草酸粗品，加水，用濃氨水調節至pH8-9，待完全溶解後，加入有機溶劑萃取，兩相分層清晰後，取水層，再通過半製備型高效液相色譜儀進一步純化後得到高純度甘草酸。採用本發明製備甘草酸，操作簡單，實驗步驟少，汙染小，成本低，周期短，純度可達99.5%以上。
【專利說明】一種甘草酸的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物醫藥【技術領域】，具體涉及一種高純度甘草酸的製備方法。
【背景技術】
[0002]甘草酸(glycyrrhizic acid, GA)又稱甘草甜素,是常用中藥甘草的主要有效成分，味極甜，具有抗胃及十二指腸潰瘍、抗肝炎、降血脂等廣泛的活性，近年來還發現甘草酸具有抗愛滋病毒和免疫促進等作用，在醫學、食品、化工等行業均有用途。
[0003]我國甘草資源豐富，是甘草出口大國，然而目前多限於甘草原料及粗製品，價值較低，且很難打入國際市場，其藥效也沒有得到眾多國家的承認。目前甘草酸作為甜味劑而被廣泛應用。而高純度的甘草酸價格十分昂貴。因此，找到一條適合工業生產的提取純化甘草酸的途徑很有現實意義。
[0004]目前，我國甘草酸工業生產大多仍沿用傳統的提取和精製方法，例如:陝西慧科植物開發有限公司採用水提法得到甘草水提液，再用乙醇重結晶得到純度為96%的甘草酸。而大孔吸附樹脂和聚酞胺法等較先進的方法函待工業化。因此，尋找提取純化甘草酸的最佳工藝條件，工藝流程成為甘草酸利用要解決的首要問題。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在於針對目前在製備甘草酸過程中所存在的工藝複雜以及純度不高的問題，提供一種製備高純度甘草酸的新方法。
[0006]為實現上述目 的，本發明採取的技術方案為:
一種甘草酸的製備方法，以甘草為原料，採用半製備型高效液相色譜法製備高純度甘草酸，它包括以下步驟:
(1)將甘草以體積比1:10與含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合後，超聲波萃取f 2h後，離心取上清液；
(2)將上清液用鹽酸調pH至3~4，酸沉過夜，離心取沉澱，用去離子水洗2-3次後，至於真空乾燥箱中乾燥，得甘草酸粗品；
(3)取甘草酸粗品粉末，加水溶解並用氨水調至pH8-9，待完全溶解後，加入等體積的有機溶劑萃取2-3次後，取水層；
(4)將水層pH調回至5，採用C18反相矽膠色譜柱，甲醇和水作為流動相，梯度洗脫，經過半製備型液相色譜儀進行最後一步的分離純化後，收集到的甘草酸的純度高於99.5%。
[0007]本發明的有益效果是可選用甘草或者甘草粗提物來製備甘草酸，過程簡單、易控制，工藝技術簡化，生產成本低，該半製備的色譜條件可同比放大，適用於工業級生物醫藥用液相製備色譜裝置，以實現高純度甘草酸的工業化生產。高效液相色譜測定中，總雜質峰小於0.45%，單一雜質峰不超過0.2%。此產品完全符合歐洲藥典標準。
【專利附圖】
【附圖說明】[0008]圖1是甘草酸粗品液相色譜法測定圖譜，圖2是高純度甘草酸液相色譜法測定圖譜。。
【具體實施方式】
[0009]實施例1
1.取Ikg已粉碎後的甘草粉末與10倍體積含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合後，超聲波萃取Ih後，離心取上清液；
2.用濃鹽酸調節上清液pH至3~4，酸沉過夜，離心取沉澱，用去離子水洗2-3次後，至於真空乾燥箱中乾燥，得甘草酸粗品； 3.稱取甘早酸粗品0.5g,加入50ml水中，用氣水調pH至8後,待甘早Ife粗品完全溶解後，加入等體積的乙酸乙酯萃取三次，取水層；
