一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法

2023-12-08 19:21:31

專利名稱：一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法
技術領域：
本發明屬於植物組織培養技術領域，特別是涉及一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法。
背景技術：
軟棗獼猴桃具有水果Vc之王的美稱，果實含可溶性固形物15%左右，總糖8. 8%, 有機酸1.5%，Vc 430mg/100g是蘋果的100倍，胺基酸933. 9mg/100g，軟棗獼猴桃汁具有阻斷致癌性亞硝基化合物合成的作用，還含有硫醇蛋白酶的水解酶和超氧化物歧化酶 (S0D)，具有養顏、提高免疫功能、抗癌、抗衰老、軟化血管、抗腫消炎的功能，營養與保健價值極高。近年來，軟棗獼猴桃受到廣大研究者和生產者的極大關注，但由於軟棗獼猴桃多數處於野生狀態，在一些山區、野生資源保護區生長，人們常年砍伐式採摘，造成軟棗獼猴桃資源破壞嚴重，生態環境也受到嚴重影響。另外，常規繁殖方法出苗慢，苗木成活率低，而且扦插、嫁接繁殖需要消耗大量的獼猴桃枝條，苗木帶菌率高，播種繁殖育出的苗木性狀不穩定，分離嚴重，使得市場上軟棗獼猴桃苗木供應量不足，嚴重限制了其當前的發展。軟棗獼猴桃的離體繁殖技術方面的研究歷史不長，自1997年朱道圩報導「軟棗獼猴桃葉片愈傷組織分化再生植株」開始，對於軟棗獼猴桃的工廠化育苗技術也逐漸展開了研究，但是目前市場對於軟棗獼猴桃苗木的需求量很大，只有通過組織培養快速繁殖技術才能滿足市場苗木稀缺的難題，而且通過離體快速繁殖技術也能將大量的野生軟棗獼猴桃資源進行保存和利用。2009年11月11日公告的CN101574056中國發明專利公開了一種軟棗獼猴桃組織培養方法，該方法分為外植體滅菌、接種、繼代增殖、生根四個階段。但由於其採用了玉米素作為生長調節劑，價格昂貴且難於採購(市場價1900元/g)，給生產造成了很大的不便的同時還大大增加了成本。

發明內容
本發明主要針對軟棗獼猴桃在東北地區均處於野生狀態，通過傳統的繁殖方式包括播種繁殖、扦插繁殖、嫁接繁殖，會出現資源破壞嚴重，繁苗速度慢、母株性狀難以保持、 植株易帶菌及苗木成活率低的問題，提出一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法，其目的在於可以縮短繁苗周期，降低育苗成本，提高苗木成活率，減少植株帶菌，保持母株優良性狀，解決品種退化的問題。為實現上述發明目的，本發明的技術方案是這樣實現的，包括以下幾個步驟 (一)培養基的配製
1)基本培養基採用常規MS培養基配方配製，用普通自來水替代配方中的蒸餾水，其中瓊脂濃度為6. 0-8. Og/L，用白糖取代蔗糖，濃度為25-30 g/L，調整基本培養基的pH值為 5. 5-6. 0 ；
2)誘導培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為0. 5-1. 5mg/L；
3)繼代培養基向基本培養基中加入6-BA (6-苄氨基嘌呤)使之濃度為1. 5-3. 2mg/L 及IBA (吲哚丁酸)使之濃度為1. 0-1. 5mg/L ；
(二)培養條件培養室內溫度控制在24-26°C，光照周期12小時/d，光照強度20001UX， 每周用紫外線進行室內消毒一次；
(三)外植體的選取與消毒
1)外植體的選取選取軟棗獼猴桃的休眠枝條，經水培後長出7-lOcm的嫩芽作為外植
體；
2)外植體的消毒將長出的嫩芽用清水衝洗1-2小時，將嫩芽上的葉片去掉，在超淨工作檯上用70%酒精消毒30s，然後用無菌水衝洗3遍，用0. 1%升汞水溶液消毒2次，每次4 分鐘，然後用無菌水衝洗3-5遍，取出用無菌濾紙吸乾水分，備用；
