一種抗壞血酸幹擾多項尿液分析試紙的製作方法
2024-04-02 10:56:05 1
本發明屬於體外診斷試劑領域,具體涉及一種抗壞血酸幹擾多項尿液分析試紙。
背景技術:
中華檢驗醫學大辭典對尿液分析定義為:用目測、理學、化學(應強調定性、定量)、顯微鏡及其他儀器(各種尿液分析儀、滲透壓計等)對尿液標本進行分析,以達到對泌尿、循環、肝、膽、內分泌等疾病進行診斷、療效觀察及預後判斷等目的。尿液分析是目前各實驗室三大常規檢驗之一,在醫學實踐領域中扮演著重要角色,對於疾病的診療起著十分重要的作用。目前,幹化學試紙條各項檢測的反應原理多數是通過尿液中的待測物與試紙條上化學物質進行反應以檢測尿液中待測物的有無和含量,部分檢測項目如葡萄糖、潛血(紅細胞)、膽紅素、亞硝酸鹽和尿pH等通過氧化還原反應及pH改變的原理進行檢測,故而尿液中含有強還原劑抗壞血酸(Vc)時,可抑制上述各種尿液成分檢測的氧化還原反應,從而常常造成假陰性或弱陽性的檢測結果,幹擾臨床的診斷和治療。
目前,尿液檢測包括白細胞LEU、亞硝酸鹽NIT、尿膽原URO、蛋白質PRO、酸鹼度pH、潛血BLD、抗壞血酸Vc、比重SG、酮體KET、膽紅素BIL、葡萄糖GLU等多個檢測項目。市場上的尿液分析試紙條最常見的是8聯、10聯和11聯試紙,由於尿液中的有形成分複雜,因此很易受到幹擾物質的影響,例如,尿液中潛血(紅細胞)、葡萄糖、膽紅素和亞硝酸鹽檢測受Vc幹擾作用最明顯。由於其氧化還原反應被Vc抑制而造成檢測結果的不準確性,嚴重的甚至導致錯誤的診斷結果,不可避免地出現假性結果,存在較大的醫療事故隱患。雖然鏡檢是尿液分析的金標準,但鏡檢存在不精密性和勞動強度大等弊端。因此採用一定的方法消除或減小尿液檢測的幹擾因素顯得尤為重要。
目前陸續有廠家開發出11聯試紙,即在10聯試紙的基礎上增設Vc項目檢測塊,在該檢測塊陽性時,可由醫生憑經驗判斷哪幾個項目是因為幹擾得到的錯誤結果,從而進行修正或叮囑其消除尿液中Vc後留樣再測,但當尿中有其它還原劑(如半胱氨酸、硫代硫酸鈉等)時,可使Vc結果偏高;在鹼性尿中Vc極不穩定,容易造成測定結果偏低,因此有可能造成錯誤的修正。有些廠家對檢測結果容易受到Vc幹擾的葡萄糖、血、白細胞、膽紅素、亞硝酸鹽等項目的配方進行調整,增強了檢測塊的抗Vc幹擾能力,能保證在Vc濃度低於1.4mmol/L時檢測結果仍不受影響,一定程度上提高了檢驗結果的準確性,但Vc濃度高於1.4mmol/L時仍可對檢測結果造成幹擾。
技術實現要素:
為了解決現有技術的問題,本發明提供了一種可以抵抗高濃度抗壞血酸幹擾的尿液分析試紙條,使得抗壞血酸濃度高於1.4mmol/L時檢測結果仍不受影響。其中白細胞試劑塊對抗壞血酸的抗幹擾的濃度範圍為0~5.6mmol/L,膽紅素試劑塊對抗壞血酸的抗幹擾的濃度範圍為0~16.8mmol/L,亞硝酸鹽試劑塊對抗壞血酸的抗幹擾的濃度範圍為0~11.2mmol/L,葡萄糖試劑塊對抗壞血酸的抗幹擾的濃度範圍為0~2.8mmol/L,潛血試劑塊對抗壞血酸的抗幹擾的濃度範圍為0~2.8mmol/L。
為了達到上述目的,本發明採用如下技術方案:
一種抗壞血酸幹擾多項尿液分析試紙,包括基片,基片上按順序相互間隔的從頂端到末端依次排列有下列試紙塊:尿膽原、潛血、膽紅素、酮體、白細胞、葡萄糖、蛋白質、酸鹼度、亞硝酸鹽、比重、抗壞血酸和空白塊;或白細胞、亞硝酸鹽、尿膽原、蛋白質、酸鹼度、潛血、比重、酮體、膽紅素、葡萄糖、抗壞血酸和空白塊;
其中,(1)白細胞試紙塊的製作步驟如下:
依次將氯化鈉8.0-15.0g、硼砂35.0-60.0g、硼酸4.0-6.0g、吡咯酯3.5-4.5g和1-重氮-2-萘酚-4-磺酸2.0-4.0g溶解於300-500mL去離子水中,溶解完全後調節pH為8.5~9.5之間,然後加入氯酸鈉2.0-5.0g和表面活性劑1.0-5.0mL,溶解完成後用去離子水定容至1000mL,即得白細胞檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
(2)膽紅素試紙塊的製作步驟如下:
依次將10%的表面活性劑溶液40-70mL、水楊酸15.0-40.0g、2,4-二氯苯胺重氮鹽2.0-6.0g、加速劑45-70g和氯酸鈉2.5-10.0g溶解於500mL甲醇中,溶解完全後用去離子水定容1000mL,即得膽紅素檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
(3)亞硝酸鹽試紙塊的製作步驟如下:
依次將表面活性劑15-40.0g、N-(1-萘基)-乙二胺鹽酸鹽30.0-55.0g、對氨基苯磺醯胺18.0-35.0g和氯酸鈉1.0-8.0g溶解於100-200mL甲醇中,溶解完全後加入丙酮450mL,混勻後用甲醇定容至1000mL,即得亞硝酸鹽檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
(4)葡萄糖試紙塊的製作步驟如下:
依次將磷酸氫二鈉9.5g、檸檬酸50.0g、表面活性劑8.0-15.0g、碘化鉀20.0-40.0g、過氧化物酶150-250KU、葡萄糖氧化酶500-650KU、1%的藍色染料試液4.0-8.0mL和酶穩定劑10-20mL,溶解於500-700mL去離子水中,然後加入碘酸鉀1.8-3.0g,溶解完全後用去離子水定容至1000mL,即得葡萄糖檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
(5)潛血試紙塊的製作步驟如下:
依次將磷酸二氫鈉45.0g、10%的表面活性劑溶液20-40mL溶解於400-600mL去離子水中,溶解完全後用10mol/L的丙二酸溶液調節溶液pH=5.5±0.05,然後用去離子水定容至1000mL得到檢測液A;
依次量取10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液300-350mL、二甲亞碸3.0-6.0mL、過氧化羥基異丙苯4.0-8.0mL、10%的染料試液10-18mL,溶解於300-400mLN,N-二甲基甲醯胺溶液中,然後加入鄰聯甲苯胺3.0-6.0g、碘酸鉀1.5-4.0g,溶解完全後用N,N-二甲基甲醯胺定容至1000mL,得到檢測液B;
將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液A中充分浸潤,烘乾後,再將其置於檢測液B中充分浸潤,第二次烘乾後,分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切,最終獲得試紙條成品;
所述(1)中表面活性劑選自吐溫-20、吐溫-80或曲拉通X-100,優選為吐溫-20。
所述(2)中表面活性劑選自聚乙烯基醚、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸鈉或聚乙烯醇,優選為聚乙烯吡咯烷酮。
所述(2)中加速劑選自硝酸鹽、亞硝酸鹽、溴酸鹽、碘酸鹽或鉬酸鹽,優選為亞硝酸鹽。
所述(3)中的表面活性劑選自聚乙烯吡咯烷酮PVPK15、聚乙烯吡咯烷酮PVPK30或聚乙烯吡咯烷酮PVPK40,優選為聚乙烯吡咯烷酮PVPK30。
所述(4)中表面活性劑選自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基醚、聚乙烯醇或聚乙二醇,優選為聚乙烯醇;藍色染料試液選自考馬斯亮藍G250或亮藍,優選為亮藍,酶穩定劑選自明膠、乙酸鈉、吐溫、乙基纖維素或乙二醇中的一種或多種。
優選的,所述酶穩定劑為1g/L的明膠、80g/L的乙酸鈉、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐溫混合液。
所述(5)中表面活性劑選自聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸鈉、聚乙烯基醚,優選為十二烷基硫酸鈉;染料試液選自檸檬黃、日落黃、顏料黃,優選為檸檬黃。
優選的,在(1)~(5)中各個試紙的製備過程中,添加劑按照所述順序加入,在前一試劑溶解完全後加入後一試劑。
優選的,在(1)~(5)中各個試紙的製備過程中,環境溫度為23~25℃,溼度為15%~35%。
所述試紙抗壞血酸性能驗證方法為:配製各項目的第一個非陰性量級的抗壞血酸標液,即抗壞血酸濃度為5.6mmol/L的「±」(15cells/μL)的白細胞標液、抗壞血酸濃度為16.8mmol/L的「+」(17μmol/L)的膽紅素標液、抗壞血酸濃度11.2mmol/L的「+」(18μmol/L)的亞硝酸鹽標液、抗壞血酸濃度為2.8mmol/L的「±」(2.8mmol/L)的葡萄糖標液和抗壞血酸濃度2.8mmol/L的「+」(10cells/μL)的潛血標液,分別對試紙條進行顯色測試,用尿液分析儀判讀測定結果,試驗結果均不得出現陰性。
有益效果:
本發明通過在試紙塊檢測液中加入氧化性物質氯酸鈉和碘酸鉀,消弱了具有強還原性的抗壞血酸對尿液分析檢測過程中的重氮偶合反應和氧化還原反應的幹擾,提高了利用幹化學分析試紙條進行尿液分析檢測的準確性,具有很好的臨床適用性。
具體實施方式
下面結合實施例進一步說明本發明。
實施例1
一種抗壞血酸幹擾多項尿液分析試紙,包括基片,基片上按順序相互間隔的從頂端到末端依次排列有下列試劑塊:尿膽原、潛血、膽紅素、酮體、白細胞、葡萄糖、蛋白質、酸鹼度、亞硝酸鹽、比重、抗壞血酸和空白塊;
其中1、白細胞試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水350mL加入1000mL燒杯中,然後依次加入準確稱量的氯化鈉11.8g、硼砂50.0g、硼酸5.2g、吡咯酯4.0g、1-重氮-2-萘酚-4-磺酸3.0g,用玻璃棒攪拌溶解,在前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,其中硼砂需55℃水浴加熱溶解。所有試劑均充分溶解後,冷卻至室溫,用pH計進行pH檢測,pH應保持在8.5-9.5之間。待pH檢測合格後,加入氯酸鈉3.5g,充分溶解後,加入2.5mL吐溫-20,然後全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得白細胞檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