4.將水層pH調回至5，採用半製備型液相色譜儀進行最後一步的分離純化，色譜柱尺寸為Φ10Χ250πιπι，C18反相矽膠填料為江蘇漢邦科技有限公司產品，粒徑為10um，上樣量10mg，流動相為純甲醇-水溶液，梯度度洗脫條件為，(T25min，甲醇65%~80% ;25~50min，甲醇80%~80%，流速4ml/min，柱溫為20°C，紫外檢測波長為230nm，收集保留時間在15~18min的餾分。經HPLC分析純度≥99.6%。
[0010]實施例2
1.取Ikg已粉碎後的甘草粉末與10倍體積含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合後，超聲波萃取1.5h後，離心取上清液；
2.用濃鹽酸調節上清液pH至3~4，酸沉過夜，離心取沉澱，用去離子水洗2-3次後，至於真空乾燥箱中乾燥，得甘草酸粗品；
3.稱取甘早酸粗品0.5g,加入50ml水中，用氣水調pH至9後,待甘早Ife粗品完全溶解後，加入等體積的丙酮萃取三次，取水層；
4.將水層pH調回至5，採用半製備型液相色譜儀進行最後一步的分離純化，色譜柱尺寸為Φ10Χ250πιπι，C18反相矽膠填料為江蘇漢邦科技有限公司產品，粒徑為5um，上樣量20mg，流動相為純甲醇-水溶液，梯度度洗脫條件為，(T20min，甲醇60%~75% ;2(T35min，甲醇75%~85%，流速4ml/min，柱溫為25 °C，紫外檢測波長為230nm，收集保留時間在18~23.5min的餾分。經HPLC分析純度≥99.5%。
[0011]實施例3
1.稱取甘草粗提物0.5g，加入50ml水中，用氨水調pH至8後，若有未溶解物，離心，取
上清液；
2.加入等體積的氯仿於上清液中，萃取三次，取水層；
4.將水層pH調回至5，採用半製備型液相色譜儀進行最後一步的分離純化，色譜柱尺寸為Φ10Χ250πιπι，C18反相矽膠填料為江蘇漢邦科技有限公司產品，粒徑為10um，上樣量15mg，流動相為純甲醇-水溶液，梯度度洗脫條件為，(T25min，甲醇65%~80% ;25~50min，甲醇80%~80%，流速4ml/min，柱溫為30°C，紫外檢測波長為230nm，收集保留時間在14.5~19min的餾分，經HPLC分析純度≥99.5%。
【權利要求】
1.一種甘草酸的製備方法，其特徵在於包括以下步驟: (1)將甘草和含0.5%氨水的70%乙醇水溶液混合後，超聲波萃取l~2h，離心取上清液； (2)將上清液用鹽酸調pH至3~4，酸沉過夜，離心取沉澱，用去離子水洗2-3次後，置於真空乾燥箱中乾燥，得甘草酸粗品； (3)將甘草酸粗品用水溶解並用氨水調pH至8-9，經有機溶劑萃取2-3次後，取水層； (4)將水層pH調回至5，採用甲醇和水做流動相，使用半製備型高效液相色譜儀製備得到高純度甘草酸。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵是:所述步驟(3)中所述的有機溶劑優選乙酸乙酯、丙酮或氯仿。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵是:所述步驟(4)中半製備型高效液相色譜儀採用固定相為C18的反相矽膠填料，色譜柱規格:內徑l(T30mm、長度15(T300mm，填料粒徑為5~10 μ m，流動相以梯度洗脫的方式洗脫甘草酸樣品。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵是:流動相甲醇與水的體積比(V/V)為3:2~4:1，柱溫 20~35 °C，流速 4~30ml/min。
【文檔編號】C07H15/256GK103588831SQ201210286476
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2012年8月14日 優先權日:2012年8月14日
【發明者】居延娟, 李枝玲, 王冰冰, 劉大偉, 劉根水 申請人:江蘇漢邦科技有限公司