蠍毒多肽的製備方法
2023-10-05 00:29:19 1
專利名稱：蠍毒多肽的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種生物製藥方法，尤其是蠍毒多肽的製備方法。
背景技術：
在傳統的中醫藥學中，全蠍有悠久的藥用歷史，近年來有關蠍毒的研究與應用愈來愈受到人們的重視。研究認為蠍毒素是全蠍藥理作用的主要成份，有較強的中樞鎮痛作用。目前有的已用於疾病的治療。中國專利申請號93109133、97120965和98101335公開的專利申請文件中，公開了蠍毒注射液，及其製取方法，有的採用多卡因藥物聯合配用蠍毒注射液有的採用不破壞蛋白質晶體蠍毒配製注射液，其不足之處在於其蠍毒注射液中蠍毒原料均以蠍毒蛋白質混合物存在，其質量不夠穩定，直接影響了使用效果；由於配製製劑的原料沒有具體定性、定量指標，難於滿足國家對藥品原料質量的要求。
發明內容
針對當前蠍毒藥品中存在的不足，本發明的目的在於公開一種製備蠍毒多肽的方法，用該方法可以獲取較高純度的蠍毒多肽，以蠍毒多肽為主要原料可製取蠍毒多肽凍乾粉製劑等。它是一種純度較高、活性較強、質量可控、性能穩定，療效確切的藥物。
本發明的製備方法步驟如下①裝柱用CM-Sephadex G-50層析填料裝柱；②平衡及洗脫用緩衝液平衡，再用緩衝液洗脫；③加樣將市售蠍毒樣品用緩衝液稀釋後上樣；④梯度洗脫用緩衝液和氯化鈉溶液進行梯度洗脫；⑤洗脫液的收集與檢測；⑥合併收集液根據檢測結果合併收集液；⑦濃縮與脫鹽；⑧低溫保存；⑨全檢；⑩產品包裝，圖1為其生產工藝流程圖。
以上製備方法要求在無菌、恆溫(10℃)冷櫃中進行。
採用本方法製備的產品是一種無色至微黃色液體，其收率為20％-30％，其相對分子質量在1000-10000個單位的蠍毒多肽，其純度高於90％。本製備方法工藝簡單，易於實現自動化生產，並能實現微機工作站控制質量。
圖1為其生產工藝流程圖。
圖2為蠍毒多肽高壓液相色譜圖。
圖3為不同分子量蛋白質和多肽的高壓液相色譜圖。
具體實施例方式
下面對本發明做進一步描述取CM-Sephadex G-50層析柱，其柱長為26×30cm。用10倍於柱體積的緩衝液衝洗平衡層析柱，待平衡好柱後上樣。將1g蠍毒樣品(淡黃色粉末)溶於10ml磷酸鹽緩衝溶液中，待柱床上的緩衝液基本吸附後，用滴管沿柱壁輕輕注入樣品(上樣)，用緩衝液稀釋餘下的樣品，每次1-2ml，分兩次加入即可。然後將緩衝液旋轉式加入一段液柱，上蓋、收集，流速為5ml/1200秒。將100ml左右的緩衝液用完後，改為梯度洗脫。梯度洗脫20管前為平衡液洗脫；21管後加NaCL進行梯度洗脫，攪拌瓶為400ml磷酸鹽緩衝溶液(10mM的磷酸鹽緩衝液，PH＝6.4)，儲存瓶為1MNaCL的磷酸鹽緩衝液400ml:3、直至收集150管為止。檢測以後，根據檢測結果合併；合併65-82管，83-103管，在無菌、低溫下超濾，待紫外檢測確定濃度後，置密閉瓶中在-20℃以下低溫保存。
成品蠍毒多肽的質量控制方法採用高效液相色譜法，具體條件為色譜柱日本東洋曹達公司TSK-125。
流動相PH＝7.0的K2HPO4t和KH2PO4緩衝液加50ml異丙醇到1000ml。
流速1ml/min。
柱壓3Mpa柱測uv-280nm。
柱測結果樣品色譜圖見附圖2。
不同分子量的標準物質圖譜見附圖3。
柱測結果表明本方法提取得到的蠍毒分子量在1000-10000之間。
權利要求
1.一種蠍毒多肽的製備方法，其特徵在於它包括如下步驟①裝柱用CM-Sephadex G-50層析填料裝柱；②平衡及洗脫用緩衝液平衡，再用緩衝液洗脫；③加樣將市售蠍毒樣品用緩衝液稀釋後上樣；④梯度洗脫用緩衝液和氯化鈉溶液進行梯度洗脫；⑤洗脫液的收集與檢測；⑥合併收集液根據檢測結果合併收集液；⑦濃縮與脫鹽；⑧低溫保存於密閉瓶中在-20℃以下低溫保存；⑨全檢；⑩產品包裝。
2.按照權利要求1所述蠍毒多肽的製備方法，其特徵在於所述製備方法要求在無菌、恆溫(10℃)的冷櫃中進行。
全文摘要
一種蠍毒多肽的製備方法，涉及一種生物製藥方法，尤其是蠍毒多肽的製備方法，主要為生產蠍毒多肽提供一種新的方法，其製備方法包括裝柱、平衡及洗脫、加樣、梯度洗脫及全檢和產品包裝等步驟，由此種製備方法生產出來的蠍毒多肽為一種無色至微黃色液體，可用於生產蠍毒多肽凍乾粉製劑，廣泛用於醫療行業。
文檔編號C07K1/00GK1417230SQ0214475
公開日2003年5月14日 申請日期2002年12月11日 優先權日2002年12月11日
發明者孟祥軍, 趙恩成, 張瑞德, 李娜然, 孟憲舒, 高文博, 顧孝先, 郝丕業, 呂潔 申請人:趙恩成, 康力