一種板慄花提取物及其應用的製作方法
2024-04-06 16:19:05
本發明涉及一種板慄花提取物及其應用。
背景技術：
慄(Castanea mollissima Bl.)，別稱板慄，是雙子葉植物綱山毛櫸目殼鬥科慄屬慄種植物的總稱。在古書中最早見於《詩經》一書，可知慄的栽培史在中國至少有二千五百餘年的歷史。板慄的植物學特徵：高達20米的喬木，胸徑80釐米，冬芽長約5毫米，小枝灰褐色，託葉長圓形，長10-15毫米，被疏長毛及鱗腺；葉橢圓至長圓形、長11-17釐米、寬稀達7釐米，葉柄長1-2釐米；雄花序長10-20釐米、花序軸被毛、花3-5朵聚生成簇，雌花1-3(-5)朵發育結實、花柱下部被毛；堅果高1.5-3釐米，寬1.8-3.5釐米；花期4-6月，果期8-10月。中醫認為板慄具有補腎健脾、強身壯骨，益胃平肝等功效，因此慄子又有「腎之果」的美名。板慄作為中國傳統的果樹，歷史悠久，資源豐富，分布廣泛，是重要的出口產品。中國的板慄種植區，分布於遼寧、北京、河北、山東、河南、陝西黃龍縣等地。
板慄的品種類型多達300餘個以上。按其分布區域，基本上可劃分為兩大品種群，即北方品種群(華北地方品種群)和南方品種群(長江流域地方品種群)。從地理區域劃分，板慄主要分為：①遷西板慄(北京以東燕山山脈出產的板慄，主產區在河北省興隆、遵化、遷西一帶，又稱「燕山板慄」、「興隆板慄」等)；②丹東板慄(產於遼寧省丹東市)；③鎮安板慄(產於陝南秦巴山區)；④羅田板慄(產於鄂東羅田)；⑤郯城板慄(產於山東省郯城縣)；⑥信陽板慄(產於河南省信陽市)；⑦邵店板慄(產於江蘇邵店)。現有的板慄品種主要有：①華豐：山東省果樹研究所從野雜12(野板慄×板慄)×板慄的雜交後代中選育；②燕山魁慄：河北省遷西縣從實生慄樹中選出，原代號為107；③紅慄1號：山東省果樹研究所從紅慄×泰安薄殼雜交後代中篩選；④郯城3號山東省果樹研究所從實生慄樹中選出；⑤石豐：山東省海陽縣從實生慄中選出；⑥紅光慄：山東省萊西市店埠鄉從實生慄樹中選出；⑦燕山早豐：河北省農林科學院昌黎果樹研究所從遷西縣楊家峪村實生樹中選出；⑧燕奎：河北省昌黎果樹所由實生慄中選出；⑨銀豐：北京市林果所從實生慄中選出；⑩尖項油慄：江蘇省植物所從實生慄中選出。板慄產業的市場目前主要集中於食品，即板慄果實及其相關加工食品。對於板慄植物來說，果實只是其很少的一部分，如果能夠對板慄植物的其他部分進行研發，開發其他部分的產業價值，對於板慄產業來說將產生巨大的經濟效益。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種板慄花提取物及其應用。
本發明首先保護一種板慄花提取物的製備方法，包括如下步驟：
將鮮重為1質量份的板慄花雄花和1質量份的水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到1質量份水相，即為板慄花提取物；所述板慄的品種為「燕山早豐」。
所述「收集餾出物」採用的冷卻水的溫度為20-25℃，具體可為25℃。
所述板慄花建議採用採摘24小時以內板慄花。
所述板慄花建議採用採摘7天內且一直4℃冷藏的板慄花。
以上任一所述方法製備得到的板慄花提取物也屬於本發明的保護範圍。
本發明還保護一種用於護膚的營養液，包括以上任一所述板慄花提取物。
所述營養液還包括如下成分：透明質酸鈉、1，3-丙二醇、卡波姆SF-1、D-泛醇、辛甘醇和乙基己基甘油。所述營養液中，板慄花提取物、透明質酸鈉、1，3-丙二醇、卡波姆SF-1、D-泛醇、辛甘醇和乙基己基甘油的質量配比如下：88.9：2.0：4.0：0.5：1.5：1.5：1.5。所述營養液可由板慄花提取物、透明質酸鈉、1，3-丙二醇、卡波姆SF-1、D-泛醇、辛甘醇和乙基己基甘油組成。
所述營養液還包括如下成分：透明質酸鈉、1，3-丙二醇、卡波姆SF-1、D-泛醇、辛甘醇、乙基己基甘油和香精(香精用於調整香味，可根據需要任意選取，例如玫瑰香精)。所述營養液中，板慄花提取物、透明質酸鈉、1，3-丙二醇、卡波姆SF-1、D-泛醇、辛甘醇、乙基己基甘油和香精的質量配比如下：88.9：2.0：4.0：0.5：1.5：1.5：1.5：0.1。所述營養液可由板慄花提取物、透明質酸鈉、1，3-丙二醇、卡波姆SF-1、D-泛醇、辛甘醇、乙基己基甘油和香精組成。
本發明還保護一種面膜，是在面膜基材上負載以上任一所述營養液得到的(具體來說，每片面膜基材可負載15-25ml營養液)。
