聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物及其製備方法

2023-12-03 09:46:06

專利名稱：：聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物及其製備方法
技術領域：
：本發明屬於藥物化學領域，具體涉及一種PEG修飾的前藥及其製備方法和應用。
背景技術：
：燈盞花乙素(Scutellarin),即4',5,6_三羥基黃酮-7-葡糖醛酸苷，具有清除活性氧，擴張血管、增加心臟冠脈流量、增加腦血流量、降低腦血管阻力、提高血腦屏障通透性以及對抗血小板凝集等作用，故可用於心腦血管疾病，如腦梗塞、中風後偏癱，冠心病心絞痛等，療效較好。而且應用於臨床20餘年來，沒有發現其嚴重的副作用。其現有製劑有普通片劑、注射劑和注射用粉針。雖然燈盞花乙素具有重大的應用價值和經濟效益，但是它的廣泛應用存在著明顯的缺點燈盞花乙素的水中溶解度低(0.056mg/ml)，半衰期較短(3-4分鐘)，口服生物利用度差(0.4%)，同時，活性也有待進一步提高。利用化學方法修飾燈盞花乙素，克服其缺點並提高其活性是一個期待解決的問題。前藥的設計可有效地解決某些藥物的水溶性和穩定性問題，增加藥物的血液存留時間，改變藥物體內分布，提高生物利用度和降低毒副作用。近年來，高分子前藥更是引起了研究者極大的關注。聚乙二醇以其良好的水溶性、無毒、良好的生物相容性和無免疫原性等其他高分子無法比擬的優點，在前藥的合成和製備中佔有重要地位。當將聚乙二醇分子偶聯到藥物分子時，由於引入了親水基團，可改善它們在水溶液中的溶解性；由於PEG分子很長，在其修飾的藥物周圍產生空間屏障，可減少藥物的酶解提高半衰期；同時也可避免在腎臟的代謝中很快消除提高生物利用度。CN101095955、CN101095956分別採用聚天冬氨酸衍生物和羧甲基殼聚糖作為原料合成了一系列燈盞花乙素前藥，得到的燈盞花乙素前藥的溶解度在25。C水中的溶解度分別為6385mg/ml、2345mg/ml，對溶解度的改善程度較小。四川大學周慶頌等(中國藥學雜誌，2006，41(5),375)用聚乙二醇(PEG)對燈盞花乙素的羧基進行了修飾，得到不同分子量的燈盞花乙素PEG酯，並進行了藥代動力學研究。得到的燈盞花乙素PEG酯在25。C水中的溶解度為18.7mg/ml，溶解度改善程度較小，而且合成過程中使用的PEG的量為燈盞花乙素的100倍，分離非常困難，同時，沒有進行藥效研究。中國藥科大學張燦等(中國天然藥物，2006，4(4)，283)報導了'j:丁盞花乙素酚羥基用2000分子量的mPEG-SS修飾的化合物，其中燈盞花乙素羧基沒有保護。作者提供的NMR譜上看不到燈盞花乙素的信號，琥珀酸的亞甲基信號也不清楚；質譜信號非常複雜，沒有明確的單一產物質譜圖。因此，產物是否已經合成尚有疑問。雖然作者測定了修飾後產物的溶解度(800mg/mL)，但作者沒有進行進一步的藥代動力學和藥效學研究。因此，對燈盞花乙素的羧基和酚羥基進行系統修飾，開發出水溶性好，藥效高的藥物仍然是一個沒有解決的問題。本發明的目的在於提供聚乙二醇修飾的燈盞花乙素前藥及其製備方法，改善燈盞花乙素的水溶性，增強其生物活性。本發明的目的可以通過以下措施達到一種聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，如式(IV)所示，
發明內容X為O或NH;R,為的烷基或優選為Cl6的烷基或R2為H或0R3或R4分別為C14的烷基;當R,為C110的垸基時R2不為H;n為6200，優選為6150，進一步優選670，換一種說法，即聚乙二醇修飾起始物聚乙二醇(PEG)的分子量範圍為400~10000，優選400~8200，進一步優選400-4000。本發明的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，進一步優選如下式(I)、式(II)或式(III)化合物，燈盞花乙素的羧基與聚乙二醇單甲醚反應成的燈盞花乙素-聚乙二醇單甲醚-6"-酯formulaseeoriginaldocumentpage7(I)燈盞花乙素的羧基與甲氧基聚乙二醇胺反應成的燈盞花乙素-聚乙二醇(400)單甲醚-6"-醯胺formulaseeoriginaldocumentpage7(II)燈盞花乙素垸基酯的酚羥基與聚乙二醇單甲醚琥珀酸單酯反應生成的燈盞花乙素-聚乙二醇單甲醚琥珀酸單酯-4'-酉旨formulaseeoriginaldocumentpage7(III)在式i、n和ni中，各基團進一步優選為R,為C14的烷基，最優選為甲基；R3或R4分別為C14的烷基，最優選為甲基；n為6150，最優選為670。本發明的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，以燈盞花乙素為主要原料，先將燈盞花乙素的羧基與聚乙二醇單烷醚反應成的酯類燈盞花乙素，或者將燈盞花乙素的羧基與烷氧基聚乙二醇胺反應成醯胺類燈盞花乙素，或者將燈盞花乙素的羧基與烷基醇反應生成烷基酯類燈盞花乙素；對於燈盞花乙素的酚羥基，可以在前面已製備的化合物的基礎上，或者直接在燈盞花乙素的基礎上，將酚羥基與聚乙二醇單烷醚琥珀酸單酯反應生成酯類燈盞花乙素，幾類典型化合物的製備方法如下A、將聚乙二醇單烷醚與燈盞花乙素在偶聯體系和溶劑中反應，反應式為或者B、將烷氧基聚乙二醇胺與燈盞花乙素在偶聯體系和溶劑中反應，反應式為:OH或者c、將燈盞花乙素脂化後與聚乙二醇單烷醚琥珀酸單酯在偶聯體系和溶劑中反應，反應式為OH0其中偶聯體系為HOBt和DCC、DMAP禾口DCC、DMAP禾卩EDC、DMAP和DIPC、HOBt禾tlEDC、或HOBt和DIPC，最佳偶聯體系為HOBt和DCC。溶劑為吡啶、DMF或DMSO,最佳溶劑為DMF。燈盞花乙素或其酯與聚乙二醇類化合物反應時的溫度為10100'C，最佳溫度為40-60°C;反應時間為248小時，最佳反應時間為5-10小時。上述各方法得到的粗產品可以採用矽膠柱色譜分離，如使用CH2Cl2:CH3OH:HCOOH=10:1:0.1的洗脫劑分離提純等。以下以化合物I、II、III(其中R,、&和R4均為甲基)為例進一步說明各化合物的製備方法。(1)化合物I的製備方法將聚乙二醇單甲醚(mPEG)與燈盞花乙素，在HOBt/DCC偶聯體系和DMF溶劑中反應，製得化合物I，不同分子量mPEG與燈盞花乙素反應所得化合物以I-PEG分子量命名，如I-PEG400代表以400分子量的mPEG修飾得到的I類化合物。OH(2)化合物II的製備方法A、鄰苯二甲醯亞胺鉀鹽的製備將氫氧化鉀的甲醇溶液滴加到鄰苯二甲醯亞胺的乙醇溶液中，滴加完畢後反應4小時。B、單甲氧基聚乙二醇對甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的製備將mPEG加適量溶劑溶解，與對甲苯磺醯氯反應製備。