Ptx－敏感g蛋白、其製備和應用的製作方法

2023-12-10 04:24:31 1

專利名稱：Ptx－敏感g蛋白、其製備和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的人G蛋白，尤其是G蛋白的β3亞單位，它們的製備方法以及其在診斷和治療中的應用。
異源三聚體鳥嘌呤核苷酸結合蛋白(G蛋白)在胞內信號轉導中具有突出的重要性。在受到受體活化後發生構象改變的激素受體和其它受體刺激後，它們介導胞外信號的轉換。這導致可接著活化或抑制胞內效應物(例如離子通道、酶)的G蛋白的活化。異源三聚體G蛋白由三個亞單位α、β、γ亞單位組成。目前，通過生物化學和分子生物學方法已檢測出了幾個不同的α亞單位、5個β亞單位和大約12個γ亞單位(Bimbaumer,L.和Bimbaumer,M.通過G蛋白的信號轉導1994版受體研究雜誌15:213-252,1995；Offermanns,S.和Schultz,G.通過包括G蛋白的跨膜信號系統的複雜的信息加工。Naunyn SchmiedebergsArch.Pharmacol.350:329-338,1994；Numberg,B.,Gudermann,T.和Schultz,G.作為跨膜信號轉導主要成分的G受體和G蛋白。第2部分,G蛋白結構和功能。分子醫學雜誌73:123-132,1995；Neer,E.J.異源三聚體G蛋白跨膜信號的組織者。細胞80:249-257,1995；Rens-Domiano,S.和Hamm,H.E.異源三聚體G蛋白結構和功能的相互關係。FASEB J.9:1059-1066,1995)。
通過用百日咳毒素(PTX)預處理可抑制一些α亞單位的受體介導的活化。這些尤其包括α同種型αi1、αi2和αi3以及各種αo亞單位。這些類型的G蛋白也被稱為PTX敏感G蛋白。
βγ亞單位在G蛋白活化和胞內反應的調節中執行主要功能。目前公開的所有G蛋白的β亞單位在核苷酸序列水平和胺基酸序列水平上具有高度的同源性。並且，不僅在人β亞單位(β1、β2、β3)中，而且在與其它種類，例如果蠅或酵母的β亞單位的比較中也發現了這些相似性。
X-射線結構分析已能確定相互連接並為異源三聚體的有序形成所必需的α、β和γ亞單位中的那些胺基酸。
目前公開的所有G蛋白的β亞單位屬於WD重複蛋白。β亞單位的N末端主要與γ亞單位相互作用，C末端參與與受體的相互作用。
β亞單位形成所謂的螺旋槳結構。Gβ亞單位的β螺旋槳由7個β螺旋槳葉片組成，其中每一個螺旋槳葉片由4個反向平行排列的胺基酸區域組成。可在胺基酸水平上檢測β螺旋槳的7面對稱，其中它包含7個WD重複。一個WD重複基元包含約40個胺基酸並具有許多保守胺基酸，其中包括Trp-Asp二肽序列。該WD基元通常終止WD重複(

圖1)。
現已意外地發現僅由6個代替用另一種方式描述的7個WD重複基元而組成的G蛋白β3亞單位出現在例如高血壓患者中。與血壓正常者相比，在這些高血壓患者中的PTX敏感G蛋白的細胞可活化性增加。
分子分析揭示了這些高血壓患者中的β3亞單位的新的胺基酸序列，其比已知序列短41個胺基酸。該序列描述在SEQ ID NO:2中。從形式上來看，它由已知的人β3亞單位缺失胺基酸167-207而產生。
編碼它的相應的DNA序列描述在SEQ ID NO:1中。
在高血壓患者中出現縮短的Gβ3亞單位的原因被推測是由於相關基因的另一種剪接。在DNA水平上，恰好在推想的剪接位點前有一個內含子。內含子始於開放讀框位點中的核苷酸497之後(編號如SEQ IDNO:1)。
還可通過對基因組DNA的PCR來檢測在大約核苷酸620開始的內含子。縮短的形式顯然通過整個外顯子的缺失而產生。本發明進一步涉及一種通過在宿主生物中表達編碼它的核酸序列來製備如上所述的縮短形式的人Gβ3亞單位的方法。
優選通過製備除編碼核酸序列外，還包含其它信號和調節序列，如啟動子、終止子、核糖體結合位點、聚腺苷酸化位點等的基因構建物來進行重組表達。本領域技術人員熟知基因重組表達的一般方法。
本發明進一步涉及根據本發明的核酸序列在製備用於基因治療的藥物中的用途。以直接形式或在製備一個適宜基因載體後將這些核酸序列導入病人細胞中能在其中獲得增加的G蛋白可活化性。
這在許多存在與G蛋白相關的調節異常的疾病中是所希望的。
與G蛋白調節異常相關的疾病指其中G蛋白參與信號轉導且不以生理方式發揮其功能的那些疾病。
這些疾病包括心血管疾病、代謝紊亂和免疫性疾病。
