一種能促進黃瓜生長和防治黃瓜枯萎病的植物內生菌劑的製作方法

2023-12-02 01:01:31 3

專利名稱：：一種能促進黃瓜生長和防治黃瓜枯萎病的植物內生菌劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis、保藏日期2008年09月04日、保藏單位全稱中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心、保藏單位簡稱CGMCC、保藏編號CGMCCNo.2659)，並製成菌劑。
背景技術：
：黃瓜枯萎病(Fusariumoxysporumf.sp.cucumeri皿m)是黃瓜生產中危害最為嚴重的病害之一，廣泛發生於保護地中。每年因黃瓜枯萎病造成的產量損失10%-30%，嚴重年份高達50%以上。目前防治該病的主要措施是化學防治和嫁接，由於有些生產者長期使用化學農藥，盲目打藥，任意加大農藥使用量，隨意增加農藥使用次數，更有甚者使用高毒、高殘留農藥，導致該病抗藥性增強，農藥殘留加重，危害消費者健康。嫁接雖然可以減少發病率，但勞動強度加大，生產成本增高。植物內生細菌(endophyticbacteria)是指能在健康植物組織內棲居而對植物不造成實質性危害，並與植物建立了和諧聯合關係的微生物。內生細菌在植物體內具有穩定的生存空間，不易受外界環境條件的影響，可在植物體內獨立繁殖和傳遞。它避開了溫度、紫外線、營養貧乏等不利因素的影響，具有相對安全穩定的生存環境、營養來源豐富，因而更利於其發揮生物防治潛能，研究發現部分內生細菌具有促進植物生長或抑制植物病原菌生長達到控制病害的作用。目前內生細菌用於生物防治，已引起國際上廣泛關注。國內外已有關於從棉花、馬鈴薯、水稻、辣椒、菜花、菸草等多種植物體內分離篩選到具有防病作用的內生細菌。枯草芽孢桿菌是很多植物的內生細菌，已有許多種類被廣泛應用於植物病害的生物防治中。利用菸草植株內生枯草芽孢桿菌防治菸草青枯病，田間防效43%_78%。從番茄莖分離的內生枯草芽孢桿菌菌株B47對番茄青枯病的防治效果達79.79X。利用花生內生枯草芽孢桿菌防治花生立枯病和枯萎病效果明顯。從桔梗中分離的內生枯草芽孢桿菌對桔梗立枯病有一定的抑制作用。
發明內容本發明就是針對上述問題，提供一種用於促進黃瓜生長、防治黃瓜枯萎病的植物內生菌劑。本發明採用如下技術方案蛋白腖O.72.0%、酵母浸膏0.31.0%、NaC10.51.0%，其餘為水，配成母液；將母液按裝液量為2555%，發酵溫度2032°C，接種量210%，pH值59;120200r/min振蕩發酵培養24-72小時即可。本發明的有益效果本發明植物內生菌來源於黃瓜植株體內，所以對植物本身及人都是安全的，不會使人和植物產生抗藥性，也不會像一部分農藥那樣有劇毒性，且其生產、加工過程中無毒副作用。本發明的植物內生菌是兼有競爭和拮抗兩種功能，可促進黃瓜生長，預防和治療黃瓜枯萎病有良好的防治效果。在黃瓜枯萎病的防治試驗中，本發明的植物內生菌劑防治效果達到了65.7X，與50X多菌靈WP800倍防效68.6%相當。應用前景廣闊。分類命名枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)微生物(株):B504保藏單位中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所菌種保藏中心郵編100101保藏時間2008年9月4日保藏編號CGMCCNo:2659具體實施例方式菌種製備枯草芽孢桿菌B504菌株，由LB培養基活化培養，LB培養基成分酵母浸膏5g、蛋白腖10g、瓊脂15g、NaCl10g、蒸餾水lOOOml，pH值7.2，溫度2831°C。實施例1:植物內生菌劑促進黃瓜胚根和植株生長試驗本發明的植物內生菌劑為蛋白腖1.0%、酵母浸膏0.5%、NaCl0.7%、其餘為水，配成母液，將母液按裝液量為25%，發酵溫度29°C，接種量6%，pH值78;140r/min振蕩發酵培養46小時即成。稀釋1000倍左右，用於催芽。1.植物內生菌劑促進胚根生長情況用3%次氯酸納進行種子消毒15min，清水反覆衝洗，放在乾淨的墊有濾紙的培養皿中，每皿放種子50粒左右，每個處理3皿，每個培養皿中加入菌液15ml左右，然後加入種子。將培養皿放入25t:恆溫培養箱中。播種前(胚根長約9mm左右)時，切下胚根，隨機取IOO粒稱重。結果見表l。表1植物內生菌劑促進胚根生長情況tableseeoriginaldocumentpage42.植物內生菌劑促進植株生長情況將上述試驗剩餘種子播於裝有自然土壤的塑料筐中。30天後測定植株重量，每個處理稱重30株，計算平均株高、植株鮮重、植株根系鮮重結果見表2。表2B504菌株促進植株生長情況tableseeoriginaldocumentpage5從表1、表2的試驗結果看出，本發明的植物內生菌劑具有促進黃瓜種子胚根和植株生長的作用。實施例2:植物內生菌劑防治黃瓜枯萎病試驗本發明的植物內生菌劑為蛋白腖1.0%、酵母浸膏0.5%、NaCl0.7%、其餘為水，配成母液，將母液按裝液量為25%，發酵溫度29°C，接種量6%，pH值78;140r/min振蕩發酵培養46小時即成。將製備的植物內生菌劑進行黃瓜枯萎病試驗。從表3的試驗結果看出，本發明的植物內生菌劑對黃瓜枯萎病有較好的防治效果。其中本發明的植物內生菌劑1000倍防治效果好，達到65.7%，與50X多菌靈WP防效68.6%相當。表3植物內生菌劑防治黃瓜枯萎病效果分析處理濃度調査總數發病率(％)防效(％)tableseeoriginaldocumentpage5權利要求一種能促進黃瓜生長和防治黃瓜枯萎病的植物內生菌劑，其特徵在於將蛋白腖0.7～2.0％、酵母浸膏0.3～1.0％、NaCl0.5～1.0％，其餘為水，配成母液；將母液按裝液量為25～55％，發酵溫度20～32℃，接種量2～10％，pH值5～9；120～200r/min振蕩發酵培養24-72小時即可。2.根據權利要求1所述的一種能促進黃瓜生長和防治黃瓜枯萎病的植物內生菌劑，其特徵在於將蛋白腖1.0%、酵母浸膏0.5%、NaCl0.7%，其餘為水，配成母液；將母液按裝液量為25%，發酵溫度29t:，接種量6%，pH值78，140r/min振蕩發酵培養46小時即成。全文摘要一種能促進黃瓜生長和防治黃瓜枯萎病的植物內生菌劑是涉及一種枯草芽孢桿菌，並製成菌劑。本發明提供一種用於促進黃瓜生長、防治黃瓜枯萎病的菌劑。本發明採用如下技術方案蛋白腖0.7～2.0％、酵母浸膏0.3～1.0％、NaCl0.5～1.0％，其餘為水，配成母液；將母液按裝液量為25～55％，發酵溫度20～32℃，接種量2～10％，pH值5～9；120～200r/min振蕩發酵培養24-72小時即可。文檔編號C12N1/20GK101766189SQ200810230338公開日2010年7月7日申請日期2008年12月29日優先權日2008年12月29日發明者劉長遠,呂國忠,孫柏欣,梁春浩,王輝,苗則彥,趙奎華,陳彥,黃玉茜申請人:遼寧省農業科學院植物保護研究所