C、甲氧基聚乙二醇胺(mPEG-NH2)的製備將上述步驟B製得的mPEG-OTs溶於適當的溶劑中，和步驟A製備的鄰苯二甲醯亞胺鉀鹽，在氮氣保護下，120。C下反應4小時。然後將反應所得聚合物與水合肼回流反應4小時，得到端基為胺基的聚乙二醇單甲醚。D、藥物分子的引入將步驟C製得的mPEG-NH2與燈盞花乙素，在溶劑和偶聯體系下，加熱至40。C反應10小時，製得化合物II，不同分子量PEG與燈盞花乙素反mimit合物以I1-PEG分子量命名，如如II-PEG400代表以400分子量的mPEG修飾得到的II類化合物。在本發明的實施實例中，選取1-羥基苯並三唑(HOBt)和N,N-二環己基碳二亞胺(DCC)作為偶聯體系，乾燥的DMF作為溶劑。上述製備方法的合成路線如下所示(3)化合物m的製備方法A、聚乙二醇單甲醚琥珀酸單酯(ss-PEG)的合成將乾燥的mPEG溶於氯仿中，加入琥珀酸酐和吡啶，加熱回流反應48h製得。B、燈盞花乙素甲酯的合成甲醇的鹽酸溶液的製備在冰鹽浴下，將SOCl2滴加到乾燥的甲醇中製得。在冰鹽浴下將甲醇的鹽酸溶液滴加到燈盞花乙素的DMF溶液中，升溫至40。C反應製得燈盞花乙素甲酯。其它的酯可用同樣方法製得。C、藥物分子的引入將步驟B製得的燈盞花乙素甲酯與步驟A製得的ss-PEG，在一定的偶聯體系下反應製得化合物(III),不同分子量PEG與燈盞花乙素反應所得化合物以III-PEG分子量命名，如111-PEG400代表以400分子量的mPEG修飾得到的III類化合物。在本發明的實施實例中，選取l-羥基苯並三唑(HOBt)和N,N-二環己基碳二亞胺(DCC)作為偶聯體系，乾燥的DMF作為溶劑。上述製備方法的合成路線如下所示本發明的化合物能夠明顯改善燈盞花乙素的水溶性，增強其生物活性，可以應用於製備治療腦血栓、腦梗塞、腦中風、腦中風所致後遺症、冠心病或心絞痛藥物。溶解度及藥藥實驗溶解度測試(1)UV吸收波長的選擇化合物(I)、(n)和(in)測定波長為335nm。(2)標準曲線的製備配置各化合物的一系列標準溶液，用紫外分光光度計在335nm處測定吸光度，將吸收度與對照品溶液濃度進行線性回歸，得各化合物的標準曲線方程。(3)化合物溶解度測定配置各化合物的過飽和溶液，用紫外分光光度法測定吸收度，由標準曲線計算各化合物在水中的溶解度。藥效實驗採用頸內動脈線栓法製備大腦中動脈阻塞(Middlecerebralartery,MCA0)腦缺血再灌注模型，造成腦缺血。於腦缺血後立即給藥1次，以後每2小時給藥一次，共給藥3次。腦缺血後48小時觀察神經缺陷症狀，活殺動物取腦，測定腦梗死面積，確定PEG修飾的燈盞花乙素系列物的藥效學活性。1、受試藥物陽性對照藥尼莫地平，注射液，規格10mg/50ml，為市售注射液，25'C以下保存，由於用5%葡萄糖溶液稀釋後有析出，固採用原液注射。對照藥燈盞花乙素，黃色粉末，4匸保存，臨用前用滅菌的5%葡萄糖溶液(含0.2%NaHC03)配置成所需濃度。PEG修飾物，4'C保存，臨用前用滅菌的5%葡萄糖溶液配置成所需濃度。2、試驗動物Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，體重250—300g，SPF級，由浙江省實驗動物中心提供，許可證號SCXK(浙)2003—0001。IVC獨立送風隔離籠具(SPF級，蘇州市馮氏實驗動物設備有限公司產品)飼養，溫度22—25'C，溼度70±10%，每籠飼養3隻，使用SPF級專用大鼠顆粒飼料，由南京安立默科技有限公司提供，SPF級消毒墊料，由南京安立默科技有限公司提供。6:00AM-18:00PM12小時明暗周期，自由進食水。所有接觸動物的操作器械和材料均經紫外消毒滅菌，實驗動物操作人員經專門培訓，有實驗動物使用上崗合格證，試驗用液體的配製在醫用淨化工作檯中進行。動物抵達實驗室後，適應性飼養一周後開始試驗。動物活殺或處死均在麻醉條件下進行。3、給藥途徑及方法尾靜脈注射給藥，注射體積為4.0ml/kg體重(尼莫地平除外，為2.0ml/kg體重)。將大鼠固定在大鼠尾靜脈注射固定器中，用酒精棉球輕擦尾尖部，使血管擴張，待皮膚表面酒精揮發乾淨後用一次性注射器快速注射受試藥物，拔出注射器後，用消毒棉球壓迫注射點防止出血，2—3分鐘後，將動物取出，放回飼養籠中。4、劑量組設置根據前期燈盞花乙素量效關係研究結果，以燈盞花乙素60mg/kg作為藥效篩選劑量，陽性對照藥選用尼莫地平注射液，文獻報導大鼠的有效劑量為1.2mg/kg。為確保在同等有效劑量下進行比較，不同聚合度PEG修飾的燈盞花乙素，採用與對照藥燈盞花乙素給藥劑量相同摩爾數給藥。5、對照組設置模型組給大鼠尾靜脈注射等體積的5%葡萄糖溶液溶液。假手術組:給大鼠尾靜脈注射等體積的5%葡萄糖溶液溶液。除特別強調外，假手術組的所有處理與其餘各組相同。陽性對照組莫地平注射液作為陽性對照,採用文獻報導的劑量1.2mg/kg,共給藥三;次,單次給藥劑量為0.4mg/kg。燈盞花乙素對照組根據前期燈盞花乙素量效關係研究結果，以燈盞花乙素60mg/kg作為藥效篩選劑量,共給藥三次，單次給藥劑量為20mg/kg。6、試驗程序設計按照上述劑量組設置原則，設模型組、假手術組、陽性對照尼莫地平、對照燈盞花乙素組、7個PEG修飾燈盞花乙素組,共11組，每組12隻動物。在手術過程中，凡麻醉、手術等出現異常情況的動物均被剔除。製備腦缺血模型後，將動物按機率均等單盲分配至各組。於腦缺血後立即給藥1次，以後每2小時給藥一次，共給藥3次，於腦缺血後48小時評價神經缺陷症狀，而後處死動物，取腦，染色，拍照測定腦梗死面積。在整個試驗過程中，每12小時進行1次一般情況觀察，主要內容包括死亡、昏迷、呼吸、大小便性狀、毛色、精神狀況、嘔吐及嘔吐物、出血、驚厥、抽搐等。試驗程序如下動物適應性飼養~>腦缺血模型機率均等單盲分組-+藥物治療—神經缺陷症狀評分腦梗死面積測定、死亡率的統計一般情況記錄7、腦缺血模型的製備採用頸內動脈線栓法製備大腦中動脈阻塞(Middlecerebralartery,MCA0)腦缺血再灌注模型-。動物用10%水合三氯乙醛(3.5ml/kg)麻醉後，俯臥位固定於手術臺上，消毒皮膚，頸部正中切開，分離右側頸總動脈、頸外動脈、頸內動脈，輕輕剝離迷走神經，結紮並剪斷頸外動脈，循頸內動脈向前，結紮翼顎動脈。夾閉頸總動脈近心端，從頸外動脈的結紮線的遠端作一切口，插入外徑為0.285mm的尼龍線，進過頸總動脈分叉進入頸內動脈，然後徐徐插入至有輕微阻力為止(自分叉處約20mm)，阻斷大腦中動脈的所有血供，用雷射都卜勒腦血流儀監測腦血流，右側腦缺血1.5h後，輕輕拔出尼龍線，恢復血供進行再灌注，縫合頭皮，消毒。假手術組僅分離血管，不插入尼龍線。整個手術使用大鼠加熱板和60W的檯燈維持大鼠的體溫37.0士0.5'C。8、神經缺陷症狀評價採用改良Bederson5分製法進行神經缺陷症狀評價。