應提及的心血管疾病為高血壓、妊娠高血壓(妊娠中毒、妊娠中的高血壓)、冠心病、局部和/或全身性動脈粥樣硬化、血管狹窄、重新血管化手術後的血管再狹窄(例如使用和不使用斯坦特固定模移植的PTCA)、中風傾向、血栓形成傾向和增多的血小板聚集。
應提及的代謝紊亂為代謝綜合症、胰島素耐性和血胰島素過多、Ⅱ型糖尿病、糖尿病併發症(例如腎病、神經病、視網膜病等)、脂代謝紊亂、中樞化學感受紊亂(CO2耐受性、酸中毒耐受性、嬰兒猝死(SIDS))。
應提及的免疫性疾病為身體免疫應答強度的削弱(免疫球蛋白的形成、T細胞和NK細胞的攻擊性)、包括創傷癒合能力的增殖的全身性減弱趨勢、腫瘤發生和增殖的趨勢，包括惡性轉化細胞的轉移能力、HIV感染後直至疾病臨床表露的潛伏期限、卡波西肉瘤、肝硬變趨勢、移植耐受性和移植排斥。
本發明進一步涉及根據本發明的核酸序列在診斷疾病中的用途，尤其包括確定患有與G蛋白調節異常相關的疾病的危險率。
除開確定一些疾病的危險率外，還可通過根據本發明的用途獲得一般性的關於例如中樞化學感受、CO2耐受性、酸中毒耐受性、嬰兒猝死(SIDS)的危險率以及一些運動類型的適合度的生理學數據和報告。
本發明進一步涉及與編碼縮短形式的Gβ3亞單位的核酸序列互補的核酸序列的用途。這種類型的序列可被用作用於治療或預防與G蛋白調節異常相關的疾病的反義構建物。
本發明進一步涉及一種通過將個體的人G蛋白β3亞單位的基因序列與基因序列SEQ ID NO:1比較來確定個體患有與G蛋白調節異常相關的疾病的相對危險率的方法，在它與SEQ ID NO:1一致時，表明個體具有增加的危險率。
在根據本發明的確定相對危險率的方法中，從個體中獲得包含個體遺傳信息的身體材料。通常，這通過從血液樣品中分離核酸來完成。
從個體分離核酸中確定G蛋白β3亞單位的基因結構並與SEQ IDNO:1所示序列比較。
可通過測序核酸確定基因的結構。這可直接從基因組DNA或在例如通過PCR技術擴增核酸後完成。
可在mRNA或cDNA水平上測定基因結構。
優選通過在cDNA的PCR擴增後進行測序來測定。本領域技術人員從SEQ ID NO:1描述的序列可很容易地推出適宜於PCR反應的引物[sic]。這種方法是有利的，致使在每種情況下選擇位於缺失位點之前和之後的引物結合鏈和互補鏈。
然而，也可通過其它方法來進行基因的比較，例如通過選擇性雜交或通過使用限制酶的適宜作圖。
也可在蛋白質水平上完成上述診斷方法。例如，根據本發明的蛋白質可被用來製備特異性抗體以識別縮短形式的Gβ3亞單位。這種類型的抗體可被接著用來在適宜時通過常規ELISA法完成除了或可選擇的遺傳研究以外的蛋白質化學研究。
本發明進一步涉及攜帶有上述遺傳修飾(Gβ3亞單位的縮短)的轉基因動物的製備。這種類型的轉基因動物對於特別是用作用於研究和治療上述疾病的動物模型具有極大的重要性。本領域技術人員一般熟知製備轉基因動物的方法。
下面的實施例用於進一步說明本發明。實驗部分1．在原發性高血壓中關於G蛋白活化的機能性結果對來自血壓正常個體和高血壓病人的細胞的G蛋白的活化進行詳細的表徵。為了此目的，用Wieland等描述的方法(Wieland,T.,Liedel,K.,Kaldenberg-Stasch,S.,Meyer zu Heringdorf,D.,Schmidt,M.,和Jakobs,K.H.對在可滲透細胞中的受體-G蛋白相互作用的分析。Naunyn-Schmiedeberg’s Arch.Pharmacol.351:329-336,1995)定量測定放射性標記的[35S]GTPγS的受激摻入。首先通過使用肥大細胞脫粒肽7刺激已被用毛地黃皂苷滲透的細胞來活化G蛋白。
該肽刺激與活化的G蛋白偶聯的受體的構型，這樣它可被用來誘導不依賴於受體的直接的G蛋白的活化(Ross,E.M.和Higashijima,T.肥大細胞脫粒肽和其它陽離子肽對G蛋白活化的調節。酶學方法237:27-38,1994)。MAS-7誘導的GTPγS的結合為完全PTX敏感，這樣它可被用來定量測定Gi類型的異源三聚體G蛋白的活化。圖2表明在血壓正常(NT)和高血壓(HT)情況下，由肥大細胞脫粒肽7(MAS-7)誘導的G蛋白活化的濃度依賴性。MAS-7誘導強的[35S]GTPγS與HT細胞的結合，其中EC50為約5μM(圖2)。在約25-50μM MAS-7時達到最大結合。與此相反，同等的[35S]GTPγS與NT細胞的結合所需的濃度要高[sic]10倍(圖2)。這些數據證實在HT細胞中，PTX敏感G蛋白的活化比在NT細胞中顯然需要較少的活化的受體。
