一種安腎丸的製備方法及應用的製作方法
2023-12-04 02:58:16
一種安腎丸的製備方法及應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種安腎丸的製備方法，由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、茯苓96g、鹽炙蒺藜96g、粉萆薢96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥製成，採用超臨界萃取萃取製備而成，使得含量有很大提高，服用量減少，本發明還提供了安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NCI-H460細胞增殖藥物中的應用。
【專利說明】一種安腎丸的製備方法及應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥製劑【技術領域】，具體涉及一種安腎丸的製備方法及應用。
【背景技術】
[0002]安腎丸記載於衛生部標準WS3-B-0275-90，處方為甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、茯苓96g、鹽炙蒺藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g，以上十二味，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得。能補腎散寒。用於腎不納氣，溼寒侵襲引起的夢遺滑精，腎囊溼冷，遺淋白濁，臍腹作痛，精神倦怠，健忘失眠，腰腿酸痛，頭暈耳鳴二便不利。 [0003]現有技術中，尚未有安腎丸在提取製備方面採用超臨界技術的報導，而採用打粉的方法，工藝粗糙、落後，雜質多，導致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應用。
【發明內容】
[0004]發明目的:為了解決上述問題，本發明的目的在於提供一種安腎丸的製備方法。
[0005]本發明的另一個目的在於提供一種安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用。
[0006]技術方案:本發明的目的是通過如下的方案實現的:
[0007]一種安腎丸的製備方法，由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥製成，所述的方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炎肉灰蓉96g、鹽炎補骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-500C，CO2流量l-3ml/g生藥.π?η，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。
[0008]上述一種安腎丸的製備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0009]上述一種安腎丸的製備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
[0010]上述一種安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用，安腎丸由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲考鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥製成，製備方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.π?η，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。
[0011]上述安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用，安腎丸製備方法中所述C02超臨界萃取夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]上述安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用，安腎丸製備方法中所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.min，萃取時間160min。
[0013]現有技術中，按本處方的量，安腎丸能製得1000g，每100粒6g，每次6g，一日3次，採用本發明處方製備成的安腎丸500g，也是每100粒6g，但每丸含有的藥材量是原來的2倍，因此每次3g，一日3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例形式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例，凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
[0015]實施例1
[0016]取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，C02流量lml/g生藥.π?η，萃取時間150min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。
[0017]實施例2
[0018]取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa，溫度50°C，CO2流量3ml/g生藥.π?η，萃取時間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。
[0019]實施例3
[0020]取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.π?η，萃取時間160min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。實施例4:安腎丸抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖的實驗研究資料
[0021]1實驗材料
[0022]1.1實驗用細胞株
[0023]人大細胞肺癌NC1-H460細胞，南京醫科大學實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規培養。[0024]1.2實驗藥物
[0025]研究藥物:本發明安腎丸:按實施例3方法製備。
[0026]藥液儲液:稱取IOOmg安腎丸，溶於5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0027]1.3實驗試劑
[0028]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號:2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ; PBS (實驗室自配)；1.4實驗器材
[0029]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養箱(FORMA型號:3111);超淨臺(蘇淨集團安泰公司製造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風乾燥箱(上海精密實驗設備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號:ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ;10cm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司)；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。
[0030]2實驗方法
`[0031 ] I)人大細胞肺癌NC1-H460細胞用DMEM+10%FBS於37 °C、5%C02進行常規培養(10cm培養皿)，當細胞生長至對數期時，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.0496EDTA，37°C消化2min後，向其中加入5ml完全培養基中和反應，吹打細胞後將其轉入離心管中，1000rpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X IO4個/ml。
[0032]2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 μ 1，培養板放入細胞培養箱中(37 °C，5%C02 )常規培養。
[0033]3)根據細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入安腎丸溶液，繼續培養24h。
[0034]4) 24h 後加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續培養 4h。
[0035]5) 4h後扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍幹，每孔加入200 μ I 二甲基亞碸，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設置本底(不加細胞，只加培養液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞碸)，每組設定6個復孔。
[0036]7)結果以藥物對細胞的抑制率表示:
[0037]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重複3次。
[0038]3統計處理
[0039]採用Microsoft Excel2003軟體中的相關分析和Student t檢驗，數據以mean+ S.D.表不。
[0040]4實驗結果[0041]MTT法實驗後統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(Ρ〈0.01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0042]表1安腎丸對人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖抑制影響研究(X土SD)
[0043]
【權利要求】
1.一種安腎丸的製備方法，由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥製成，其特徵在於所述的方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g,加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥.min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。
2.根據權利要求1所述一種安腎丸的製備方法，其特徵在於所述CO2超臨界萃取夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據權利要求1所述一種安腎丸的製備方法，其特徵在於所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
4.根據權利要求1所述一種安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用，其特徵在於安腎丸由甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炎川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、獲茶96g、鹽炎蔡藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g作為原料藥製成，製備方法由下列步驟組成:取甘草炙巴戟天96g、酒炙肉蓯蓉96g、鹽炙補骨脂96g、甘草銀花炙川烏48g、肉桂48g、麩炒白朮96g、山藥96g、茯苓96g、鹽炙蒺藜96g、粉萆蘚96g、石斛96g、桃仁96g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l-3ml/g生藥.min，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，用水泛丸，乾燥，即得500g，100粒6g。
5.根據權利要求4所述一種安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用，其特徵在於安腎丸製備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑佔總萃取溶劑的體積百分比為5%。
6.根據權利要求4所述一種安腎丸在製備抑制人大細胞肺癌NC1-H460細胞增殖藥物中的應用，其特徵在於安腎丸製備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥.min,萃取時間 160min。
【文檔編號】A61K36/8984GK103638322SQ201310624323
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月28日 優先權日:2013年11月28日
【發明者】陳軍 申請人:常州科立信醫療器械有限公司