(四)接種將消毒好的嫩芽切成含芽切段橫放在基本培養基中，培養25-30天左右，誘導萌發出幼芽或叢芽；
(五)繼代培養將誘導出的幼芽或叢芽移至繼代培養基中，培養25-30天後，每個幼芽或叢芽分化出6-8個(增殖倍數6-8)長至4-6cm、已生根的叢生幼芽；
(六)沙床移栽將已生根的組培苗，在溫室內開瓶煉苗2-3天，將基部的繼代培養基去掉，移栽至沙床上，澆水，溫室內保持50-90%的溼度至組培苗成苗，待40-50天後，組培苗已經長出很多的毛細根系，長7-lOcm左右，轉移至營養缽中繼續生長，等待出圃。本發明的有益效果是
1)本發明與CN101574056號專利方法相比，已將軟棗獼猴桃組培技術完全用於了生產，實現了軟棗獼猴桃的工廠化育苗，從接種至組培苗馴化移栽已取得圓滿成功，而且縮短了生產周期，省去了生根培養的步驟，大大節省了生產成本，從外植體接種至生根只需 50-60天即可移栽至溫室，外植體誘導率達95%以上，繼代增殖倍數較CN101574056號專利方法可增加1. 5倍以上，生根率可達100%，較CN101574056號專利方法高13個百分點，移栽成活率95%以上。2)本發明所利用的外植體既可以是休眠枝條水培後的嫩芽，也可以選取軟棗獼猴桃成熟枝梢作為外植體，取材方便，全年可以生產。3)本發明操作技術容易掌握，程序簡單，培養基配製材料成本低廉，大大降低生產成本，本發明中培養基製作使用的均為價格低廉、取材方便的材料。如用白糖代替培養基中的蔗糖，自來水代替蒸餾水，生長調節劑用6-苄氨基嘌呤(6-BA)代替玉米素(ZT)，可以極大降低生產成本，玉米素作為生長調節劑，價格昂貴且難於採購(市場價1900元/g)，6-苄氨基嘌呤(6-BA)不僅價格低廉(6元/g)，採購容易，而且由於其也屬於細胞分裂素類物質， 不僅促進植物細胞分裂，還能促進植株生長，同時添加吲哚丁酸(IBA)可以促進植株生根， 減少誘導生根的過程，這樣不僅縮短了育苗時間20-30天，也在一定程度上降低了生產成本。在繼代培養基中使用6-苄氨基嘌呤(6-BA)代替玉米素(ZT)，大大提高了本發明的實用價值和生產價值，生產成本較CN101574056號專利方法可降低12. 68%左右。4 )移栽基質僅用河沙即可，也降低了基質的成本。5)本發明可以避免軟棗獼猴桃野生資源被破壞，實現資源的保存和利用。
具體實施例方式通過以下實施例對本發明做進一步的詳細說明。對比例
根據公告號為CN101574056的發明專利公開的方法進行組織培養，該方法分為四個步驟分別為外植體滅菌、接種、繼代增殖和生根，其中接種天數為20天，繼代增殖為 25-30天，增殖倍數為4倍，生根天數為30天，最終瓶內生根率可以達到87%，總培養天數為 75-80天。而且由於在繼代增殖階段採用了玉米素，濃度為lmg/L，使得培養成本大大增加。實施例1
(一)培養基的配製
1)基本培養基採用常規MS培養基配方配製，用普通自來水替代配方中的蒸餾水，其中瓊脂濃度為7. Og/L，用白糖取代蔗糖，濃度為^g/L，調整基本培養基的pH值為5. 8 ；
2)誘導培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為1. Omg/ L ；
3)繼代培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為2. 5mg/L及 IBA (吲哚丁酸)使之濃度為1. 25mg/L ；
(二)培養條件培養室內溫度控制在25°C，光照周期12小時/d，光照強度20001UX，每周用紫外線進行室內消毒一次；
(三)外植體的選取與消毒
1)外植體的選取選取軟棗獼猴桃的休眠枝條，經水培後長出7-lOcm的嫩芽作為外植
體；