採用單盲法評價腦外傷後大鼠的神經缺陷症狀，即由試驗設計者將動物按組標記，對神經缺陷症狀進行評分的試驗者不知道動物的分組情況，評分結束後，評分者將各種標記的評分結果呈交設計者，由設計者揭盲，獲得各試驗組每隻動物的評分。神經缺陷症狀評分Bederson5分製法0:提尾懸空時，動物的兩前肢均伸向地板方向，且無其他行為缺陷1:提尾懸空時，動物的手術對(左)側前肢表現為腕肘屈曲、肩內旋、肘外展、緊貼胸壁2:將動物置於光滑平板上，推手術側肩向對側移動時阻力降低3:動物自由行走時，向手術對側環行或轉圈4:肢體軟癱，肢體無自發活動9、腦梗死面積的測定動物用10%的水合氯醛麻醉，斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦幹，用生理鹽水衝洗大腦表面血跡，吸去表面殘留水跡，於一8(TC放置7min，取出後立即於視線交叉平面垂直向下作冠狀切面，並向後每隔2mm切一片，將腦片置於用0.2mol/LpH7.47.8PBS新鮮配製的20g/LTTC染液中水浴(37'C90min)，正常腦組織染成深紅色，缺血腦組織則呈蒼白色，用生理鹽水衝洗後，迅速將腦片從前向後按順序排成一排，吸乾表面殘留水跡，拍照。用圖像分析軟體對照片進行統計，圈定右側缺血面積(白色區域)和右側總面積，用如下公式計算腦梗死面積的百分比。梗死面積％=iooxl^fll右側總面積io、統計學分析定量資料表示為均值士標準差。腦梗死面積、神經缺陷症狀評分採用單因素方差分析，Scheffe's檢驗測定兩組間的差異顯著性。動物死亡率的組間比較採用X2檢驗，將差異P〈0.05定義為差異顯著。各結果分別見表l，表2和表3。具體實施例方式實施例1:燈盞花乙素-聚乙二醇(400傳甲醚-6，，-酯(化合物I-400)的合成將燈盞花乙素9.24g，mPEG(400)12g，HOBt4.05g,DCC6.18g(摩爾比h1.5:1.5:1.5)加入到80mL的DMF中溶解，通氮氣保護反應體系，加熱至40。C反應6小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH40:1:0.2)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出部分固體，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，粘稠狀物質粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH40:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體7.65g，產率45.3%。1HNMR(DMSO-d6,300MHz):5H6.81(1H,S,C3-H),7.00(1H，S,C8-H)，7.93(2H,d，J=8.9Hz,C2',6'-H),6.96(2H，d，J=8.9Hz，C3、5'-H)，5.20(1H,d,J=6.8，d"-H)，4.21(1H,d,J=8,9，C5"-H)，3.373.46(3H，2"，3"，5")，3.35(3H,S,a),3.403.68(b，c)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):287.2(糖苷元)，749.4,783.4，837.4,881.4，925.4，969.4，1009.5,1057.3，分子量之間相差44的為(CH2CH20)n結構單元。其中881.4為正態分布最高峰。實施例2:燈盞花乙素-聚乙二醇(600)單甲醚-6"-酯(化合物I-600)的合成將燈盞花乙素13.86g，mPEG(600)27g，HOBt6.07g，DCC9.27g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到120mL的DMF中溶解，通氮氣保護反應體系，加熱至45。C反應8小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.2)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出部分固體，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀物質粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體12.62g，產率40.3%。!HNMR(DMSO-d6,300MHz):SH6.81(1H，S,C3-H)，7，00(1H，S,C8-H)，7.93(2H,d,J=8.9Hz,C2',6'-H),6.96(2H,d,J=8.9Hz，C3',5'-H),5.20(1H,d,J=6.8，d"-H),4.21(1H,d，J=8.9:C5"-H)，3J73.46(3H，2"，3",5")，3.35(3H,S，a)，3.403.68(b，c)ESI-MS:(M+Na)+m/z(°/。)287.0(糖苷元)，724,4，768.6，812.7，856.6，900.3，944.2，988.1，1031.9，1075.8，1119.8。分子量之間相差44為(CH2CH20)n結構單元。其中103L9為正態分布最高峰。實施例3:燈盞花乙素-聚乙二醇(1000)單甲醚-6"-酯(化合物I-1000)的合成將燈盞花乙素9.24g,mPEG(1000)30g，HOBt4.05g,DCC6.18g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到150mL的DMF中溶解，通氮氣保護反應體系，加熱至50。C反應10小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.2)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出部分固體，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH=10:1:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體10.54g，產率36.5%。'HNMR(DMSO-d6,300MHz):5H6.82(1H，S,C3-H)，7.03(1H,S,C8-H)，7.94(2H,d,J=8.9Hz，C2，，6，鄰，6.95(2H,d，J=8.9Hz,C3，,5，-H),5.27(1H，d，J=6.8,C1"-H),4.21(1H,d,J=8.9，C5"-H)，3.333.78(3H，2"，3",5"),3.23(3H,S,a),3.363.68(b,c)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(。