圖3表明由肥大細胞脫粒肽7刺激的[35S]GTPγS與來自血壓正常者(NT)和高血壓患者(HT)的細胞繫結合的時程。GTPγS與高血壓患者細胞的結合明顯加快(血壓正常者中的，速率常數0.005s-1，而高血壓狀態的0.01s-1)。
圖4表明由肥大細胞脫粒肽7刺激的[35S]GTPγS與來自血壓正常者(NT)和高血壓患者(HT)的分離的細胞膜的結合的GDP依賴性。顯然[35S]GTPγS與來自高血壓患者的細胞膜的最大受激結合發生在較低濃度的GDP(約0.2μmol/l)時，其中在血壓正常者中，對於相同效果需要lμmol/l濃度的GDP。
用類似方式，由肥大細胞脫粒肽7刺激的[35S]GTPγS與來自高血壓患者膜製劑的最大結合發生在低濃度(約0.01mmol/l)的游離Mg2+時，而對於[35S]GTPγS與來自血壓正常者細胞膜的最大結合則必需0.1mmol/l的游離Mg2+濃度(圖5)。
接著進行來自高血壓患者細胞的G蛋白的增加的可活化性的重建實驗。為了此目的，純化來自牛眼的光受體視紫紅質和G蛋白α亞單位轉導素(αt)(Phillips,W.J.,Wong,S.C.,和Cerione,R.A.視紫紅質/轉導素的相互作用。Ⅱ．轉導素-βγ亞單位複合物對轉導素-α亞單位與視紫紅質偶聯的影響。生物化學雜誌。267:17040-17046,1992)。此外，通過加入膽酸鹽從來自血壓正常者和高血壓患者細胞膜中提取G蛋白(Mitchell,J.,Northup,J.K.,和Schimmer,B.P.Y1腎上腺皮質細胞系的毛喉素抗性突變體中的缺失脒基的核苷酸結合蛋白βγ的亞單位。Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89(19):8933-8937,1992)。測定了由視紫紅質(=受體)誘導的[35S]GTPγS與α-轉導素(αt)的特異性結合，並檢測了來自血壓正常者和高血壓患者細胞膜的膽酸鹽提取物對這種結合的影響。所有實驗中膽酸鹽提取物中的蛋白質濃度相同。
圖6表明來自血壓正常者和高血壓患者細胞的膽酸鹽提取物對由視紫紅質刺激的[35S]GTPγS與αt結合的影響。
很顯然在這種情況下來自高血壓患者細胞的膽酸鹽提取物比來自血壓正常者的膽酸鹽提取物的介導更顯著地促進視紫紅質催化的[35S]GTPγS與αt的結合。
所示實驗使得能總結出下面的結論；在高血壓患者細胞中存在增加的G蛋白的可活化性。這通過與血壓正常者的細胞中的G蛋白的活化比較更為有力，因為高血壓患者細胞需要明顯較少的活化的受體，並且此外G蛋白活化的動力學明顯加快(圖2和3)。
而且，在高血壓患者細胞的情況時，其最大G蛋白活化比血壓正常者細胞的情況需要明顯較低的游離GDP和游離Mg2+濃度。這導致這樣的結論，即在高血壓患者細胞中α、β、γ亞單位的蛋白相互作用比在血壓正常者細胞中進行得明顯更為有效(圖4和5)。
來自高血壓患者細胞的膽酸鹽提取物比來自血壓正常者的細胞的膽酸鹽提取物更顯著地增強視紫紅質催化的[35S]GTPγS與αt的結合。這證實在體外體系可重建在高血壓患者細胞情況下的增強的G蛋白的活化(圖6)。而且，可肯定地從這些發現中得出結論，即在異源三聚體G蛋白的βγ亞單位中將發現高血壓患者細胞中的進行的改變。在所述重建體系中，在存在αt時，沒有仍存在於在膽酸鹽提取物中的α亞單位的活化。而且，加入的光受體視紫紅質僅特異性地活化加入的αt而不活化內源性存在於膽酸鹽提取物中的α亞單位。
新的蛋白質由299個胺基酸組成。與前面描述的人Gβ3亞單位相比，在第4個WD重複的區域存在缺失。然而，由於一些胺基酸序列的規律性，可預測新的短的Gβ3蛋白將同樣形成適宜的螺旋槳結構，但這種新的螺旋槳現將由6個螺旋(圖9)而不再是7個(圖1)槳葉片組成。
由於新的短的Gβ3亞單位的N末端和C末端未由前面已知的Gβ3亞單位發生變化，可預測未受破壞的與異源三聚體G蛋白的α和γ亞單位和與偶聯受體的相互作用。與上述功能性結果結合在一起，顯然新的短的Gβ3亞單位功能性地介導在高血壓患者中觀察到的異源三聚體G蛋白的活化增強。
在高血壓患者中的縮短的Gβ3亞單位產生的原因被推測是編碼人Gβ3的基因的另一種剪接。事實上，在DNA水平上，恰好在推測的剪接位點的前面存在一個內含子(圖10)。
當ATG起始密碼子的A被定為+1時，內含子在開放讀框中的鹼基497之後開始。