2)外植體的消毒將長出的嫩芽用清水衝洗1.5小時，在超淨工作檯上用70%酒精消毒30s，然後用無菌水衝洗3遍，用0. 1%升汞水溶液消毒2次，每次4分鐘，然後用無菌水衝洗4遍，取出用無菌濾紙吸乾水分，備用；
(四)接種將消毒好的嫩芽切成含芽切段橫放在基本培養基中，培養25天左右，誘導萌發出幼芽或叢芽；
(五)繼代培養將誘導出的幼芽移至繼代培養基中，培養25天後，每個幼芽分化出8個 (增殖倍數為8)長至4-6cm、已生根的叢生幼芽；
(六)沙床移栽將已生根的組培苗，在溫室內開瓶煉苗2天，將基部的繼代培養基去掉， 移栽至沙床上，澆水，溫室內保持50-90%的溼度至組培苗成苗，待45天後，組培苗已經長出很多的毛細根系，長7-lOcm左右，轉移至營養缽中繼續生長，等待出圃。實施例2
(一)培養基的配製
1)基本培養基採用常規MS培養基配方配製，用普通自來水替代配方中的蒸餾水，其中瓊脂濃度為6. Og/L，用白糖取代蔗糖，濃度為30g/L，調整基本培養基的pH值為5. 5 ；
2)誘導培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為0. 5mg/ L ；
3)繼代培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為1. 5mg/L及 IBA (吲哚丁酸)使之濃度為1. 5mg/L ；
(二)培養條件培養室內溫度控制在M°C，光照周期12小時/d，光照強度20001UX，每周用紫外線進行室內消毒一次；
(三)外植體的選取與消毒1)外植體的選取選取軟棗獼猴桃的休眠枝條，經水培後長出7-lOcm的嫩芽作為外植
體；
2)外植體的消毒將長出的嫩芽用清水衝洗2小時，將嫩芽上的葉片去掉，在超淨工作檯上用70%酒精消毒30s，然後用無菌水衝洗3遍，用0. 1%升汞水溶液消毒2次，每次4分鐘，然後用無菌水衝洗3遍，取出用無菌濾紙吸乾水分，備用；
(四)接種將消毒好的嫩芽切成含芽切段橫放在基本培養基中，培養28天左右，誘導萌發出幼芽或叢芽；
(五)繼代培養將誘導出的幼芽移至繼代培養基中，培養27天後，每個幼芽分化出6個 (增殖倍數為6)長至4-6cm、已生根的叢生幼芽；
(六)沙床移栽將已生根的組培苗，在溫室內開瓶煉苗3天，將基部的培養基去掉，移栽至沙床上，澆水，保持適當的溼度至組培苗成苗，待45天後，組培苗已經長出很多的毛細根系，長7-lOcm左右，轉移至營養缽中繼續生長，等待出圃。實施例3
(一)培養基的配製
1)基本培養基採用常規MS培養基配方配製，用普通自來水替代配方中的蒸餾水，其中瓊脂濃度為8. Og/L，用白糖取代蔗糖，濃度為25g/L，調整基本培養基的pH值為6. 0 ；
2)誘導培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為1. 5mg/ L ；
3)繼代培養基向基本培養基中加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)使之濃度為3. 2mg/L及 IBA (吲哚丁酸)使之濃度為1. Omg/L ；
(二)培養條件培養室內溫度控制在26°C，光照周期12小時/d，光照強度20001UX，每周用紫外線進行室內消毒一次；
(三)外植體的選取與消毒
1)外植體的選取選取軟棗獼猴桃的休眠枝條，經水培後長出7-lOcm的嫩芽作為外植
體；
2)外植體的消毒將長出的嫩芽用清水衝洗2小時，在超淨工作檯上用70%酒精消毒 30s，然後用無菌水衝洗3遍，用0. 1%升汞水溶液消毒2次，每次4分鐘，然後用無菌水衝洗 5遍，取出用無菌濾紙吸乾水分，備用；
(四)接種將消毒好的嫩芽切成含芽切段橫放在基本培養基中培養30天左右，誘導萌發出叢芽；
(五)繼代培養將誘導出的叢芽移至繼代培養基中，培養30天後，每個幼芽或叢芽分化出7個(增殖倍數7)長至4-6cm、已生根的叢生幼芽；
