一種蟲草菌絲體中粗多糖含量的測定方法
2023-12-08 18:07:56 2
專利名稱：一種蟲草菌絲體中粗多糖含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種粗多糖的測定方法，特別是涉及一種蟲草菌絲中粗多糖含量的測定方法。
背景技術：
蟲草多糖是蟲草體內含量最豐富、最重要的生物活性物質之一，蟲草多糖是由甘露糖、蟲草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、巖藻糖組成的多聚糖。大量醫學實驗證實，蟲草多糖可活化巨噬細胞，刺激抗體產生，提高人體免疫能力，升高白細胞抑制腫瘤生長，並具有抗腫瘤、抗輻射、降血糖和脂蛋白、止咳、化痰、潤肺和延緩衰老等藥理作用， 此外，蟲草多糖還能抗心律失常，抗心肌缺血，擴張外周血管，降壓，降血脂，抑制血小板聚集。目前，蟲草菌絲體中的粗多糖含量的測定方法通常採用苯酚-硫酸法或蒽酮-硫酸法，均是以葡萄糖或葡聚糖為標準品，通過繪製標準曲線，進而對蟲草菌絲體樣品中的粗多糖含量進行定量。其步驟主要包括1、對樣品進行預處理；2、繪製葡萄糖或葡聚糖標準曲線；3、通過標準曲線測定樣品的含量；為了使得測定的結果能夠反應蟲草菌絲體中粗多糖的真實含量，對不同批次樣品進行含量測定時，均需繪製標準曲線。這種方法即耗時又消耗實驗試劑；另外在配製標準溶液和繪製標準曲線時還會因稱量、定容、稀釋等操作步驟產生人為誤差，影響結果的準確性。
發明內容
本發明的目的是克服現有技術中的不足，提供一種能夠快速、準確地測定蟲草菌絲體中粗多糖的含量，操作方法簡便、人為誤差少的蟲草菌絲中粗多糖含量的測定方法。本發明的技術方案概述如下一種蟲草菌絲體中粗多糖的測定方法，包括如下步驟(1)供試品溶液的製備a、稱取m克的蟲草菌絲體供試品，置於體積為V1HiL的容量瓶中，加入所述V1HiL容量瓶體積的2/3的蒸餾水，在100°C恆溫水浴中浸提3-8小時，定容至V1HiL,過濾，除去不溶雜質，收集濾液；b、吸取濾液V2mL，加入4倍於V2ml的無水乙醇，用於沉澱濾液中的多糖，醇沉6_8 小時，離心，收集多糖沉澱；C、將所述多糖沉澱溶於V3HiL蒸餾水中，使沉澱溶解，即得到供試品溶液；(2)標準曲線的製備a、將純度大於99. 0%的葡萄糖標準品於80°C乾燥至恆重，精確稱取0. Olg，置於 IOOml容量瓶中，加入80ml蒸餾水，超聲15分鐘，使葡萄糖充分溶解，放冷至室溫，定容搖勻，即得0. 10mg/mL葡萄糖標準溶液；b、精密吸取所述葡萄糖標準溶液 OmUO. 20ml,0. 40ml,0. 60ml、0. 80ml、1. 0ml，分別置於6個IOml具塞試管中，分別加蒸餾水使體積為1. 0ml，再加質量濃度為5%的苯酚水溶液1. 0ml，搖勻，滴加濃硫酸5. 0ml，振蕩搖勻後置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到標準待測液；用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定各個標準待測液的吸光度，以標準待測液中葡萄糖的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪製出標準曲線；(3)蟲草菌絲體中粗多糖吸收係數的確定a、供試品待測液的製備取步驟(1)獲得的供試品溶液V4mL，加蒸餾水使體積為 1. 0ml，加質量濃度為5%的苯酚水溶液1. 0ml，搖勻，滴加濃硫酸5. 