一種短肽及含有其的免疫抑制劑和應用的製作方法

2023-12-07 18:30:26

專利名稱：一種短肽及含有其的免疫抑制劑和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥領域，特別涉及一種短肽及含有其的免疫抑制劑和應用。
背景技術：
抗體產生的自身免疫性疾病是ー類由於自身抗體產生而導致組織、細胞損傷的自身免疫性疾病。其包含多種疾病，如較為常見的有系統性紅斑狼瘡，類風溼性關節炎，多發性硬化，抗中性粒細胞抗體(Anti-Neutrophil Cytoplasmic Antibody, ANCA)相關性小血管炎。這些疾病都是ー類慢性進展，預後較差的疾病。近年來，對於抗體產生的自身免疫性疾病的發病機制還沒有完全清楚。但是ー些重要的受體及細胞通路在抗體產生的自身免疫性疾病的發生發展中起著關鍵作用。如Fe Y受體(Fe Y receptor,Fe Y R)是介導體液免疫和細胞免疫的橋梁，即其介導了自身抗體導致的免疫細胞活化和組織、細胞的免疫損傷，導致疾病的急性炎症反應及慢性進展。抗體產生的自身免疫性疾病的治療，如系統性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、多發性硬化、ANCA相關性血管炎等，是近代醫學的治療難點，一旦診斷，往往預後較差。隨著近年來糖皮質激素及免疫抑制劑在抗體產生的自身免疫性疾病治療中的廣泛及正規應用，該類疾病的預後獲得了明顯改善，尤其是患者的5年生存率，獲得了顯著提高。但是隨著治療及研究的深入，糖皮質激素+免疫抑制劑的治療方案的缺陷日益顯露。其副作用大，如糖皮質激素可以導致物質代謝和水鹽代謝紊亂，誘發和加重感染(這是導致患者死亡的重要原因)，引起各個系統的併發症，誘發精神異常，導致白內障青光眼等，而免疫抑制的副作用更不低於糖皮質激素，尤其是在導致惡性腫瘤、造血系統功能異常、性腺抑制等。這些都大大的阻礙了糖皮質激素+免疫抑制劑在治療抗體產生的自身免疫性疾病上的應用。目前，如何降低糖皮質激素和免疫抑制劑在治療抗體產生的自身免疫性疾病中產生的副作用，是臨床醫生最為關注的問題。通過大量的臨床試驗，規範、合理應用糖皮質激素和免疫抑制劑在一定程度上降低了其副作用，但是不能根本解決這個問題。因此，越來越多的研究者開始關注特異性更強的生物型免疫抑制藥物，如利妥昔單抗，阿巴西普等生物型製藥，都是特異性非常強的免疫抑制劑。這些藥物逐步在自身免疫性疾病的治療中獲得應用，而且表現出優秀的低毒性反應，高敏感性的特點。但是由於這些藥物的專利大多由國外掌握，且治療費用昂貴，限制了這些藥物在我國的廣泛的應用。因此，開發新的治療抗體產生的自身免疫性疾病的藥物成為ー個急需解決的問題。由抗體產生的自身免疫性疾病,如系統性紅斑狼瘡,過敏性紫癜,抗中性粒細胞胞漿抗體相關性血管炎等自身免疫性疾病均存在大量自身抗體。其血清中抗體的滴度和疾病的嚴重性相關，在疾病好轉時抗體滴度下降，而復發時抗體滴度上升。Fe Y R是幾乎所有免疫細胞膜表面均表達的免疫球蛋白受體，參與一系列的生理和病理的免疫反應，在免疫系統的調節中也起著關鍵作用。TG19320 (—種能夠通過結合IgG Fe段而拮抗Fe YR和IgG之間的相互作用的多肽)能夠拮抗Fe Y R和IgG之間的相互作用，從而保護系統性紅斑狼瘡小鼠的組織損傷，降低其死亡率(Nat Biotechnol, 2000, 18(7) :735-739)。TG19320也能夠幹預抗中性粒細胞胞漿抗體對正常中性粒細胞的作用，降低抗中性粒細胞胞漿抗體誘導的中性粒細胞凋亡和活化(中華腎臟病雜誌，2006，22(8) :483-487，中華風溼病學雜誌，2007, 11 (5) : 267-270)。但是Fe Y R也擔任著機體抵抗病原微生物入侵，保持內環境穩定的作用，完全阻斷Fe YR的作用可能會導致嚴重後果。因而可以通過阻斷部分Fe YR與抗體的結合，如特異性的阻斷Fe Y RIIA與IgG的作用，來治療自身免疫性疾病。Fe Y RIIA(即Fe Y IIA 受體)是Fe YR中的ー個亞型，是介導抗體產生的自身免疫性疾病的重要受體，在疾病發生發展中起到重要作用。因此拮抗Fe Y RIIA和IgG之間的相互作用已成為治療抗體產生的自身免疫性疾病的重要靶點之一，拮抗Fe Y RIIA和IgG的結合能夠治療或預防自身免疫性疾病。