2、膽紅素試紙塊塊的製備過程如下:
用量筒量取甲醇500mL加入1000mL燒杯中,加入10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液60mL,並用玻璃棒攪勻。依次加入準確稱量的水楊酸25.0g(用塑料藥匙)、2,4-二氯苯胺重氮鹽5.0g、亞硝酸鹽68.5g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,直至所有試劑完全溶解後,加入氯酸鈉2.80g,充分溶解後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得膽紅素檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
3、亞硝酸鹽試紙塊塊的製備過程如下:
用量筒量取甲醇125mL加入1000mL燒杯中,依次加入準確稱量的聚乙烯吡咯烷酮PVPK3025.5g、N-(1-萘基)-乙二胺鹽酸鹽45.0g、對氨基苯磺醯胺27.5g、氯酸鈉2.0g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,充分溶解後,加入丙酮450mL,最後全部轉移至1000mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得亞硝酸鹽檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
4、葡萄糖試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水650mL加入1000mL燒杯中,依次加入準確稱量的磷酸氫二鈉9.5g、檸檬酸50.0g、聚乙烯醇12.5g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑。所有試劑均充分溶解後,依次加入準確稱量的碘化鉀35.0g、過氧化物酶150KU、葡萄糖氧化酶550KU,攪拌,使其充分溶解。然後加入1%的亮藍染料試液6.5mL,1g/L明膠、80g/L的乙酸鈉、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐溫的混合液15mL,攪勻。最後加入碘酸鉀1.8g,充分溶解後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得葡萄糖檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
5、潛血試紙塊塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水500mL加入1000mL燒杯中。準確稱量磷酸二氫鈉45.0g加入燒杯中,用玻璃棒攪拌,待充分溶解後,加入10%的十二烷基硫酸鈉溶液25mL,並用玻璃棒攪勻。用10mol/L的丙二酸溶液調節,pH計監測,調節溶液pH=5.5±0.05。然後全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,得檢測液A;
用量筒量取N,N-二甲基甲醯胺365mL加入1000mL燒杯中。依次量取10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液335mL、二甲亞碸5.5mL、過氧化羥基異丙苯6.5mL、10%的檸檬黃染料試液15mL,加入燒杯中,並用玻璃棒攪勻。然後依次加入準確稱量的鄰聯甲苯胺4.0g、碘酸鉀2.6g,用玻璃棒攪拌,溶解完全後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用N,N-二甲基甲醯胺定容至刻度,得檢測液B;
將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液A中充分浸潤,烘乾後,再將其置於檢測液B中充分浸潤,第二次烘乾後,分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切,最終獲得試紙條成品。
其他試紙塊的製作步驟如下:
酮體試紙的製作步驟如下:
量取適量去離子水,加入50g Tris試劑,待充分溶解後,緩慢加入七水硫酸鎂300g,溶解完全後,加入依次量取的10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液12.5mL、吐溫-20溶液4mL,混勻,再稱取亞硝基鐵氰化鈉45g,溶解完全後,用去離子水定容至1000mL,即得酮體檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品;