/。)287.0(糖苷元)，1138，1182，1226，1270，1314，1358，1402，1446，14卯，1534。分子量之間相差44為(CH2CH20)n結構單元。其中1358為正態分布最高峰。實施例4:燈盞花乙素-聚乙二醇(2000)單甲醚-6"-酯(化合物I-2000)的合成將燈盞花乙素9.24g，mPEG(2000)60g，HOBt4.05g，DCC6.18g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入180mL的DMF中溶解，通氮氣保護反應體系，加熱至55。C反應11小時，TLC檢觀U反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH^0:l:0.2)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出固體，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH40:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體16.64g，產率33.8%。'HNMR(DMSO-d6,300MHz):5H6.80(1H,S，C3-H)，6,99(1H,S,C8-H)，7.93(2H,d，J-8.6Hz,Cr,6'-H),6.94(2H,d,J=8.6Hz,C3'>5'-H),5.26(1H,d，J=6.8，d"-H),4.19(1H,d,J=9.3,C5"-H),3.333.72(3H,2"，3"，5")'3.23(3H,S,a),3.363.72(b,c).ESI-MS:(M+Na)+m/z(。/o):287.0(糖苷元)，2261,2305,2349,2393，2437,2481,2525,2569，2613，2657。分子量之間相差44為(CH2CH20)n結構單元。其中2437為正態分布最高峰。實施例5:燈盞花乙素-聚乙二醇(3000)單甲醚-6"-酯(化合物I-3000)的合成將燈盞花乙素13.86g,mPEG(3000)135g，HOBt6.07g,DCC9.27g(摩爾比h1.5:1.5:L5)加入120mL的DMF中溶解，通氮氣保護反應體系，加熱至60。C反應12小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.2)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出固體，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水,將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體30.53g，產率29.55%。'HNMR(DMSO-d6,300MHz):SH6.80(1H，S，C3-H),6.99(1H,S,C8-H)，7.92(2H,d，J=6.8Hz，C2，，6，-H)，6.94(2H，d，J=8.6Hz,C3，，5，鄰，5.26(1H,d,J=6.8，Cl"-H)，4.19(1H,d,J=8.6，C5，，-H)，3.333.68(3H，2",3"，5")，3.38(3H,S,a),3.363.68(b，c)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(o/o):287.1(糖苷元)，3100，3144，3188，3232，3276，3320，3364,3408，3512。分子量之間相差44為(CH2CH20)n結構單元。其中3276為正態分布最高峰。實施例6:燈盞花乙素-聚乙二醇(400)單甲醚-6"-醯胺(11-400)的合成(1)鄰苯二甲醯亞胺鉀鹽的製備取100g的鄰苯二甲醯亞胺加入到三頸燒瓶中，再向其中加入600mL的無水乙醇，用恆壓滴液漏鬥滴入配置好氫氧化鉀的甲醇溶液(80g/L)1200mL,在室溫下滴加完畢繼續反應4小時，反應完過濾出固體，並用無水乙醇洗滌固體三次，再真空乾燥得到白色粉狀產品122g，產率97%。(2)甲氧基聚乙二醇對甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的製備稱取mPEG(400)40g，加入200mL二氯甲烷，6毫升吡啶和95g的對甲苯磺醯氯，在室溫下反應24小時，待反應完全，向反應物中加入3mol/L稀鹽酸調節至pH二34，用二氯甲烷多次萃取洗滌，在真空下減壓旋去溶劑，加無水乙醚沉澱,洗滌固體，再把所得到固體用飽和碳酸氫鈉洗滌，水洗三次，最後濃縮乾燥最後得粘稠狀液體47.56，產率86%。'H雨R(300MHz，CDC13):5H3.37(3H,S，a)，3.573.92(36H，b),4.16(2H,t，J=9.6，c)，7.79(2H，Jed=8.2，d),7.34(2H，Jde=7.9，e),2.49(3H,Me)。(3)甲氧基聚乙二醇胺(mPEG-NH2)的製備稱取mPEG400-OTs55g溶於100mL的DMF中，加入鄰苯二甲醯亞胺鉀鹽57g，在氮氣保護下，120。C下反應8小時。減壓除去溶劑，將殘留物溶於200mL的無水乙醇中，再加入10mL的水合肼回流反應12小時，旋轉蒸發除去溶劑，將殘留物溶於50mL的二氯甲烷，過濾除去不溶物，再將濾液旋轉蒸發除去溶劑，用無水乙醚沉澱，得白色固體，純化處理，得到產品31.2g，產率78%。^NMR(300MHz，CDC13):SH3.37(3H，S，a),3.503.94(38H,b,c),2.94(2H，S，d)。13C-NMR(CDC13，300MHz):SC58.33(a),69.6372.33(b)，41.05(c)。用類似的方法可製備甲氧基聚乙二醇胺mPEG(400-10000)-NH2(4)化合物II-400的合成將燈盞花乙素9.24g,mPEG400-NH212g，HOBt4.05g,DCC6.18g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入DMF60mL中溶解，在氮氣氛圍下加熱至40。C反應6小時，TLC檢測反應終點(CH2C12:CH3OH:HCOOH=7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH^0:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體9.67g，產率57.3%。'