30個陸地棉主栽品種的dna指紋圖譜的製作方法

2023-10-09 17:24:39 2

專利名稱：30個陸地棉主栽品種的dna指紋圖譜的製作方法
技術領域：
本發明屬於農業生物技術領域，尤其是利用分子標記技術對品種進行DNA指紋圖 譜構建，實現了品種鑑別的簡便、快速、準確。
背景技術：
當前我國農作物種子純度低劣狀況普遍存在，各級農作物品種市定機構和種子生 產部門對品種純度鑑定日益重視，因此，採用高效、快速、準確的檢測方法進行品種鑑定和 純度檢測是十分必要的。上世紀八十年代興起的基於DNA變異的各種分子標記技術，帶動 了 DNA指紋圖譜技術的快速發展。這種電泳圖譜所揭示的多態性直接反序基因組DNA間的 差異，不受環境影響，數量多、準確性高，具有高度的個體特異性和環境穩定性，被稱為「DNA 指紋圖譜」，利用分子標記技術構建DNA指紋圖譜是鑑別品種或品系的有力工具。目前，利 用各種分子標記技術，許多重要作物如番茄、油菜、水稻、小麥、玉米、大豆等都進行了品種 鑑定和純度檢測的研究，其中，番茄、水稻和小麥等主栽品種的SSR指紋圖譜資料庫已構建 完成。棉花的指紋圖譜構建研究已有一些報導。然而，一些研究由於處於分子標記發展的 早期階段，其用於指紋圖譜構建的供試材料主要局限在較少的目標材料上，而且對本文涉 及的30個棉花主栽品種未見相關報導。由於某一引物擴增到的等位基因數會隨建庫材料 的增加而增加，利用有限試材進行指紋分析會導致引物多態信息量的降低，從而影響目標 材料圖譜的特異性。若在研究中增加了其他背景材料，一些目標材料的特異引物很可能就 不是唯一的了。本研究利用SSR分子標記技術，對在我國不同生態棉區曾經或正在種植的的30個 棉花主栽品種，進行DNA指紋圖譜分析，供試材料的遺傳基礎豐富且數量較多，利用各材料 的特異引物或引物組合，以及20對核心引物的數字指紋代碼，可簡便、快速、準確地鑑別品 種純度及真偽，有效保護品種的智慧財產權和育種家的權益。

發明內容
以我國不同生態棉區曾經或正在種植的主要來源於岱字棉、斯字棉、福字棉、烏幹 達棉的30個陸地棉主栽品種為材料(表1)，從定位在棉花沈條染色體上的2503對SSR引 物(標記)中篩選到重複性好、多態性豐富的20對核心引物。20對核心引物的電泳結果表 明，30個品種中有4個品種具有各自的特異引物，可將其與其它品種區分開，其中，中棉所 64的特異引物有2個分別是NAU4903和DPL0209，遼棉19的特異引物有2個分別是NAU2251 和NAU2092，泗棉4號的特異引物是NAU4903，鑫秋1號的特異引物是NAU1043 (