酸鹼度試紙塊的製作步驟如下:
量取乙醇330mL,依次加入準確稱取的甲基紅試劑0.2g,溴百裡香酚藍1.5g,攪拌至充分溶解;依次加入準確量取的吐溫-80溶液4mL、10%的聚乙烯醇溶液300mL,混勻後用去離子水定容至1000mL,即得酸鹼度檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品;
蛋白質試紙塊的製作步驟如下:
量取適量去離子水於燒杯中,依次加入準確稱取的檸檬酸50.0g、檸檬酸鈉36.5g,攪拌至充分溶解;依次加入準確量取的20%的吐溫-20溶液20.5mL、乙醇500mL、0.1%的檸檬黃溶液3mL,混勻後加入四溴(苯)酚藍鈉鹽0.5g,充分溶解後後用去離子水定容至1000mL,即得蛋白質檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品;
比重試紙塊的製作步驟如下:
該過程需配製A、B兩種溶液,
A液:佔總配製量的50%(500mL)
稱取溴百裡香酚藍0.05g,加入乙醇80mL,充分溶解後用去離子水定容至500mL,即得A液;
B液:佔總配製量的50%(500mL)
量取3%的聚乙烯基醚溶液500mL,用6mol/L的NaOH溶液調節溶液pH=7.2±0.1,即為配製完成的B液;
將A液緩慢倒入B液中,混勻後即得比重檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品;
尿膽原試紙塊的製作步驟如下:
依次量取去離子水400mL、甲醇250mL、8%的聚乙烯基醚溶液40mL,攪拌均勻;依次加入準確稱量的5-磺基水楊酸90.5g、4-二乙氨基苯甲醛0.3g、三乙醇胺硼酸鹽12g、亞硝酸鹽85.5g,溶解完全後用去離子水定容至1000mL,即得尿膽原檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品;
抗壞血酸試紙塊的製作步驟如下:
該過程需配製A、B兩種溶液,
A液:
量取去離子水300mL,加入準確稱取的磷酸二氫鈉25g,攪拌至完全溶解;用6mol/L的NaOH溶液調節溶液pH=6.8±0.1,加入20%的聚乙烯吡咯烷酮溶液30mL,攪勻、備用;
B液:
量取去離子水300mL,加入準確稱取的2,6-二氯靛酚鈉鹽水合物1.0g,攪拌至完全溶解;
將B液緩慢倒入A液中,混勻後,依次加入準確量取的10%的乙基橙鈉鹽溶液1.0mL、20%的吐溫-20溶液2.0mL,攪勻即得抗壞血酸檢測液;將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
各試紙塊製備過程中,車間進行溫溼度控制,溫度23℃-25℃,溼度15%-35%。
試劑條抗Vc性能驗證
配製抗壞血酸濃度為5.6mmol/L的「±」(15cells/μL)的白細胞標液、抗壞血酸濃度為16.8mmol/L的「+」(17μmol/L)的膽紅素標液、抗壞血酸濃度11.2mmol/L的「+」(18μmol/L)的亞硝酸鹽標液、抗壞血酸濃度為2.8mmol/L的「±」(2.8mmol/L)的葡萄糖標液和抗壞血酸濃度2.8mmol/L的「+」(10cells/μL)的潛血標液,並分別對試紙條進行顯色測試,用尿液分析儀判讀測定結果,試驗結果均未出現陰性。
所述白細胞試紙塊、膽紅素試紙塊和亞硝酸鹽試劑塊中加入抗壞血酸試劑氯酸鈉,所述葡萄糖試紙塊和潛血試紙塊中加入抗壞血酸試劑碘酸鉀。
在本實施例中,白細胞試紙塊中氯酸鈉的質量分數為0.35%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對吡咯酚和重氮鹽偶合產生的抑制作用;膽紅素試紙塊中氯酸鈉的質量分數為0.28%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對膽紅素和2,4-二氯苯胺重氮鹽偶合產生的抑制作用;亞硝酸鹽試劑塊中氯酸鈉的質量分數為0.2%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化的抑制作用;葡萄糖試紙塊中碘酸鉀的質量分數為0.18%,加入氧化劑碘酸鉀,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對葡萄糖酶法測定中過氧化氫氧化色原的反應產生的幹擾,因為強酸性條件下碘酸鉀和碘化鉀會反應析出碘單質,故整個反應應在中性或弱鹼性條件下進行;潛血試紙塊中碘酸鉀的質量分數為0.26%,加入氧化劑碘酸鉀,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對潛血試劑塊中的氧化還原反應產生的競爭作用。
