一種lc-ms/ms聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法

2023-12-03 02:57:11

專利名稱：一種lc-ms/ms聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法
技術領域：
本發明屬於菸草和化學技術領域，具體地涉及一種高效液相色譜-串聯質譜聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法。
背景技術：
氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate, EC又稱尿燒)廣泛存在於各種發酵食品中，是一種潛在的致癌物質，可導致肺癌、淋巴癌、肝癌和皮膚癌等多種疾病，世界衛生組織國際癌症研究機構(IARC)將其歸為2A類致癌物，美國國家毒理計劃也將氨基甲酸乙酯列入「有理由預料引起癌症物質」名單，聯合國糧農組織/世界衛生組織(FA0/WH0)食品添加劑聯合專家委員會(JECFA)第64次會議建議，為了保障人類身體健康，應儘可能降低發酵飲料和食品中氨基甲酸乙酯的含量。·1991年，Hoffmann公布的43種煙氣有害成分清單中，氨基甲酸乙酯名列其中，2001年Hoffmann與其研究者對1991年的有害成分清單進行了修訂和補充，仍將氨基甲酸乙酯列為69種有害成分之一,2002年Rodgman和Green對煙氣中已報導的有害成分進行了總結，也將氨基甲酸乙酯列為149種捲菸煙氣有害成分之一，美國食品及藥物管理局(FDA)將菸草中的氨基甲酸乙酯列為致癌物質(CA)和生殖系統/發育有毒物(RDT)，但截至目前，尚未發現國內外有採用高效液相色譜-串聯質譜儀測定捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的任何專利和文獻報導。中國專利200910099554. O公開「一種檢測黃酒中氨基甲酸乙酯的方法」，該方法通過減壓蒸懼一與鹽酸及9-羥基噸溶液混合進行衍生化反應一利用高校液相色譜儀對組分進行分離，然後採用外標法計算氨基甲酸乙酯的含量。該方法可以有效檢測黃酒中氨基甲酸乙酯。另外中國專利201110339615. 3和中國專利201110288339. 2分別公開了一種在蒸餾酒和飲料中氨基甲酸乙酯的檢測方法。隨著公眾對吸菸與健康問題的日益關注，捲菸煙氣有害成分一尤其是氨基甲酸乙酯的含量一成為人們關注的焦點問題，但是，酒類成分相對較為簡單，基質幹擾較小，而煙氣的成分複雜，已經鑑定出來的就有近5000種，且氨基甲酸乙酯在煙氣中為痕量組分，其餘成分的幹擾較為嚴重，上述專利方法並不適用於檢測煙氣中氨基甲酸乙酯的含量。因此，建立一種捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的檢測方法，並且該方法還需快速、準確、分離效果好、靈敏度高是菸草行業當前的一項迫切任務，對於研究和評價吸菸與健康問題也具有十分重要和迫切的意義。