發明內容
因此，本發明要解決的技術問題就是針對現有的治療抗體產生的自身免疫性疾病的藥物中存在不易生產，生產成本高，價格昂貴的不足，提供ー種新的治療自身免疫性疾病的藥物，該藥物能夠特異性拮抗Fe Y RIIA和IgG相互作用，從而預防或治療抗體產生的自身免疫性疾病。本發明人經過研究後發現，通過特異性拮抗免疫細胞膜的免疫球蛋白受體Fe
YRIIA而不影響其他受體的功能，是治療抗體相關的自身免疫性疾病的重要靶點。因此，本發明人以Fe Y RIIA蛋白的胞外段為靶標，設計併合成的一種短肽，發現該短肽可以特異性拮抗IgG和Fe YRIIA的相互作用，從而完成了本發明。本發明解決上述技術問題所採用的技術方案之一是一種短肽，其是6肽，其胺基酸序列是選自Thr (蘇氨酸)，Pro (脯氨酸)，Ala (丙氨酸)，Ile (異亮氨酸)，Phe (苯丙氨酸)，His (組氨酸)，Trp (色氨酸)，Tyr (酪氨酸)或Glu (穀氨酸)中的任意6種胺基酸殘基的任意順序的組合。根據本發明，較佳的，所述的短肽的胺基酸序列為選自以下胺基酸序列中的一種J-Pro-Ala-Pro-I le-R，其中J代表Thr、His、Trp或Glu胺基酸殘基，R代表Phe或Tyr胺基酸殘基；較佳地，所述的胺基酸序列為選自以下胺基酸序列中的ー種Thr-Pro-Ala-Pro-IIe-Phe， His-Pro-Ala-Pro-IIe-Phe, Trp-Pro-Ala-Pro-IIe-Phe,Trp-Pro-Ala-Pro-Ile-Tyr 和 Glu-Pro-Ala-Pro-Ile-Phe。根據本發明，較佳的，所述的短肽的胺基酸序列較佳的為選自以下胺基酸序列中的一種=Pro-Ile-Phe-Ala-Pro-Thr, Phe-Ile-Pro-Pro-Thr-Ala,Pro-Phe-Ile-Ala-Thr-Pro 和 Pro-Pro-Phe-Thr-Ala-IIe。本發明短肽可採用現有技術中的公知方法獲得。既可以用多肽自動合成儀進行化學合成，又可以將短肽序列推導成核苷酸序列，然後克隆到表達載體中進行生物合成。本發明解決上述技術問題所採用的技術方案之二是ー種免疫抑制劑，其活性成分包括所述的短肽。本發明的免疫抑制劑含有治療有效量的本發明短肽。需要的時候，也可以還含有其他的活性成分。上述免疫抑制劑中還可以含有一種或多種藥學上可以接受的載體。所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、潤溼劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性剤、吸附載體和潤滑劑等。本發明的免疫抑制劑可以製成片劑、粉劑、粒劑、膠囊、ロ服液及注射液等多種形式，各種劑型均可以按藥學領域的常規方法製備。本發明的短肽具有結合Fe Y RIIA的活性，體外實驗證實具有特異性拮抗Fe
YRIIA和IgG相互作用的能力，是Fe YRIIA拮抗劑。因此本發明的短肽可用於製備拮抗Fe YlIA受體(Fe Y RIIA)和免疫球蛋白G (IgG)相互作用的藥物，特別是用於製備Fe
YRIIA拮抗劑。該藥物通過對Fe Y RIIA的拮抗作用而抑制抗體介導的自身免疫性疾病的組織、細胞損傷及急性炎症狀態，從而阻斷抗體介導的自身免疫性疾病的進展，進而預防或治療抗體介導的自身免疫性疾病。因此本發明的短肽可用於製備預防或治療自身免疫性疾病的藥物。所述的自身免疫性疾病較佳的為系統性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、多發性硬化和ANCA相關性血管炎等。 本發明所用的原料或試劑除特別說明之外，均市售可得。相比於現有技術，本發明的有益效果如下本發明的短肽具有特異性強，結構短小，免疫原性低，合成簡單，且具有較強的抑制IgG単體和Fe Y RIIA結合的能力。可用於製備拮抗Fe YRIIA和IgG相互作用的藥物和製備自身免疫性疾病的藥物。以本發明的短肽為活性成分的藥物，可以特異性拮抗Fe Y RIIA和IgG之間的相互作用，而不拮抗Fe y RI和IgG之間的作用。因此其副作用低。在製造新型免疫抑制劑中將會得到廣泛應用，並且將會帶來巨大的社會及經濟效益。