HNMR(DMS0-d6，300MHz):S6.81(1H,S，C3-H)，6.96(1H,S，Q-H)，7.94(2H,d，J=8.9Hz,C2',6'-H),6.92(2H，d,J=8.9Hz，C3',5'-H)，5.06(1H,d,P7.5，d"-H),3.96(1H，d,J=9.6，C5"-H)，3.383.60(3H,2"，3",5，，)，3.22(3H,S,a)，3.403.60(b,c).ESI-MS:(M+Na)+m/z(o/o):287.2(糖苷元)，704，748,792,836，880,924,968，1012，1056。分子量之間相差44為(CH2CH20)n結構單元。其中880為正態分布最高峰。實施例7:燈盞花乙素-聚乙二醇(600)單甲醚-6"-醯胺(化合物II-600)的合成將燈盞花乙素13.86g，mPEG600-NH227g，HOBt6.07g，DCC9.27g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到70mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至45。C反應7小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH30H:HCOOI^7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將減壓後粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體15.06g,產率48.3%。'H畫R(DMSO-d6,300MHz):S6.82(lH,S,C3-H),6.97(1H,S，C8-H)，7.95(2H,d，J-8.6Hz，Cr,6'-H),6.93(2H，d，J=8.6Hz，C3',5'-H)，5.05(1H，d,J=6.88，C,"-H),3.96(1H，d,J=9.29，C5"-H)，3.333.72(3H，2"，3"，5"),3.25(3H,S，a)，3.403.72(b,c).ESI-MS:(M+Na)+m/z(。/。)287.1(糖苷元)，1005.7,1049.7，1093.5，1137.5，1181.5分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中1093.5為正態分布最高峰。實施例8:燈盞花乙素-聚乙二醇(1000)單甲醚-6"-醯胺(化合物II-1000)的合成將燈盞花乙素13.86g，mPEG1000-NH245g，HOBt6.07g,DCC9.27g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到70mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至55。C反應8小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH=7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將減壓後粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體19.50g，產率45%。'HNMR(DMSO-d6，300MHz):56.83(1H,S,C3-H),6.96(1H,S,C8-H)，7.94(2H,d，J=8.6Hz，C2',6'-H)，6.93(2H,d，J-8.6Hz,C3',5'-H),5.03(1H，d,J=6.88，Cr'-H),3.96(1H，d,J=9.29，C5"-H),3.33~3.72(3H，2",3",5，，)，3.25(3H，S,a)，3.403.72(b,c).ESI-MS:(M+Na)+m7z(。/。)287.1(糖苷元)，1252，1296，1340，1384，1428，1472分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中1384為正態分布最高峰。實施例9:燈盞花乙素-聚乙二醇(1300)單甲醚-6"-醯胺(化合物II-1300)的合成將燈盞花乙素13.86g，mPEG1000-NH245g,HOBt6.07g，DCC9.27g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到70mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至55。C反應8小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH=7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體22.50g，產率43%。'H雨R(DMSO-d6,300MHz):S6.81(1H，S,C3-H)，6,94(1H,S，C8-H),7.93(2H，d，J=8.6Hz，C2',6'-H),6.93(2H,d，J=8.6Hz，C3',5'-H)，5.02(1H,d，J=6.88，C,"-H),3.96(1H,d,J=9.29，C5"-H)，3.333.72(3H，2"，3"，5")，3.25(3H,S,a)，3.403.72(b，c).ESI-MS:(M+Na)+m/z(。/o):287.1(糖苷元)，1472,1516，1560，1604，1648,1692分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中1604為正態分布最高峰。實施例10:燈盞花乙素-聚乙二醇(2000)單甲醚-6"-醯胺(化合物II-2000)的合成將燈盞花乙素9.24g，mPEG2000-NH260g，HOBt4.05g，DCC6.18g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到90mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應10小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH30H:HCOOH-7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾艱蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2C12:CH3OH:HCOOH=10:1:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體19.55g，產率40%。'