化學發光液,增強化學發光的試劑和方法

2023-10-09 07:04:09 1

專利名稱：化學發光液,增強化學發光的試劑和方法
技術領域：
本發明涉及化學發光免疫分析。更具體地講，本發明涉及含有增強劑的化學發光液，製備方法及試劑盒；增強1，2-二氧雜環丁烷化合物化學發光作用的試劑和方法，製備方法及試劑盒。
背景技術：
化學發光免疫分析是世界範圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析技術，是繼酶免技術、放免技術、螢光免疫技術之後發展起來的一種超高靈敏度的微量檢測技術。它具有靈敏度高、檢測範圍寬、操作簡便快速、標記物穩定性好、無汙染等優點，是目前免疫定量分析最理想的方法。在化學發光免疫分析中，常用發光物質包括魯米諾、異魯米諾、吖啶酯、1，2_ 二氧雜環丁烷化合物(l，2-di0Xetane compound)。其中異魯米諾和吖啶酯作為示蹤分子直接標記，屬於閃光型化學發光反應。魯米諾和1，2-二氧雜環丁烷化合物依靠酶作為示蹤分子標記，屬於酶促輝光型化學發光反應。1，2-二氧雜環丁烷化合物是最新的超靈敏的鹼性磷酸酶底物，在適宜的緩衝液中，隨著鹼性磷酸酶的催化水解作用，1，2- 二氧雜環丁烷化合物分解發出強度很高的光信號，信號可持續20個小時以上，是理想的化學發光物質。國外生產廠家研製出以鹼性磷酸酶為標記物，1,2- 二氧雜環丁烷化合物為底物的試劑盒，與之相匹配的有DPC、Beckman, BioMerieux, Olympus全自動化學發光系統。1,2- 二氧雜環丁烷化合物中的CSPD，CDP，CDP-Mar，BZPD及其發光液，多數為國外公司Tropix，Lumigen等的專利產品，價格昂貴，大大限制了該項技術在國內的應用。國內能夠提供的1，2_ 二氧雜環丁烷化合物——3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷醯氧基)苯-1，2-二氧雜環丁烷(AMPPD)，其發光信號強度大大弱於上述國外產品。AMPPD的分子結構中存在一個-0-0-鍵很弱的四元雜環和一個磷酸根基團。磷酸根基團維持著整個分子結構的穩定。在通常情況下，這種化合物很穩定，5°C下保存的固體 AMPPD幾乎不分解。當有鹼性磷酸酶催化作用時，AMPPD發生磷酸根基團水解，形成一個不穩定的中間體。這個中間體隨即自行分解，-0-0-四元環釋放出大量能量，激發化學發光反應，發射光子。1989年，Schaap報導了利用十六烷基三甲基溴化銨和5_(N_十四醯)_氨基螢光素對1，2-二氧雜環丁烷化合物進行化學發光增強的技術(Clin. Chem.，35)。在美國專利 US4959182和US5004565及中國專利CN89106M9. 1中，Schaap描述了在十六燒基三甲基溴化銨形成的膠束條件下，1,2- 二氧雜環丁烷化合物進行化學和酶觸發而導致的化學發光增強。美國專利US5145772公開了聚乙烯苄基二甲基苄基氯化銨(BDMQ)、血清白蛋白等大分子物質對1，2-二氧雜環丁烷化合物的發光增強效應。美國專利US5M7836公開了聚乙烯苄基三甲基氯化銨(TMQ)及聚乙烯苄基三丁基氯化銨(TBQ)可作為1，2-二氧雜環丁烷化合物的發光增強劑。
美國專利US5393469公開了聚合季膦鹽對酶催化1，2_ 二氧雜環丁烷化合物所產生的發光增強作用。美國專利US5650099及中國專利CN1208399A公開了依靠雙陽離子表面活性劑——三辛膦甲基-4-三丁基膦甲基苯二氯化物和螢光物——螢光素、羥基芘磺酸對1， 2-二氧雜環丁烷化合物的發光增強效應。中國專利CN1719254A公開了一種以CSPD為底物，氯化十六烷三甲基銨、肉蔻醯甘油磷酸二鈉、牛血清白蛋白、十八烷氨基螢光素為增強劑的化學發光液。上述專利中公開的1，2_ 二氧雜環丁烷化合物的發光增強劑所使用的聚合物和長鏈烷基螢光物，價格昂貴，不易購買。因此，本領域需要開發更經濟的化學發光液和增強1，2-二氧雜環丁烷化合物發光作用的試劑和方法。