實施例2
一種抗壞血酸幹擾多項尿液分析試紙,包括基片,基片上按順序相互間隔的從頂端到末端依次排列有下列試劑塊:白細胞、亞硝酸鹽、尿膽原、蛋白質、酸鹼度、潛血、比重、酮體、膽紅素、葡萄糖、抗壞血酸和空白塊;
其中1、白細胞試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水350mL加入1000mL燒杯中,然後依次加入準確稱量的氯化鈉8.0g、硼砂35.0g、硼酸4.0g、吡咯酯3.5g、1-重氮-2-萘酚-4-磺酸2.0g,用玻璃棒攪拌溶解,在前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,其中硼砂需55℃水浴加熱溶解。所有試劑均充分溶解後,冷卻至室溫,用pH計進行pH檢測,pH應保持在8.5-9.5之間。待pH檢測合格後,加入氯酸鈉2.0g,充分溶解後,加入1.0mL吐溫-80,然後全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得白細胞檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
2、膽紅素試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取甲醇500mL加入1000mL燒杯中,加入10%的聚乙烯醇溶液40mL,並用玻璃棒攪勻。依次加入準確稱量的水楊酸15.0g(用塑料藥匙)、2,4-二氯苯胺重氮鹽2.0g、硝酸鹽45g,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,直至所有試劑完全溶解後,加入氯酸鈉2.5g,充分溶解後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得膽紅素檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
3、亞硝酸鹽試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取甲醇125mL加入1000mL燒杯中,依次加入準確稱量的聚乙烯吡咯烷酮PVPK4020.0g、N-(1-萘基)-乙二胺鹽酸鹽30.0g、對氨基苯磺醯胺18.0g、氯酸鈉1.0g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,充分溶解後,加入丙酮450mL,最後全部轉移至1000mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得亞硝酸鹽檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
4、葡萄糖試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水650mL加入1000mL燒杯中,依次加入準確稱量的磷酸氫二鈉9.5g、檸檬酸50.0g、聚乙烯吡咯烷酮8.0g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑。所有試劑均充分溶解後,依次加入準確稱量的碘化鉀20.0g、過氧化物酶250KU、葡萄糖氧化酶500KU,攪拌,使其充分溶解。然後加入1%的考馬斯亮藍G250染料試液4.0mL,1g/L明膠、80g/L的乙酸鈉、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐溫的混合液10mL,攪勻。最後加入碘酸鉀2.0g,充分溶解後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得葡萄糖檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
5、潛血試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水500mL加入1000mL燒杯中,準確稱量磷酸二氫鈉45.0g加入燒杯中,用玻璃棒攪拌,待充分溶解後,加入10%的聚乙烯基醚溶液20mL並用玻璃棒攪勻。用10mol/L的丙二酸溶液調節,pH計監測,調節溶液pH=5.5±0.05。然後全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,得檢測液A;
用量筒量取N,N-二甲基甲醯胺365mL加入1000mL燒杯中,依次量取10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液300mL、二甲亞碸3.0mL、過氧化羥基異丙苯4.0mL、10%的日落黃染料試液10mL,加入燒杯中,並用玻璃棒攪勻。然後依次加入準確稱量的鄰聯甲苯胺3.0g、碘酸鉀1.5g,用玻璃棒攪拌,溶解完全後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用N,N-二甲基甲醯胺定容至刻度,得檢測液B;