HNMR(DMSO-d6,300MHz):56.83(1H,S,C3-H),6.94(1H,S，C8-H),7.93(2H，d,J=8.6Hz，C2',6'-H),6.93(2H,d,J=8.6Hz,C3',5'-H)，5.02(1H,d，J=6.88,d"-H)，3'98(1H,d,J=9.29,C5"-H),3.33~3.72(3H,2"，3"，5"),3.23(3H,S,a),3.403.69(b，c).ESI-MS:(M+Na)+m/z(。/。)287.1(糖苷元)，2268,2312，2356，2400，2444，2488分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中2400為正態分布最高峰。實施例ll:燈盞花乙素-聚乙二醇(3000)單甲醚-6"-醯胺(化合物II-3000)的合成將燈盞花乙素18.48g，mPEG3000-NH2180g，HOBt9.10g，DCC12.36g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到卯mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應10小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-7:l:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH=l0:1:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體19.55g，產率40%。NMR(DMSO-d6，300MHz):5H6.82(1H,S,C3-H),6.97(1H,S，C8-H),7.94(2H,d,J=8.9Hz,Cr'6'-H)，6,92(2H,d,J=8.9Hz,C3',5'-H),5.08(1H,d,J=7.5，Cr'-H),3.95(1H，d，J=9.6,C5"-H)，3.383.60(3H，2"，3",5"),3.22(3H,S,a),3.403.60(b，c)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):287.1(糖苷元)，2268，2312，2356，3420，3464，3510分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中3420為正態分布最高峰。實施例12:燈盞花乙素-聚乙二醇(400)單甲醚琥珀酸單酯-4，-酯(III-400)的合成(1)聚乙二醇單甲醚400琥珀酸單酯(mPEG400-A)的合成稱取乾燥的mPEG400(40g，100mmol)溶於250mL氯仿中，加入丁二酸酐(12.5g，125mmol)和10mL吡啶，加熱至回流反應48h，減壓回收溶劑,向殘餘物中加入50mL飽和NaHC03溶液溶解,過濾，用30mL乙酸乙酯萃取2次,水相冷卻至O'C，後用2mol/L的鹽酸酸化至pH2左右。用氯仿60mL分3次萃取,合併氯仿層,無水Na2S04乾燥過夜。濃縮溶劑，加入200ml無水乙醚沉澱產物，乾燥後得白色沉澱45g，產率90%。abcodH3C\^^/01^\^\0(^^""^^T^T0COOH'HNMR(300MHz,CDC13):SH3.30(3H，S，a),3.603.92(40H,b),4.26(2H，J=9.30,t，c),2.63(4H，S,d)。用類似的方法可製備單甲氧基聚乙二醇琥珀酸單酯mPEG(400-10000)-A(2)燈盞花乙素的純化1取50克卯％燈盞花乙素，加水500克。2加飽和的碳酸氫鈉溶液加至全部溶解，此時pH-78左右。3過濾，濾液在25。C且在機械攪拌下加入丙酮使之沉澱完全，然後在室溫下讓其靜置18小時。4過濾，固體用丙酮洗滌三次，再將固體放入2L35。/。丙酮中，直至加入丙酮的量使固體全部溶解為宜。5加入25c/。的稀鹽酸調節pH42左右，繼續攪拌2小時，再靜置12小時使之沉澱完全。6過濾，所得固體用丙酮洗滌三次，再用水洗滌至pH-7左右，最後用乙醚洗滌三次。7在60。C下真空乾燥，經NMR和HPLC檢測，純度在98%以上。formulaseeoriginaldocumentpage201HNMR(DMS0-d6，300MHz):56.74(1H,S,C3-H),6.96(1H，S,C8-H)，7.89(2H，d,,J=8.9Hz,C2',6'-H)，6.92(2H,d,J=8.9Hz,C3',5、H)，5.20(1H,d,J=6.8，Cr-H),4.04(1H，d，J=8.9,C5"-H),3.373.46(3H,2"，3",5")13C-NMR(DMS0-d6,300MHz):5C164.19(C2),102.60(C3)，182.42(C4)，149.07(C5)，130.52(C6)，151.03(C7),93.65(C8)，105.93(C9)，146.92(CI0)ESI-MS:(M-H)Tn/z(%):287.2(糖苷元)，461.4(3)燈盞花乙素甲酯的合成甲醇的鹽酸溶液的製備在100mL的圓底燒瓶中加入乾燥的甲醇50mL，在冰鹽浴冷卻到-10。C,將13mL的SOCl2緩慢滴加到乾燥的甲醇中。並維持在溫度0。C以下，繼續攪拌IO分鐘,留待後用。將燈盞花乙素4.62g溶於35mL乾燥的DMF中，在冰鹽浴下將已經製備好的甲醇的鹽酸溶液緩慢滴加到上述溶液中，滴加過程中維持在0。C以下，繼續攪拌15分鐘，撤去冰浴，升溫至40。C反應，高效液相色譜檢測反應進度。反應程度達到99%，停止反應，用飽和NaHC03溶液將反應液調至中性，向反應液中加水析出沉澱，水洗，真空乾燥。產率97%。'HNMR(DMSO-d6，300MHz):5H6.81(1H，S,C3-H),6.99(1H,S，C8-H)，7.89(2H,d，J=7.9Hz，C2',6'-H)，6.92(2H，d,J=7.9Hz,C3',5'-H),S.26(1H，d，J=6.2，C,"-H)，4.20(1H，d,J=8.9,C5"-H),3.363.38(3H，2，，，3，，，5"),3.67(3H,S，C6，，-H).(4)化合物III-400的合成將燈盞花乙素甲酯9.56g，mPEG400-A12g，HOBt4.05g，DCC6.18g(摩爾比h1.2:1.5:1.5)加入到100mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應6.5小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH30H:HCOOH-7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體9.02g，產率47%。'HNMR(DMSO-d6,300MHz):SH6.99(1H,S,C3-H)，7.36(1H,S,C8-H)，8.13(2H，d，J=8.6Hz,C2',6'-H)，6.92(2H，d，J=8.6Hz，C3',5'-H),5.24(1H，d,J=6.2,d"-H),4.16(1H,d,J=5.8，C5"-H)，3.373.46(2"，3"，5")。