發明內容
本發明一方面提供了-少一種具有通式I結構的烷基:
權利要求
1. 一種化學發光液，含有1，2_ 二氧雜環丁烷化合物，其特徵在於 所述化學發光液還包括至少一種具有通式I結構的烷基二甲基苄基季銨鹽， Γ(
2.根據權利要求1所述的化學發光液，其特徵在於所述烷基二甲基苄基季銨鹽選自十二烷基二甲基苄基氯化銨、十四烷基二甲基苄基氯化銨、十六烷基二甲基苄基氯化銨、 十八烷基二甲基苄基氯化銨、十二烷基二甲基苄基溴化銨、十四烷基二甲基苄基溴化銨、 十六烷基二甲基苄基溴化銨、十八烷基二甲基苄基溴化銨及其組合。
3.根據權利要求1或2所述的化學發光液，其特徵在於所述烷基二甲基苄基季銨鹽的濃度為0. lg/L 10g/L，優選lg/L 10g/L。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的化學發光液，其特徵在於所述化學發光液還包括螢光劑。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的化學發光液，其特徵在於所述化學發光液還含有2-氨基-2-甲基-1-丙醇或鎂離子或兩者。
6.一種化學發光液的製備方法，其特徵在於將權利要求1-5中任一種化學發光液的組分溶解在水中。
7.一種化學發光試劑盒，其特徵在於所述試劑盒中包括權利要求1-5所述的任一種化學發光液，所述發光液中的組分任選單獨包裝或混合包裝。
8.一種增強1，2_ 二氧雜環丁烷化合物發光作用的試劑，其特徵在於所述試劑含有至少一種具有通式I結構的烷基二甲基苄基季銨鹽，Y為苯環上的取代基，選自H、滷素、羥基、巰基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、滷代烷基、氨基、烷基氨基或醯胺基。
9.根據權利要求8所述的試劑，其特徵在於所述烷基二甲基苄基季銨鹽選自十二烷基二甲基苄基氯化銨、十四烷基二甲基苄基氯化銨、十六烷基二甲基苄基氯化銨、十八烷基二甲基苄基氯化銨、十二烷基二甲基苄基溴化銨、十四烷基二甲基苄基溴化銨、十六烷基二甲基苄基溴化銨、十八烷基二甲基苄基溴化銨及其組合。
10.根據權利要求8或9所述的試劑，其特徵在於所述烷基二甲基苄基季銨鹽的濃度為 0. lg/L 10g/L，優選 lg/L 10g/L。
11.根據權利要求8-10任一項所述的試劑，其特徵在於所述試劑還含有螢光劑。
12.根據權利要求8-11任一項所述的試劑，其特徵在於所述試劑還含有2-氨基-2-甲基-1-丙醇或鎂離子或兩者。
13.一種增強1，2_ 二氧雜環丁烷化合物發光作用的試劑的製備方法，其特徵在於將權利要求8-12所述任一種試劑的組分溶解在水中。
14.一種增強1，2_ 二氧雜環丁烷化合物化學發光作用的試劑盒，其特徵在於所述試劑盒包括權利要求8-12所述任一種試劑，所述試劑組分任選單獨包裝或混合包裝。
15.一種增強1，2-二氧雜環丁烷化合物化學發光作用的方法，其特徵在於包括在含 1，2-二氧雜環丁烷化合物溶液中添加權利要求8-12所述的任一種試劑或權利要求14所述的試劑盒。
16.具有通式I結構的烷基二甲基苄基季銨鹽在製備化學發光液中的應用，
全文摘要
本發明公開了一種以1，2-二氧雜環丁烷化合物為底物的化學發光液，含有1，2-二氧雜環丁烷化合物和式I的烷基二甲基苄基類季銨鹽。本發明還公開了一種增強1，2-二氧雜環丁烷化合物化學發光作用的試劑和方法，試劑中含有式I的烷基二甲基苄基類季銨鹽。
文檔編號G01N33/53GK102311730SQ20101021577
公開日2012年1月11日 申請日期2010年6月30日 優先權日2010年6月30日
發明者張裕平, 錢純亙 申請人:深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司