圖1、圖3)； 其他沈個品種可利用至少2對引物組合與其他品種區分開，如利用引物NAU2092/NAU1043 可將冀棉958與其他品種區分開(圖2、圖幻；為更方便、準確地鑑別各品種，提高其與生產 上其他品種的區分能力，構建了 30個品種20對核心引物的十進位數字指紋代碼(表2)。表130個主栽品種的名稱、系譜來源、生育期類型及審定年份
權利要求
1.30個棉花主栽品種的DNA指紋圖譜，其特徵是30個棉花主栽品種包括中棉所12、 中棉所41、中棉所45、中棉所50、中棉所58、中棉所64、遼棉19、魯棉研19、魯棉研21、魯 棉研22、魯棉研觀、魯棉研四、晉棉四、晉棉36、晉棉45、泗棉3號、泗棉4號、豫棉15、陝 2365、冀棉958、邯棉802、邯鄲885、徐州142、徐州514、鑫秋1號、百棉1號、SGK958、國欣 棉3號、科棉4號、中植棉2號；DNA指紋圖譜指的是基於SSR分子標記的DNA指紋圖譜。
2.根據權利要求1所述的內容，其特徵是基於SSR分子標記的DNA指紋圖譜指的是 30個品種的特異引物指紋圖譜和引物組合指紋圖譜，以及20對核心引物的數字指紋代碼。
3.根據權利要求2所述的內容，其特徵是特異引物指紋圖譜或引物組合指紋圖 譜，必須是本研究獲得的4個品種的特異引物和沈個品種的引物組合。具體如下中棉 所64的特異引物為NAU4903和DPL0209 ；遼棉19的特異引物為NAU2251和NAU2092 ；泗 棉4號的特異引物為NAU4903 ；鑫秋1號的特異引物為NAU1043 ；中棉所12的引物組合 為NAU1255/NAU2251 ；中棉所41的引物組合為NAU1043/NAU5104 ；中棉所45的引物組合 為NAU0905/NA似627 ；中棉所50的引物組合為NAU1085/NAU3110 ；中棉所58的引物組合 為NAU1043/NAU1085 ；魯棉研19的引物組合為NAU1255/NAU5262 ；魯棉研21的引物組合 為NAU0905/NAU2092 ；魯棉研22的引物組合為NAU1043/NAU2121 ；魯棉研28的引物組合 為NAU3110/NAU40M/NAU5104 ；魯棉研四的引物組合為NAU1(^8/NAU5104 ；晉棉29的引 物組合為NAU0905/NAU1085 ；晉棉36的引物組合為NAU2251/NAU3839 ；晉棉45的引物組 合為NAU2251/NAU5262/NAU2092 ；泗棉3號的引物組合為DPL0209/NAU1085 ；豫棉15的引 物組合為NAU1043/NA似627 ；陝2365的引物組合為NA似869/NAU5104 ；冀棉958的引物組 合為NAU2092/NAU1043 ；邯棉802的引物組合為DPL0209/NAU1028 ；邯鄲885的引物組合 為 NAU2092/NAU40M ；徐州 142 的引物組合為 NAU2092/NAU40M/NAU1043 ；徐州 514 的引物 組合為NAU1085/NAU3703 ；百棉1號的引物組合為NAU1028/NAU5104 ；SGK958的引物組合 為NAU1085/NA似627 ；國欣棉3號的引物組合為DPL0209/NAU1255 ；科棉4號的引物組合為 NAU2092/NAU2627 ；中植棉 2 號的引物組合為 NAU3110/NAU3703。
4.根據權利要求2所述的內容，其特徵是20對核心引物的數字指紋代碼，必須是本研 究獲得的 20 對核心引物，分別為 NAU1(^8、NAU3703、NAU5104、NAU0905、NA^627、NAU1255、 NAU2092、、NAU3337、NAU4024、NAU5262、NAU3110、NAU2251、NAU1043, DPL0209、NAU1085、 NAU3254、NAU2869、NAU3839、NAU4903和NAU2121 ；數字指紋代碼是這些引物的十進位或相 應的二進位數字指紋代碼。
5.根據權利要求4所述的內容，其特徵是30個品種的20對核心引物十進位數字代碼 分別見下表，其相應的二進位數字指紋代碼與其信息一一對應，本發明不做贅述。品種NAUK^S-NALBVCn-NAUSltM-NAUOWS-NAUieST-NAUUM-MALKOW-NAUSS—W-NAlWf^tNAUSM〗-NAU3110-N A( 1225 丨-NAU 丨 043-DPL0209-NAU 丨 085-NAU3254-NAU2869-NAU3839-NAU4903-NAlj2l21 中棉所 12 4-4-2-10-12-10-02-10-04-25-50-42-24-098-050-005-330-198-166-0810_
全文摘要
本發明屬於農業生物技術領域。當前我國農作物種子純度低劣狀況普遍存在，各級農作物品種審定機構和種子生產部門對品種純度鑑定日益重視。本研究利用SSR分子標記技術，構建在我國不同生態棉區曾經或正在種植的30個陸地棉主栽品種的DNA指紋圖譜。20對重複性好、多態性豐富的SSR核心引物電泳結果表明，30個品種中有4個品種具有各自的特異引物，可將其與其他品種區分開；其26個品種可利用至少2對引物組合與其他品種區分開。為更方便、準確地鑑定各品種，構建了30個品種20對核心引物的數字指紋代碼。本發明為30個陸地棉主栽品種的真偽鑑定、育種利用和新品種權益保護提供了理論依據，為我國育成棉花品種標準指紋庫的構建奠定了重要基礎。
文檔編號C12Q1/68GK102146448SQ20111000593
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月13日 優先權日2011年1月13日
發明者付遠志, 張志勇, 張金寶, 李成奇, 王清連, 胡根海 申請人:河南科技學院