3.24(3H，S，a),3.283.70(b，c)，2.702.90(4H,d)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):287.0(糖苷元)，878.1,921.9，965.9，1009.7，1053.4，1097.4，1121.4，1165.4。分子量之間相差44為(CH2CH20)n結構單元。其中1053.4為正態分布最高峰。實施例13:燈盞花乙素-聚乙二醇(600)單甲醚琥珀酸單酯-4'-酯(化合物in-600)的合成將燈盞花乙素甲酯19.12g，mPEG600-A28.8g，HOBT8.10g,DCC12.36g(摩爾比l:1.2:1.5:1.5)加入到200mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應6.5小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-7:l:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2CI2:CH3OH:HCOOH=l0:1:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體21.7g，產率43.5%。'HNMR(DMSO-d6，300MHz):5H7.02(1H，S,CrH)，7.35(1H,S,C8-H)，8.12(2H，d，J=8.6Hz,C2',6'-H),7.00(2H，d,J=8.6Hz,C3，，5'-H),5.26(1H，d,J-6.9,Cr'-H)，4.16(1H，d,J=5.8,C5"-H),3.343.66(2"，3",5")。3.24(3H,S,a),3.343.66(b,c)，2.692"0(4H，d)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):286.9(糖苷元)，1207.4,1251.4,1295.4，1339.4，1383.4。分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中1295.4為正態分布最高峰實施例14:燈盞花乙素-聚乙二醇(1000)單甲醚琥珀酸單酯-4，-酯(化合物111-1000)的合成將燈盞花乙素甲酯9.56g，mPEG1000-A24g，HOBt4.05g,DCC6.18g(摩爾比h1.2:1.5:1.5)加入至ijlOOmL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至55。C反應8小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-7:l:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體9.02g,產率47%。'HNMR(DMSO-d6，300MHz):SH6.98(1H,S，C3-H)，7.34(1H,S,Q-H)，8.13(2H，d,J=8.6Hz，C2',6'-H),6.91(2H，d,J=8.6Hz,C3',5'-H),5.23(1H,d,J=6.2,Cr-H),4.16(1H,d，J=5.8，C5"-H),3.373.46(2"，3"，5")。3.24(3H，S,a),3'263.70(b,c),2.702.92(4H,d)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):287.0(糖苷元)，1339,1383，1427，1471，1515，1559，1603，1647。分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中1515為正態分布最高峰。實施例15:燈盞花乙素-聚乙二醇(1200)單甲醚琥珀酸單酯-4，-酯(化合物III-1200)的合成將燈盞花乙素甲酯9.56g，mPEG1200-A28.8g，HOBt4.05g，DCC6.18g以摩爾比l:1.2:1.5:1.5的比例投料，加入100mL的DMF溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應6.5小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH3OH:HCOOI^7:l:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH^0:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體13.25g，產率38%。'H畫R(DMSO-d6，300MHz):5H6.94(1H,S,C3-H),7.35(1H，S,Q-H),8.12(2H,d，J=8.6Hz,C2',6'-H),6.91(2H,d,J=8.6Hz,C3',5'-H),5.24(1H,d,J=6.2,C「-H),4.16(1H，d，J=5.8,C5"-H)，3.373.46(2"，3"，5")。3.23(3H,S，a)，3.283.70(b，c)，2.702.92(4H，d)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(。/。)287.0(糖苷元)1528，1572，1616，1660，1704，1748，1792。分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中1660為正態分布最高峰。實施例16:燈盞花乙素-聚乙二醇(2000)單甲醚琥珀酸單酯-4'-酯(化合物ni-2000)的合成將燈盞花乙素甲酯19.12g，mPEG2000-A96g，HOBt8.10g，DCC12.36g(摩爾比h1.2:1.5:1.5)加入至iJ160mL的DMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應6.5小時，TLC檢測反應終點(CH2Cb:CH30H:HCOOH-7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH-10:l:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體36.65g，產率35.8%。'