一種羧基化的螢光微球、製備方法及其應用的製作方法
2023-10-07 23:28:49 1
一種羧基化的螢光微球、製備方法及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種羧基化的螢光微球、製備方法及其應用。採用水解反應方法製備得到側鏈帶有羧基的聚亞芳香基乙炔撐聚合物，經N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀醯亞胺將羧基活化後，以5μm單分散性氨基改性的多孔聚甲基丙烯酸縮水甘油酯APGMA微球為基質球，螢光聚合物將以共價鍵結合在APGMA微球上，從而製備得到基於共軛聚合物的羧基化的螢光微球，該螢光微球具有生物反應位點。本發明提供的螢光微球具有良好的生物偶聯性能，可檢測到生物分子BSA。若將所需的抗體通過聚合物側鏈上的羧基偶聯微球上，得到具有抗體標記的螢光微球，可用於相應抗原的檢測。
【專利說明】
【技術領域】
[0001] 本發明涉及螢光共軛聚合物傳感材料【技術領域】，特別涉及一種基於共軛聚合物的 具有用於生物偶聯的反應位點的螢光微球、製備方法及其應用。 -種羧基化的螢光微球、製備方法及其應用
【背景技術】
[0002] 在提高整個人類社會公眾健康的良好願景下，高通量技術診斷檢測在學術和臨床 領域已引起研究者極大的關注。與基於如平面陣列等常規方法的測定法相比，新出現的基 於微球的懸浮陣列具有許多優點。通常，懸浮陣列技術由於球體的高流動性可以達到更 快的檢測速度；由於可以與分析物在三維空間中結合因而具有高靈敏性；檢測結果是基於 超過10, 000個微球的統計信息的特點也使懸浮陣列技術的精度更高；此外由於便利的洗 滌和分離步驟使得懸浮陣列技術也更易操作i/? 2002，％，9; Lab on a Chip 2003, 3, 60N; Journal of biomolecular screening 2004, 9, 173; Angewandte Chemie International Edition 2006, 45, 6104; Science 2007, 315, 1393; 2007, 7, 527 )。突光微球是懸浮陣列最常用 也至關重要的載體。這些微球必須具備一些便於信號讀取和分析的特性，如尺寸在微米級 別上並且具有單分散性，均勻穩定的發光性，最好具有羧基或氨基的基團可以直接與生物 分子結合以便檢測的進行等。目前適合於這種技術的商業可用的螢光微球數量有限且非常 昂貴。因此非常迫切需要發展新的方法以可接受的成本來製造足夠的具有所需性能的螢光 微球並使最普通的人受益。
[0003] 共軛聚合物（CPs)作為螢光團，擁有許多獨特的優點：如耐光漂白性，結構易於 調整，和高的熱 / 機械穩定性 7/?temaiio/? 2001，必， 2591; 2009，7你，897)。然而，儘管有許多報導採用有機染料或量子 點製備螢光微球，但由於共軛聚合物的製備過程比較複雜，有關共軛聚合物應用於螢光微 球的技術方案較少見報導。
【發明內容】
[0004] 本發明針對現有技術存在的不足，提供一種製備工藝簡單，基於共軛聚合物的，具 有用於生物偶聯的反應位點的，可用於生物檢測的螢光微球、製備方法及其應用。
[0005] 實現本發明目的的技術方案是提供一種羧基化的螢光微球的製備方法，包括如下 步驟： 1、採用水解反應製備得到側鏈帶有羧基或羧酸鹽的聚亞芳香基乙炔撐聚合物CP1和 CP2 ； 所述CP1的結構式為：
【權利要求】
1. 一種羧基化的螢光微球的製備方法，其特徵在於包括如下步驟： (1) 採用水解反應製備得到側鏈帶有羧基的聚亞芳香基乙炔撐聚合物CP1或CP2 ; 所述CP1的結構式為：
所述CP2的結構式為：
(2) 製備濃度為1?20 μΜ的CP1或CP2溶液，加入羧基活化劑N-(3-二甲氨基丙 基）-Ν' -乙基碳二亞胺鹽酸鹽和Ν-羥基琥珀醯亞胺，對側鏈帶有羧基的聚亞芳香基乙炔撐 聚合物CP1或CP2的側鏈羧基進行活化處理，得到CP1或CP2的羧基活化溶液； (3) 以直徑為5 μ m的單分散性氨基改性的多孔聚甲基丙烯酸縮水甘油酯APGMA微球 為基質球，將APGMA微球置於步驟（2 )得到的CP1或CP2的羧基活化溶液中，常溫下避光振 蕩處理3?6小時，經洗滌、乾燥，得到羧基化的螢光微球APGMA-CP1或APGMA-CP2。
2. 根據權利要求1所述的一種羧基化的螢光微球的製備方法，其特徵在於：步驟（2)中 製備CP1溶液的方法為：將CP1溶於pH 5?6的混合溶劑中；所述的混合溶劑包括四氫呋 喃和緩衝溶液，所述緩衝溶液為摩爾濃度〇. 01?1M的無機鉀鹽或無機鈉鹽的水溶液。
3. 根據權利要求1所述的一種羧基化的螢光微球的製備方法，其特徵在於：步驟（2)中 製備CP2溶液的方法為：將CP2溶於pH 5?6的緩衝溶液中，所述緩衝溶液為摩爾濃度 0. 01?1M的無機鉀鹽或無機鈉鹽的水溶液。
4. 根據權利要求2或3所述的一種羧基化的螢光微球的製備方法，其特徵在於：所述 的無機鈉鹽為 Na2HP04、NaH2P04、NaCl、Na2S04、NaHS0 4、NaHS03、Na2S03、Na2C0 3、NaHC03、Na2B407 中的一種，或它們的任意組合。
5. 根據權利要求2或3所述的一種羧基化的突光微球的製備方法，其特徵在於：所述 的無機鉀鹽為 K2HP04、KH2P04、KC1、K 2S04、KHS04、K2C03、khco 3、KHS03、K2S03 中的一種，或它們 的任意組合。
6. 按權利要求1所述的製備方法得到的羧基化的螢光微球。
7. -種如權利要求6所述的羧基化的突光微球的應用，其特徵在於：將突光微球與生 物分子進行共價結合，用於生物分子的檢測。
【文檔編號】C08G81/02GK104119540SQ201410327407
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月10日 優先權日:2014年7月10日
【發明者】範麗娟, 許海波 申請人:蘇州大學