將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液A中充分浸潤,烘乾後,再將其置於檢測液B中充分浸潤,第二次烘乾後,分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切,最終獲得試紙條成品。
除白細胞、膽紅素、亞硝酸鹽、葡萄糖、潛血試紙塊外,其餘試紙塊的製備過程與實施例1相同。
各試紙塊製備過程中,車間進行溫溼度控制,溫度23℃-25℃,溼度15%-35%。
試劑條抗Vc性能驗證
抗壞血酸濃度為5.6mmol/L的「±」(15cells/μL)的白細胞標液、抗壞血酸濃度為16.8mmol/L的「+」(17μmol/L)的膽紅素標液、抗壞血酸濃度11.2mmol/L的「+」(18μmol/L)的亞硝酸鹽標液、抗壞血酸濃度為2.8mmol/L的「±」(2.8mmol/L)的葡萄糖標液和抗壞血酸濃度2.8mmol/L的「+」(10cells/μL)的潛血標液,分別對試紙條進行顯色測試,用尿液分析儀判讀測定結果,試驗結果均未出現陰性。
所述白細胞試紙塊、膽紅素試紙塊和亞硝酸鹽試劑塊中加入抗壞血酸試劑氯酸鈉,所述葡萄糖試紙塊和潛血試紙塊中加入抗壞血酸試劑碘酸鉀。
在本實施例中,白細胞試紙塊中氯酸鈉的質量分數為0.2%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對吡咯酚和重氮鹽偶合產生的抑制作用;膽紅素試紙塊中氯酸鈉的質量分數為0.25%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對膽紅素和2,4-二氯苯胺重氮鹽偶合產生的抑制作用;亞硝酸鹽試劑塊中氯酸鈉的質量分數為0.1%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化的抑制作用;葡萄糖試紙塊中碘酸鉀的質量分數為0.2%,加入氧化劑碘酸鉀,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對葡萄糖酶法測定中過氧化氫氧化色原的反應產生的幹擾,因為強酸性條件下碘酸鉀和碘化鉀會反應析出碘單質,故整個反應應在中性或弱鹼性條件下進行;潛血試紙塊中碘酸鉀的質量分數為0.15%,加入氧化劑碘酸鉀,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對潛血試劑塊中的氧化還原反應產生的競爭作用。
實施例3
一種抗壞血酸幹擾多項尿液分析試紙,包括基片,基片上按順序相互間隔的從頂端到末端依次排列有下列試劑塊:白細胞、亞硝酸鹽、尿膽原、蛋白質、酸鹼度、潛血、比重、酮體、膽紅素、葡萄糖、抗壞血酸和空白塊;
其中1、白細胞試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取去離子水350mL加入1000mL燒杯中,然後依次加入準確稱量的氯化鈉15.0g、硼砂60.0g、硼酸6.0g、吡咯酯4.5g、1-重氮-2-萘酚-4-磺酸4.0g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,其中硼砂需55℃水浴加熱溶解。所有試劑均充分溶解後,冷卻至室溫,用pH計進行pH檢測,pH應保持在8.5-9.5之間。待pH檢測合格後,加入氯酸鈉5.0g,充分溶解後,加入5.0mL曲拉通X-100,然後全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得白細胞檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
2、膽紅素試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取甲醇500mL加入1000mL燒杯中,加入10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液70mL,並用玻璃棒攪勻。依次加入準確稱量的水楊酸40.0g(用塑料藥匙)、2,4-二氯苯胺重氮鹽6.0g、碘酸鹽70g,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,直至所有試劑完全溶解後,加入氯酸鈉10.0g,充分溶解後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得膽紅素檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
3、亞硝酸鹽試紙塊的製備過程如下:
用量筒量取甲醇125mL加入1000mL燒杯中,依次加入準確稱量的聚乙烯吡咯烷酮PVPK15 40.0g、N-(1-萘基)-乙二胺鹽酸鹽55.0g、對氨基苯磺醯胺35.0g、氯酸鈉8.0g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑,充分溶解後,加入丙酮450mL,最後全部轉移至1000mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,即得亞硝酸鹽檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
4、葡萄糖試紙塊的製備過程如下
用量筒量取去離子水650mL加入1000mL燒杯中,依次加入準確稱量的磷酸氫二鈉9.5g、檸檬酸50.0g、聚乙二醇15.0g,用玻璃棒攪拌溶解,注意只有前一個試劑充分溶解後才可加入後一個試劑。然後依次加入準確稱量的碘化鉀40.0g、過氧化物酶200KU、葡萄糖氧化酶650KU,攪拌,使其充分溶解。然後加入1%的亮藍染料試液8.0mL、乙酸鈉20mL,攪勻。最後加入碘酸鉀3.0g,充分溶解後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,即得葡萄糖檢測液。將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液中充分浸潤,經過烘乾、分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切後獲得試紙條成品。
5、潛血試紙塊的製備過程如下
用量筒量取去離子水500mL加入1000mL燒杯中,準確稱量磷酸二氫鈉45.0g加入燒杯中,用玻璃棒攪拌,待充分溶解後,量取10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液40mL加入燒杯中,並用玻璃棒攪勻。用10mol/L的丙二酸溶液調節,pH計監測,調節溶液pH=5.5±0.05。然後全部轉移至1000mL容量瓶中,用去離子水定容至刻度,得檢測液A;
用量筒量取N,N-二甲基甲醯胺400mL加入1000mL燒杯中,依次量取10%的聚乙烯吡咯烷酮溶液350mL、二甲亞碸6.0mL、過氧化羥基異丙苯8.0mL、10%的日落黃染料試液18mL,加入燒杯中,並用玻璃棒攪勻。然後依次加入準確稱量的鄰聯甲苯胺6.0g、碘酸鉀4.0g,用玻璃棒攪拌,溶解完全後,全部轉移至1000mL容量瓶中,用N,N-二甲基甲醯胺定容至刻度,得檢測液B;
將規格為120mm*100mm的whatman濾紙在檢測液A中充分浸潤,烘乾後,再將其置於檢測液B中充分浸潤,第二次烘乾後,分切並與PVC板、雙面膠和其他項目檢測塊一起複合、滾切,最終獲得試紙條成品。
除白細胞、膽紅素、亞硝酸鹽、葡萄糖、潛血試紙塊外,其他試紙塊的製作過程與實施例1中相同。
各試紙塊製備過程中,車間進行溫溼度控制,溫度23℃-25℃,溼度15%-35%。
試劑條抗Vc性能驗證
抗壞血酸濃度為5.6mmol/L的「±」(15cells/μL)的白細胞標液、抗壞血酸濃度為16.8mmol/L的「+」(17μmol/L)的膽紅素標液、抗壞血酸濃度11.2mmol/L的「+」(18μmol/L)的亞硝酸鹽標液、抗壞血酸濃度為2.8mmol/L的「±」(2.8mmol/L)的葡萄糖標液和抗壞血酸濃度2.8mmol/L的「+」(10cells/μL)的潛血標液,分別對試紙條進行顯色測試,用尿液分析儀判讀測定結果,試驗結果均未出現陰性。
在實施例中,白細胞試紙塊中氯酸鈉的質量分數為0.5%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對吡咯酚和重氮鹽偶合產生的抑制作用;膽紅素試紙塊中氯酸鈉的質量分數為1.0%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對膽紅素和2,4-二氯苯胺重氮鹽偶合產生的抑制作用;亞硝酸鹽試劑塊中氯酸鈉的質量分數為0.8%,加入氧化劑氯酸鈉,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對亞硝酸根與對氨基苯磺酸重氮化的抑制作用;葡萄糖試紙塊中碘酸鉀的質量分數為0.3%,加入氧化劑碘酸鉀,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對葡萄糖酶法測定中過氧化氫氧化色原的反應產生的幹擾,因為強酸性條件下碘酸鉀和碘化鉀會反應析出碘單質,故整個反應應在中性或弱鹼性條件下進行;潛血試紙塊中碘酸鉀的質量分數為0.4%,加入氧化劑碘酸鉀,以減弱或抵消高濃度的具有強還原性的Vc對潛血試劑塊中的氧化還原反應產生的競爭作用。
上述雖然結合實施例對本發明的具體實施方式進行了描述,但並非對本發明保護範圍的限制,所屬領域技術人員應該明白,在本發明的技術方案的基礎上,本領域技術人員不需要付出創造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發明的保護範圍以內。