HNMR(DMSO-d6，300MHz):S7.02(1H,S,C3-H)，7.36(1H,S,C8-H)，8.14(2H，d,J=8.6Hz,Cr,6'-H)，7.04(2H，d，J=8.6Hz，C3，,5，-H),5.24(1H,d,J=6.9,d"-H)，4.16(1H,d，J=5.8，C5"-H),3.343.70(2，，，3",5")。3.24(3H,S，a)，3.343.68(b，c)，2.692.90(4H，d)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):286.9(糖苷元),2312,2356'2400，2444,2488。分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中2400為正態分布最高峰實施例17:燈盞花乙素-聚乙二醇(3000)單甲醚琥珀酸單酯-4，-酯(化合物ni-3000)的合成將燈盞花乙素甲酯9.56g，mPEG3000-A90g，HOBt4.05g，DCC6.18g(摩爾比l:1.5:1.5:1.5)加入到200mLDMF中溶解，在氮氣氛圍下加熱至60。C反應10小時，TLC檢測反應終點(CH2Cl2:CH30H:HCOOH:7:1:0.1)，待反應完成後，加水終止反應，過濾出過量的DCC和生成的固體脲，減壓濃縮濾液蒸除DMF和水，將粘稠狀粗產品經CH2Cl2:CH3OH:HCOOH=l0:1:0.1的洗脫劑過矽膠柱三次分離提純，得淺黃色粉狀固體20.45g，產率28.5%。'HNMR(DMSO-d6，300MHz):5H7.02(1H,S，Qj-H),7.36(1H,S,C8-H),8.11(2H，d,J=8.6Hz，C2',6'-H),7.03(2H，d，J=8.6Hz，C3'，5'-H)，5.23(1H，d,J=6.9,d"-H)，4.17(1H，d，J=5.8,C5"-H),3.343.66(2",3"，5")。3.23(3H,S,a),3.343.68(b,c)，2.722.86(4H,d)。ESI-MS:(M+Na)+m/z(%):286.9(糖苷元)，3316，3360,3404，3448，3492，3536，3580。分子量之間相差44的(CH2CH20)n結構單元。其中3448為IH態分布最高峰發明的效果1，PEG修飾的燈盞花乙素水溶性如表1所示，本發明所合成的化合物非常顯著地提高了燈盞花乙素在水中的溶解度。其中，以第II類和第ni類化合物的提高更為顯著。隨PEG分子量的增加，溶解度上升，11-3000的質量溶解度達到了830.3mg/ml比燈盞花乙素提高了14210.4倍，11-1000的質量溶解度達到了554.6mg/ml比燈盞花乙素摩爾溶解度提高了3305.8倍。至此，燈盞花乙素的水溶性問題徹底解決。表1，PEG修飾燈盞花乙素化合物在水中溶解度實驗總結tableseeoriginaldocumentpage242，PEG修飾的燈盞花乙素藥效如表2所示，PEG修飾的燈盞花乙素與燈盞花乙素相比對神經缺陷症狀有明顯的改善，如11-2000由燈盞花乙素的2.7降到了1.3。同時，如表3所示，11-2000的腦梗死面積由燈盞花乙素的27.2%降到了12.2%，活性有顯著的提高。表2，PEG修飾物對神經缺陷症狀的影響tableseeoriginaldocumentpage25以上數據表明，本發明解決了燈盞花乙素水溶性問題的同時，對藥效也有顯著的提高。綜合考察，n-2ooo在水溶性，腦梗死面積和神經缺陷指數三方面都表現優秀，是一個在臨床上有應用前景候選藥物。權利要求1、一種聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，如式(IN)所示，其中，X為O或NH；R1為C1～10的烷基或R2為H或且當R1為C1～10的烷基時R2不為H；R3或R4分別為C1～4的烷基；n為6～200。2、根據權利要求1所述的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，其中formulaseeoriginaldocumentpage2Rt為Cl6的烷基或3、根據權利要求1所述的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，其中n為6150。4、根據權利要求2或3所述的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，如式(I)、式(II)或式(ni)所示，formulaseeoriginaldocumentpage2其中，R,為C14的烷基，R3或R4分別為C14的烷基，n為6~150。5、根據權利要求4述的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物，其中RhR3或R4分別為甲基，n為670。6、一種權利要求1所述的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物的製備方法，包括:A、將聚乙二醇單垸醚與燈盞花乙素在偶聯體系和溶劑中反應，反應式為或者B、將垸氧基聚乙二醇胺與燈盞花乙素在偶聯體系和溶劑中反應，反應式為:或者C、將燈盞花乙素脂化後與聚乙二醇單烷醚琥珀酸單酯在偶聯體系和溶劑中反應，反應式為OH07、根據權利要求6所述的製備方法，其特徵在於所述的偶聯體系為HOBt和DCC、DMAP禾口DCC、DMAP禾卩EDC、DMAP禾卩DIPC、HOBt禾aEDC、或HOBt禾QDIPC。8、根據權利要求6所述的製備方法，其特徵在於所述的溶劑為吡啶、DMF或DMSO。9、根據權利要求6所述的製備方法，其特徵在於燈盞花乙素或其酯與聚乙二醇類化合物反應時的溫度為1010(TC，反應時間為248小時。10、權利要求13中任一所述的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物在製備治療腦血栓、腦梗塞、腦中風、腦中風所致後遺症、冠心病或心絞痛藥物方面的應用。全文摘要本發明公開了一種聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物及其製備方法，聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物如式(IV)所示，本發明的聚乙二醇修飾的燈盞花乙素化合物可應用於製備治療腦血栓、腦梗塞、腦中風、腦中風所致後遺症、冠心病或心絞痛藥物。本發明所得到的燈盞花乙素前藥較之原藥燈盞花乙素的水溶性顯著增加；同時，小鼠腦缺血再灌注模型藥效學實驗表明，與原藥相比，燈盞花乙素前藥的生物活性明顯增強。文檔編號C07H17/07GK101486744SQ20091002466公開日2009年7月22日申請日期2009年2月25日優先權日2009年2月25日發明者垚華,成昌梅,檀愛民,森王,王義明,胡躍飛,趙興俄,娟路申請人:江蘇先聲藥物研究有限公司