0ml，振蕩搖勻後置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到供試品待測液，體積記為V5 ；b、吸收係數的確定用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定所述供試品待測液的吸光度；由步驟(2)所得標準曲線中吸光度A與濃度C的對應關係，得到供試品待測液中粗多糖的濃度C，根據朗伯-比爾定律A = ECL，計算出供試品待測液中粗多糖的吸收係數E1;(4)按步驟(1)-(3)重複η次，獲得多個供試品待測液的吸收係數&、E3, E4…… En,計算Ep E2、E3、E4……En的平均值Ε，即為蟲草菌絲體中粗多糖的吸收係數；(5)利用確定的吸收係數E根據下述公式計算蟲草菌絲體中粗多糖的含量a、按照步驟(1)所述的方法另取M克蟲草菌絲體，製備蟲草菌絲體溶液，獲得該溶液的Vp v2、v3值;b、按照步驟(3)中a所述的方法製備體積為V5的蟲草菌絲體溶液，獲得該溶液的 V4和V5值；C、用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定步驟b所得蟲草菌絲體溶液的吸光度A;d、根據步驟(4)得到的吸收係數E，按下式計算蟲草菌絲體中粗多糖含量，
、， AxK xK xV, …，X =-^~^~!~ χ 100%
EXIOOxF4 XF2 xM式中X——蟲草菌絲體中粗多糖含量，以葡萄計；A——供試品待測液的吸光度；E——吸收係數M——蟲草菌絲體質量，單位為g。本發明的方法只需對樣品進行預處理，無需進行標準曲線的繪製，根據公式即可獲得蟲草菌絲體中的粗多糖含量。省去了標準曲線法中，配置標準溶液和繪製標準曲線法的步驟，減少了實驗步驟，從而減少實驗過程中的人為誤差。同時，由於實驗步驟的減少，還縮短了實驗時間，節約了實驗試劑，既提高了工作效率又節約了成本。
圖1是蟲草菌絲體粗多糖含量測定標準曲線的製備。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發明作進一步的說明。實施例1
一種蟲草菌絲體中粗多糖的測定方法，包括如下步驟(1)供試品溶液的製備a、稱取1. Og的蟲草菌絲體供試品，置於體積為IOOmL(VllIiL)的容量瓶中，加入所述IOOmL容量瓶體積的2/3的蒸餾水，在100°C恆溫水浴中浸提5小時，定容至IOOmL,過濾， 除去不溶雜質，收集濾液；b、吸取濾液5mL(V2mL)，加入20mU4倍於V2ml)的無水乙醇，用於沉澱濾液中的多糖，4°C靜置醇沉6小時，3000rpm離心，收集多糖沉澱；C、將所述多糖沉澱溶於25mL (V3HiL)蒸餾水中，使沉澱溶解，即得到供試品溶液；(2)標準曲線的製備a、將純度大於99. 0%的葡萄糖標準品於80°C乾燥至恆重，精確稱取0. 010g，置於 IOOml容量瓶中，加入80ml蒸餾水，超聲15分鐘，使葡萄糖充分溶解，放冷至室溫，定容搖勻，即得0. 10mg/mL葡萄糖標準溶液；b、精密吸取所述葡萄糖標準溶液 0ml、0. 20ml,0. 40ml,0. 60ml,0. 80mlU. 0ml，分別置於6個10ml具塞試管中，分別加蒸餾水使體積為1. 0ml，再加質量濃度為5%的苯酚水溶液1. 0ml，搖勻，滴加濃硫酸5. 0ml，振蕩搖勻後置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到標準待測液；用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定各個標準待測液的吸光度，以標準待測液中葡萄糖的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪製出標準曲線，結果見表1和圖 1 ；表1蟲草菌絲體粗多糖含量測定標準曲線的製備
權利要求