內含子的範圍和分支位點用斜體字和下劃線表示。GGA CAC CAC GTG gtgaggctgaacattgctggtgctggggcttgggagtgggcccggcctttctctaacagtctccctccattttggcag TGC CTT GTG GGA由於用基因組DNA的PCR也可檢測到始於開放讀框中約鹼基620處的內含子，因此，本文描述的縮短形式的人Gβ3顯然是導致完整的外顯子缺失的初始Gβ3的另一種剪接的結果。
序列表(1)一般信息(ⅰ)申請人(A)名稱巴斯夫公開股份有限公司(B)街道Carl-Bosch-Strasse 38(C)城市路德維希港(E)國家德意志聯邦共和國(F)郵編D-67056(G)電話0621/6048526(H)電傳0621/6043123(I)電報1762175170(ⅱ)發明名稱PTX-敏感G蛋白、其製備和應用(ⅲ)序列數目2(ⅳ)計算機可讀形式(A)介質類型軟磁碟(B)計算機IBM PC兼容(C)作業系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟體PatentInRelease#1.0，Version#1.25(EPA)(2) SEQID NO的信息1(ⅰ)序列特徵(A)長度1394個鹼基對(B)類型核酸(C)鏈型雙鏈(D)幾何結構線性(ⅱ)分子類型cDNA至mRNA(ⅲ)假設無(ⅲ)[sic]反義無(ⅵ)初始來源(A)生物人類(ⅸ)特點(A)名稱/關鍵詞CDS(B)位置1..900(ⅹⅰ)序列描述SEQIDNO:1:ATG GGG GAG ATG GAG CAA CTG CGT CAG GAA GCG GAG CAG CTC AAG AAG 48Met Gly Glu Met Glu Gln Leu Arg Gln Glu Ala Glu Gln Leu Lys Lys1 5 10 15CAG ATT GCA GAT GCC AGG AAA GCC TGT GCT GAC GTT ACT CTG GCA GAG 96Gln Ile Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu20 25 30CTG GTG TCT GGC CTA GAG GTG GTG GGA CGA GTC CAG ATG CGG ACG CGG144Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gln Met Arg Thr Arg35 40 45CGG ACG TTA AGG GGA CAC CTG GCC AAG ATT TAC GCC ATG CAC TGG GCC192Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Ala50 55 60ACT GAT TCT AAG CTG CTG GTA AGT GCC TCG CAA GAT GGG AAG CTG ATC240Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu Ile65 70 75 80GTG TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTG CAC GCC ATC CCA CTG CGC288Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Ile Pro Leu Arg85 90 95TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG336Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val100 105 110GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ATG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC384Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Ser115 120 125CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT432Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly130 135 140TAT