用於合成生長抑素的主要肽片段的製作方法

2023-10-17 06:50:09 4

專利名稱：用於合成生長抑素的主要肽片段的製作方法
技術領域：
本發明提供一種短肽(肽片段)，具體地說，提供一種用於合成生長抑素的主要肽片段Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -0H,以及該主要妝片段的合成方法和用途，屬於多肽化合物製備方法技術領域。
背景技術：
多肽的化學合成的任務就是如何把各種胺基酸單位按照 目標多肽的胺基酸排列順序和連接方式連接起來，一般分為固相合成和液相合成。固相合成通常是指連接在固相載體(如樹脂等)上的活性官能團與溶解在有機溶劑中的試劑之間的反應，多肽的固相合成法是一種將肽鏈一端結合於固相載體上的方法，通過在N—末端逐步加上胺基酸的方法合成肽段，使肽鏈延長。液相合成法基於將單個N-α保護胺基酸反覆加到生長的氨基成份上，合成在溶液相中一步步地進行，通常從合成鏈的C端胺基酸開始，接著的單個胺基酸的連接通過指定的偶聯縮合方法實現。生長抑素是人下丘腦分泌的天然含14胺基酸的環肽物質，在體內起重要的生理調節作用，人工合成的生長抑素已在臨床上有廣泛的使用。生長抑素合成可採用液相和固相二種方法完成，製備重要片段肽是生長抑素化學合成的關鍵工作。一般情況，無論固相還是液相合成，均採用按照目標多肽胺基酸順序逐步縮合延長肽鏈的方法來合成目標產物。如果將目標多肽中的部分胺基酸序列製成保護短肽片段，用於合成目標多肽，可以減少接入次數，提高收率，降低成本。Ala-Gly-Cys-Lys是多肽藥物生長抑素胺基酸序列的I 4號序列片段，將其製成保護肽中間體用於生長抑素的合成，可以減少逐步縮合延長次數，一次縮合就能完成需要經過4次逐步縮合才能完成的肽鏈延長。CN200910131201. 4公開了一種十四肽生長抑素的製備方法，並公開了合成生長抑素的中間體短肽片段 Boc-Ala-Gly-Cys (Fmoc)-Lys (Boc)-Asn-OH ；CN200910142420. 2 公開了一種生長抑素的液相合成方法，並公開了用於生長抑素合成的短肽片段Boc-Ala-Gly-Cys (MeOBzl)-Lys(Z) -0H。專利CN200910131201. 4 中沒有具體描述 Boc-Ala-Gly-Cys (Fmoc) -Lys (Boc) -Asn-OH的製備方法，而且最終反應時使用了氫溴酸，氫溴酸的腐蝕性、揮發性強，不易儲存。專利 CN200910142420. 2 中具體描述了短肽片段 Boc-Ala-Gly-Cys (MeOBzl)-Lys (Z)-OH 的製備方法，該方法需低溫反應，所得片段脫除保護基時需使用三氟甲磺酸，三氟甲磺酸具有強腐蝕性、強吸溼性且價格昂貴。氫溴酸、三氟甲磺酸在大量使用時均需特別注意環境和安全問題。