以下結合

本發明的特徵和有益效果。圖I為不同濃度的本發明的I號短肽對Fe Y RIIA和IgG相互作用的影響。圖2為玫瑰花環形成實驗顯微鏡下照片。圖A為陽性對照組，圖B為IgG組，圖C為I號短肽，圖D為2號短肽，圖E為3號短肽，圖F為4號短肽，圖G為5號短肽，圖H為6號短肽。
圖3為玫瑰花環形成實驗中各組中玫瑰花環形成及未形成的K562細胞數。f 6為Γ6號短肽。
具體實施例方式下面用實施例來進ー步說明本發明，但本發明並不受其限制。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照製造廠商所建議的條件。實施例中所述的「室溫」是指進行試驗的操作間的溫度，一般為1(T25°C。實施例I短肽序列的設計和合成經過序列設計、優化和篩選後獲得9個短肽，見表I。送交上海吉爾生化合成，純度均>95%，用於以下實施例的試驗。
表I.經過設計、優化獲得的短肽

權利要求
1.一種短肽,其特徵在於,其胺基酸序列是Trp-Pro-Ala-Pro-Ile-Tyr。
2.ー種免疫抑制劑，其特徵在於，其活性成分包括權利要求I所述的短肽。
3.如權利要求I或2所述的短肽在製備FeYlIA受體拮抗劑中的應用。
4.權利要求I或2所述的短肽在製備拮抗FeYlIA受體和免疫球蛋白G相互作用的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種短肽及其免疫抑制劑和應用。該短肽是6肽，其胺基酸序列是Trp-Pro-Ala-Pro-Ile-Tyr。該短肽可用於製備拮抗Fc γIIA受體(FcγRIIA)和免疫球蛋白G(IgG)相互作用的藥物和製備治療或預防自身免疫性疾病的藥物。具有特異性強，結構短小，免疫原性低，合成簡單的特點。以本發明的短肽為活性成分的藥物，可以特異性拮抗Fc γRIIA和IgG之間的相互作用，而不拮抗Fc γRI和IgG之間的作用，因此其副作用低。在製造新型免疫抑制劑中將會得到廣泛應用，並且將會帶來巨大的社會及經濟效益。
文檔編號A61K38/08GK102718838SQ20121014100
公開日2012年10月10日 申請日期2009年4月24日 優先權日2009年4月24日
發明者俞海瑾, 張驥, 朱維良, 王偉銘, 陳楠, 陳永熙 申請人:上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院, 中國科學院上海藥物研究所