1. 一種蟲草菌絲體中粗多糖的測定方法，其特徵包括如下步驟(1)供試品溶液的製備a、稱取m克的蟲草菌絲體供試品，置於體積為V1HiL的容量瓶中，加入所述V1HiL容量瓶體積的2/3的蒸餾水，在100°C恆溫水浴中浸提3-8小時，定容至V1HiL,過濾，除去不溶雜質， 收集濾液；b、吸取濾液V2mL，加入4倍於V2ml的無水乙醇，用於沉澱濾液中的多糖，醇沉6_8小時， 離心，收集多糖沉澱；c、將所述多糖沉澱溶於V3HiL蒸餾水中，使沉澱溶解，即得到供試品溶液；(2)標準曲線的製備a、將純度大於99.0%的葡萄糖標準品於80°C乾燥至恆重，精確稱取0. Olg，置於IOOml 容量瓶中，加入80ml蒸餾水，超聲15分鐘，使葡萄糖充分溶解，放冷至室溫，定容搖勻，即得0.10mg/mL葡萄糖標準溶液；b、精密吸取所述葡萄糖標準溶液OmUO.20ml,0. 40ml,0. 60ml,0. 80ml、1. 0ml，分別置於6個IOml具塞試管中，分別加蒸餾水使體積為1. 0ml，再加質量濃度為5%的苯酚水溶液1.0ml，搖勻，滴加濃硫酸5. 0ml，振蕩搖勻後置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到標準待測液；用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定各個標準待測液的吸光度，以標準待測液中葡萄糖的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪製出標準曲線；(3)蟲草菌絲體中粗多糖吸收係數的確定a、供試品待測液的製備取步驟(1)獲得的供試品溶液V4mL，加蒸餾水使體積為 1. 0ml，加質量濃度為5%的苯酚水溶液1. 0ml，搖勻，滴加濃硫酸5. 0ml，振蕩搖勻後置沸水浴中加熱15min，冷卻至室溫，得到供試品待測液，體積記為V5 ；b、吸收係數的確定用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定所述供試品待測液的吸光度；由步驟(2)所得標準曲線中吸光度A與濃度C的對應關係，得到供試品待測液中粗多糖的濃度C，根據朗伯-比爾定律A = ECL，計算出供試品待測液中粗多糖的吸收係數E1 ；(4)按步驟(1)-(3)重複η次，獲得多個供試品待測液的吸收係數E2、&、E4……En,if 算Ep E2、E3、E4……En的平均值E，即為蟲草菌絲體中粗多糖的吸收係數；(5)利用確定的吸收係數E根據下述公式計算蟲草菌絲體中粗多糖的含量a、按照步驟(1)所述的方法另取M克蟲草菌絲體，製備蟲草菌絲體溶液，獲得該溶液的 V V2J3 值；b、按照步驟C3)中a所述的方法製備體積為V5的蟲草菌絲體溶液，獲得該溶液的V4和 V5值；c、用光程為Icm的比色皿，在490nm波長處測定步驟b所得蟲草菌絲體溶液的吸光度A；d、根據步驟(4)得到的吸收係數E，按下式計算蟲草菌絲體中粗多糖含量，、， AxK xK xV, …，X =-^~1~！~ χ 100%ExIOOxF4 XF2 χ M式中X——蟲草菌絲體中粗多糖含量，以葡萄計； A——供試品待測液的吸光度； E——吸收係數M——蟲草菌絲體質量，單位為g。
全文摘要
本發明公開了一種蟲草菌絲體中粗多糖的測定方法，包括如下步驟(1)供試品溶液的製備；(2)標準曲線的製備；(3)蟲草菌絲體中粗多糖吸收係數的確定；(4)按步驟(1)-(3)重複n次，獲得多個供試品待測液的吸收係數E2、E3、E4……En，計算E1、E2、E3、E4……En的平均值E，即為蟲草菌絲體中粗多糖的吸收係數；(5)利用確定的吸收係數E根據下述公式計算蟲草菌絲體中粗多糖的含量，本發明的方法只需對樣品進行預處理，無需進行標準曲線的繪製，根據公式即可獲得蟲草菌絲體中的粗多糖含量。節省了步驟，從而減少檢測過程中的人為誤差。同時縮短了檢測時間，節約了實驗試劑，既提高了工作效率又節約了成本。
文檔編號G01N21/31GK102252978SQ20101060494
公開日2011年11月23日 申請日期2010年12月24日 優先權日2010年12月24日
發明者李星芝, 童豔, 趙曉娟 申請人:天津天獅生命源有限公司, 天津天獅生物發展有限公司, 天獅集團有限公司