發明內容
本發明的目的是提供一種前處理簡單、分離效果好、定性準確、樣品分析時間短、檢測靈敏度高的高效液相色譜-串聯質譜聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法。
—種LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，包括以下步驟利用劍橋濾片捕集捲菸主流煙氣中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取濾片，萃取液濃縮、稀釋後經固相萃取小柱淨化，用二氯甲烷洗脫，洗脫液用高效液相色譜/串聯質譜儀進行檢測，採用內標法得到捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯的含量。進一步地，所述內標法中採用的內標物為氘代氨基甲酸乙酯。進一步地，所述固相萃取小柱固定相為親水親脂平衡樹脂。例如，HLB小柱(改性的苯乙烯二乙烯基苯共聚物)。進一步地，所述高效液相色譜儀條件為C18反相柱，檢測溫度30°C，進樣量
Iμ L 10 μ L，流速O. 2 O. 4mL/min,乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫；所述質譜儀條件為離子化模式為電噴霧；掃描模式為正離子；霧化氣35 45L/min ;氣簾氣10L/min ;輔助加熱氣45 55L/min ;碰撞氣5L/min ;離子源噴射電壓5000 5800V ;離子源溫度350 400。。。進一步地，所述高效液相色譜儀流動相A為含O. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫程序為
權利要求
1.一種LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，包括以下步驟利用劍橋濾片捕集捲菸主流煙氣中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取濾片，萃取液濃縮、稀釋後經固相萃取小柱淨化，用二氯甲烷洗脫，洗脫液用高效液相色譜/串聯質譜儀進行檢測，採用內標法得到捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯的含量。
2.根據權利要求I的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，所述內標法中採用的內標物為氘代氨基甲酸乙酯。
3.根據權利要求I的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，所述固相萃取小柱固定相為親水親脂平衡樹脂。
4.根據權利要求I的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，所述高效液相色譜儀條件為C18反相柱，檢測溫度30°C，進樣量I ii L 10 ii L，流速0. 2 0. 4mL/min，乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫；所述質譜儀條件為離子化模式為電噴霧；掃描模式為正離子；霧化氣35 45psi ;氣簾氣IOpsi ;輔助加熱氣45 55psi ;碰撞氣5psi ;離子源噴射電壓5000 5800V ;離子源溫度350 400°C。
5.根據權利要求4的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，所述高效液相色譜儀流動相A為含0. 1%乙酸的乙腈/水以V:V=90:10的混合溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫程序為:___
6.根據權利要求I的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，包括以下步驟 1)將待測捲菸在GB/T16447-2004規定的菸草及菸草製品調節和測試的大氣環境條件下平衡48h ； 2)採用吸菸機於標準抽吸條件下抽吸，利用劍橋濾片捕集捲菸主流煙氣中的氨基甲酸乙酯，採用40mL含有約320納克(ng)內標物的乙醇溶液萃取濾片，得到萃取液； 3)移取10 20ml萃取液於濃縮瓶中，蒸發濃縮至0.5mL左右，向濃縮液中加入IOmL蒸餾水，使乙醇的體積百分比降至10%以下，將稀釋液轉移至固相萃取小柱上淨化，採用二氯甲烷進行洗脫，收集洗脫液； 4)洗脫液濃縮至幹後用約Iml流動相溶解後採用高效液相色譜/質譜儀進行測定 所述高效液相色譜儀條件為C18反相柱，檢測溫度30°C，進樣量I y L IOii L，流速.0.2 0. 4mL/min,乙腈和水作為流動相進行梯度洗脫； 所述質譜儀條件為離子化模式為電噴霧；掃描模式為正離子；霧化氣35 45psi ;氣簾氣IOpsi ;輔助加熱氣45 55psi ;碰撞氣5psi ;離子源噴射電壓5000 5800V ;離子源溫度350 400°C ； 5)配製10ng/mL 600ng/mL的氨基甲酸乙酯系列標準工作溶液,濃度梯度5個以上且均勻分布，各級標準溶液含有的內標物的濃度為300ng/mL左右；利用高效液相色譜-串聯質譜儀對標準溶液進行檢測，將得到的氨基甲酸乙酯峰面積與內標峰面積的比值作為縱坐標，氨基甲酸乙酯濃度與內標濃度比作為橫坐標，繪製標準曲線並得到回歸方程，然後在相同條件下對樣品進行檢測，將得到的氨基甲酸乙酯與內標的峰面積比值代入方程中，即可計算得出氨基甲酸乙酯的含量。
7.根據權利要求6的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，所述氨基甲酸乙酯的定量離子對m/z為90. 0/62. 1，定性離子對m/z為·90. 0/44. 0，駐留時間為200ms，碰撞能為14. OV0
8.根據權利要求2的LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法，其特徵在於，所述氘代氨基甲酸乙酯的定量離子對m/z為95. 0/63. 2，定性離子對m/z為·95. 0/44. 2，駐留時間為200ms，碰撞能為25. O。
全文摘要
本發明公開了一種LC-MS/MS聯用檢測捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯含量的方法；利用劍橋濾片捕集捲菸主流煙氣中的氨基甲酸乙酯，用乙醇萃取濾片，萃取液濃縮、稀釋後經固相萃取小柱淨化，用二氯甲烷洗脫，洗脫液用高效液相色譜/串聯質譜儀進行檢測，採用內標法得到捲菸主流煙氣中氨基甲酸乙酯的含量；該方法前處理簡單、分離效果好、定性準確、樣品分析時間短、檢測靈敏度高。
文檔編號G01N30/88GK102788858SQ20121029232
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月16日 優先權日2012年8月16日
發明者劉獻軍, 莊亞東, 張媛, 張映, 朱懷遠, 朱瑩, 熊曉敏 申請人:江蘇中煙工業有限責任公司