(六)沙床移栽將已生根的組培苗，在溫室內開瓶煉苗2-3天，將基部的繼代培養基去掉，移栽至沙床上，澆水，溫室內保持50-90%的溼度至組培苗成苗，待40-50天後，組培苗已經長出很多的毛細根系，長7-lOcm左右，轉移至營養缽中繼續生長，等待出圃。與對比例相比，配製的繼代培養基中由於用6-BA (6-苄氨基嘌呤)替代了 ZT (玉米素)，使得每株組培苗的生產成本降低了 0. 395元。從接種成活至繼代生根需60天，比對比例縮短了 15-20天，誘導成活率94%以上，增殖倍數為7倍，瓶內生根率96%，沙床移栽生根率92%以上，明顯高於對比例。應用本專利技術與對比例技術生產組培苗成本比較見表1。
表1應用本專利技術與對比例技術生產組培苗成本比較 (按年產100萬株組培苗的生產規模估算)
權利要求
1. 一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法，其特徵為 包括以下幾個步驟(一)培養基的配製1)基本培養基採用常規MS培養基配方配製，用普通自來水替代配方中的蒸餾水，其中瓊脂濃度為6. 0-8. Og/L，用白糖取代蔗糖，濃度為25-30 g/L，調整基本培養基的pH值為 5. 5-6. 0 ；2)誘導培養基向基本培養基中加入6-BA即6-苄氨基嘌呤，使之濃度為0.5-1. 5mg/L；3)繼代培養基向基本培養基中加入6-BA即6-苄氨基嘌呤，使之濃度為1.5-3. 2mg/ L及IBA即吲哚丁酸，使之濃度為1. 0-1. 5mg/L ；(二)培養條件培養室內溫度控制在24-26°C，光照周期12小時/d，光照強度20001UX， 每周用紫外線進行室內消毒一次；(三)外植體的選取與消毒1)外植體的選取選取軟棗獼猴桃的休眠枝條，經水培後長出7-lOcm的嫩芽作為外植體；2)外植體的消毒將長出的嫩芽用清水衝洗1-2小時，將嫩芽上的葉片去掉，在超淨工作檯上用70%酒精消毒30s，然後用無菌水衝洗3遍，用0. 1%升汞水溶液消毒2次，每次4 分鐘，然後用無菌水衝洗3-5遍，取出用無菌濾紙吸乾水分，備用；(四)接種將消毒好的嫩芽切成含芽切段橫放在基本培養基中，培養25-30天左右，誘導萌發出幼芽或叢芽；(五)繼代培養將誘導出的幼芽或叢芽移至繼代培養基中，培養25-30天後，每個幼芽或叢芽分化出6-8個即增殖倍數為6-8，長至4-6cm、已生根的叢生幼芽；(六)沙床移栽將已生根的組培苗，在溫室內開瓶煉苗2-3天，將基部的繼代培養基去掉，移栽至沙床上，澆水，溫室內保持50-90%的溼度至組培苗成苗，待40-50天後，組培苗已經長出很多的毛細根系，長7-lOcm左右，轉移至營養缽中繼續生長，等待出圃。
全文摘要
本發明屬於植物組織培養技術領域，特別是涉及一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗方法。其主要技術特徵為包括培養基的配製、外植體的選取與消毒、接種、繼代培養、沙床移栽五個步驟。主要針對軟棗獼猴桃在東北地區均處於野生狀態，通過傳統的繁殖方式包括播種繁殖、扦插繁殖、嫁接繁殖，會出現後代性狀分離嚴重、雌雄株難以區分，資源破壞嚴重，繁苗速度慢、母株性狀難以保持、植株易帶菌及苗木成活率低等問題，提出一種軟棗獼猴桃的工廠化育苗技術，將誘導出的幼芽經繼代培養後直接進行沙床移栽，省略了生根培養過程，可以縮短繁苗周期至50-60天，使育苗成本大大降低，苗木成活率明顯提高，減少植株帶菌，保持母株優良性狀，解決品種退化的問題。
文檔編號A01H4/00GK102177847SQ201110053609
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月7日 優先權日2011年3月7日
發明者劉長江, 孫曉榮, 梁爽, 譚昌華 申請人:瀋陽農業大學