CTC TCC TGC TGC CGC TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC480Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn Ile Val Thr Ser145 150 155 160TCG GGG GAC ACC ACG TGT GCC AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC528Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr165 170 175TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC CAC GAG TCG GAC ATC 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GGAGAAAGGG 917Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys Ile Trp Asn290 295 300AAGTGGAAGG CAGTGAACAC ACTCAGCAGC CCCCTGCCCG ACCCCATCTC ATTCAGGTGT 977TCTCTTCTAT ATTCCGGGTG CCATTCCCAC TAAGCTTTCT CCTTTGAGGG CAGTGGGGAG 1037CATGGGACTG TGCCTTTGGG AGGCAGCATC AGGGACACAG GGGCAAAGAA CTGCCCCATC 1097TCCTCCCATG GCCTTCCCTC CCCACAGTCC TCACAGCCTC TCCCTTAATG AGCAAGGACA 1157ACCTGCCCCT CCCCAGCCCT TTGCAGGCCC AGCAGACTTG AGTCTGAGGC CCCAGGCCCT 1217AGGATTCCTC CCCCAGAGCC ACTACCTTTG TCCAGGCCTG GGTGGTATAG GGCGTTTGGC 1277CCTGTGACTA TGGCTCTGGC ACCACTAGGG TCCTGGCCCT CTTCTTATTC ATGCTTTCTC 1337CTTTTTCTAC CTTTTTTTCT CTCCTAAGAC ACCTGCAATA AAGTGTAGCA CCCTGGT1394(2)SEQ ID NO的信息2(ⅰ)序列特徵(A)長度299個胺基酸(B)類型胺基酸(D)幾何結構線性(ⅱ)分子類型蛋白質(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:2:Met Gly Glu Met Glu Gln Leu Arg Gln Glu Ala Glu Gln Leu Lys Lys1 5 10 15Gln Ile Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu20 25 30Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gln Met Arg Thr Arg35 40 45Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys Ile Tyr Ala Met His Trp Ala50 55 60Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu Ile65 70 75 80Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Ile Pro Leu Arg85 90 95Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val100 105 110Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser Ile Tyr Asn Leu Lys Ser115 120 125Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly130 135 140Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn Ile Val Thr Ser145 150 155 160Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr165 170 175Cys Arg Gln Thr Phe Thr Gly His Glu Ser Asp Ile Asn Ala Ile Cys180 185 190Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala Ile Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser195 200 205Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gln Glu Leu Ile Cys Phe Ser210 215 220His Glu Ser Ile Ile Cys Gly Ile Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser225 230 235 240Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp245 250 255Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg Val Gly Ile Leu Ser Gly His Asp Asn260 265 270Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr275 280 285Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys Ile Trp Asn290 29權利要求
1．人G蛋白的β-3亞單位，其由不多於6個的WD重複基序組成。
2．如權利要求1所述的蛋白，其具有SEQ ID NO:2所示的胺基酸序列。
3．編碼如權利要求1或2所述的蛋白的核酸序列。
4．如權利要求3所述的核酸序列，其具有SEQ ID NO:1所示的序列。
5．一種製備如前述權利要求任一項所述的蛋白的方法，其包括提供適宜時具有適宜的調節信號的前述權利要求任一項所述核酸序列並將其在宿主生物中進行表達。
6．如權利要求5所述的方法，其中在來自免疫缺陷個體的免疫細胞中進行表達。
7．如權利要求6所述的方法，其中個體為HIV陽性。
8．如權利要求5所述的方法，其中在人體細胞中進行表達。
9．前述權利要求中任一項所述的核酸序列在製備用於治療與G蛋白調節異常相關的疾病的藥物中的用途。
10．人G蛋白β3亞單位基因的遺傳修飾在診斷疾病中的用途。
11．人G蛋白β3亞單位基因的遺傳修飾在確定患有與G蛋白調節異常相關的疾病的危險率中的用途。
12．如權利要求10或11所述的用途，其中遺傳修飾包括SEQ IDNO:1所示的核酸序列。
13．如權利要求10-12所述的用途，其中疾病為心血管疾病、代謝紊亂或免疫性疾病。
14．如權利要求10-12所述的用途，其中疾病為高血壓。
15．前述權利要求中任一項所述的核酸序列在製備轉基因動物中的用途。
16．與如權利要求3或4所述的核酸序列互補的核酸序列在製備用於治療或預防疾病的反義藥物中的用途。
17．如權利要求16所述的用途，其中疾病為高血壓、妊娠高血壓、冠心病、血管成形術後的再狹窄或中風。
18．如權利要求16所述的用途，其中疾病[sic]為糖尿病後遺症，如腎病[sic]、多神經病或視網膜病[sic]。
19．如權利要求16所述的用途，其中疾病為轉移性腫瘤。
20．一種確定個體患有與G蛋白調節異常相關的疾病的相對危險率的方法，包括通過將個體的人G蛋白質β3亞單位的基因序列與基因序列SEQ ID NO:1比較，在與SEQ ID NO:1相符時，表明個體具有增加的危險率。
21．如權利要求20所述的方法，其中通過測序、限制性分析或選擇性雜交進行基因比較。
22．如權利要求1或2所述的蛋白在製備特異性抗該蛋白的抗體中的用途。
全文摘要
描述了由不多於6個的WD重複基序組成的人G蛋白的β3亞單位。
文檔編號C12N15/17GK1230222SQ97197854
公開日1999年9月29日 申請日期1997年8月29日 優先權日1996年9月13日
發明者溫弗裡德·西弗特 申請人:溫弗裡德·西弗特