發明內容
本發明的目的是提供一種用於合成生長抑素的主要肽片段，以及該主要肽片段的合成方法和用途。方法簡單易行，便於工業化生產。本發明技術方案如下
本發明提供一種用於合成生長抑素的主要肽片段，其為B0c-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys (Boc)-0H,結構式如下
權利要求
1.一種用於合成生長抑素的主要肽片段，其為
2.權利要求I所述的用於合成生長抑素的主要肽片段的合成方法，其特徵在於包括如下步驟 (1)將Lys(Boc)-OX 或其鹽與 Fmoc-Cys(Trt)-OH 反應得到Fmoc-Cys(Trt)-Lys(Boc)-OX ；(2)將Fmoc-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 脫去 Fmoc 保護基得到 Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX ；(3)將Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 與 Boc-Ala-Gly-OH 反應得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX ;將 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 水解反應得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt)-Lys(Boc)-OH ； 其中，所述的X為低級烷基、取代或者未取代的苯基。
3.根據權利要求2所述的方法，其中X為甲基或者苄基。
4.根據權利要求2或3所述的合成方法，其中所述的步驟⑴是將Lys(Boc)-OX或其鹽溶解在有機溶劑中，與Fmoc-Cys(Trt)-OH在鹼和縮合試劑存在下進行反應得到Fmoc-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX ;優選地，所述的有機溶劑選自二氯甲烷、N，N-二甲基甲醯胺、乙酸乙酯、四氫呋喃、二氧六環中的一種或兩種以上的混合；所述的鹼選自N，N- 二異丙基乙胺(DIEA)、三乙胺、N-甲基嗎啉中的一種或兩種以上的混合；所述的縮合試劑選自N，N-二環己基碳二亞胺(DCC)、2_(7-氮雜-IH-苯並二氮唑-I-基)-1,1,3,3-四甲基服六氟磷酸酯(HATU)、苯並三氮唑-N，N，N』，N』 -四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)、0_苯並三氮唑-N，N，N』，N』 -四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)中的一種或兩種以上的混合。
5.根據權利要求2或3所述的合成方法，其中所述的步驟⑵是將Fmoc-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX溶解在有機溶劑中，在脫帽試劑存在下進行脫帽反應脫去Fmoc保護基得到Cys(Trt)-Lys(B0c)-OX ;優選地，其中所述的有機溶劑選自二氯甲烷、N，N-二甲基甲醯胺、乙酸乙酯、四氫呋喃、二氧六環中的一種或兩種以上的混合；所述的脫帽試劑選自三甲胺、三乙胺中的一種或兩種以上的混合。
6.根據權利要求2或3所述的合成方法，其中所述的步驟(3)是將Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX溶解在有機溶劑中，與Boc-Ala-Gly-OH在鹼和縮合試劑存在下進行反應得到B0c-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(B0c)-OX ;優選地，所述的有機溶劑選自二氯甲烷、N，N-二甲基甲醯胺、乙酸乙酯、四氫呋喃、二氧六環中的一種或兩種以上的混合；所述的喊選自N, N-二異丙基乙胺(DIEA)、二乙胺、N-甲基嗎啉中的一種或兩種以上的混合；所述的縮合試劑選自N，N- 二環己基碳二亞胺(DCC)、2_ (7-氮雜-IH-苯並三氮唑_1_基)-I，.1，3，3_四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、苯並三氮唑-N，N, N』，N』 -四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)、O-苯並三氮唑-N，N，N』，N』 -四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)中的一種或兩種以上的混合。
7.根據權利要求6所述的合成方法，其中將生成的Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OX 水解反應得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OH
8.根據權利要求7所述的合成方法，其中還包括將生成的Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OH 進行結晶得到 Boc-Ala-Gly-Cys (Trt) -Lys (Boc) -OH晶體的步驟；優選地，其中所述的結晶控制pH範圍3 5，溫度範圍O 20°C，溶劑選自甲醇、乙醇中的一種或兩種的混合。
9.根據權利要求2—8所述的合成方法，其中所述的Lys (Boc)-OX或其鹽選自Lys (Boc) -OCH3> Lys (Boc) -OCH2C6H5' Lys (Boc) -OCH3 鹽酸鹽或 Lys (Boc) -OCH2C6H5 鹽酸鹽。
10.權利要求I所述的用於合成生長抑素的主要肽片段的用途，其特徵在於用作生長抑素合成中間體，用於合成生長抑素。
全文摘要
本發明涉及一種短肽(肽片段)，具體地說，提供一種用於合成生長抑素的主要肽片段Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-OH，以及該主要肽片段的合成方法和用途。採用上述生長抑素的主要肽片段製備生長抑素可有效提高接肽產率和縮短接肽時間，提高肽純度，並且其可以同時適用於液相或固相二種方法合成生長抑素。本發明還提供保護肽Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-OH的製備方法，該方法反應條件溫和，試劑廉價易得，可避免使用氫化方法或避免使用昂貴及非環境友好的試劑，終產品可通過結晶方式獲得，操作簡便。
文檔編號C07K7/08GK102875643SQ20121040701
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月24日 優先權日2012年10月24日
發明者孫永強, 錢明霞, 蔣偉, 馮曉輝, 屠永銳, 胡亞琴 申請人:常州市第四製藥廠有限公司