在板慄雄花沒有產業價值、大量浪費的現狀下，本發明的發明人將其用於提取物製備，並通過大量工藝參數優化，得到了一種可以用作護膚品且效果良好的提取物，對於板慄產業具有非常重大的價值，具有巨大的市場空間。
具體實施方式
以下的實施例便於更好地理解本發明，但並不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重複實驗，結果取平均值。
透明質酸鈉：CAS號：9067-32-7。D-泛醇：CAS號：81-13-0。乙基己基甘油：CAS：70445-33-9。卡波姆SF-1(英文名：Carbomer SF-1)：武漢欣欣佳麗生物科技有限公司。玫瑰香精：上海依克塞汀香料有限公司。實施例中的面膜基材為惠州市美即無紡布製品有限公司，貨號為MG 813029的蠶絲隱形面膜紙。
實施例1、板慄花提取物的製備以及對照物的製備
一、板慄花提取物的製備
2016年5月底至6月初，每天上午5點至9點，從河北省遷西縣的板慄園(板慄品種為「燕山早豐」)中採集板慄花雄花。
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到300kg水相，即為板慄花提取物。收集餾出物和餾出物進行油水分離是連續銜接進行的。
進行五個批次的生產，得到的板慄花提取物依次命名為板慄花提取物Ⅰ、板慄花提取物Ⅱ、板慄花提取物Ⅲ、板慄花提取物Ⅳ和板慄花提取物Ⅴ。
二、板慄花提取物的組分解析
取步驟一製備的板慄花提取物，採用氣相色譜-質譜聯用(安捷倫SB-308)對其中的有機物進行成分解析。
將板慄花提取物Ⅰ中的有機物計作100％，其中含有如下物質(％均為質量百分含量)：
板慄花提取物Ⅱ中的有機物中、板慄花提取物Ⅲ中的有機物中、板慄花提取物Ⅳ中的有機物中和板慄花提取物Ⅴ中的有機物中，上述各個物質的含量與其在板慄花提取物Ⅰ中的有機物中的含量沒有顯著差異。
三、對照物A的製備
2016年5月底至6月初，每天上午5點至9點，從河北省遷西縣的板慄園(板慄品種為「燕山早豐」)中採集板慄花雄花。
1、對照物A-Ⅰ的製備
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和400kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到350kg水相，即為對照物A-Ⅰ。進行兩個批次的生產，得到的對照物A-Ⅰ依次命名為對照物A-Ⅰ-1、對照物A-Ⅰ-2。
2、對照物A-Ⅱ的製備
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.2Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到300kg水相，即為對照物A-Ⅱ。進行兩個批次的生產，得到的對照物A-Ⅱ依次命名為對照物A-Ⅱ-1、對照物A-Ⅱ-2。
3、對照物A-Ⅲ的製備
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下105℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到300kg水相，即為對照物A-Ⅲ。進行兩個批次的生產，得到的對照物A-Ⅲ依次命名為對照物A-Ⅲ-1、對照物A-Ⅲ-2。
4、對照物A-Ⅳ的製備
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾2個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到300kg水相，即為對照物A-Ⅳ。進行兩個批次的生產，得到的對照物A-Ⅳ依次命名為對照物A-Ⅳ-1、對照物A-Ⅳ-2。
5、對照物A-Ⅴ的製備
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到200kg水相，即為對照物A-Ⅴ。進行兩個批次的生產，得到的對照物A-Ⅴ依次命名為對照物A-Ⅴ-1、對照物A-Ⅴ-2。
6、對照物A-Ⅵ的製備
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為30℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到300kg水相，即為對照物A-Ⅵ。進行兩個批次的生產，得到的對照物A-Ⅵ依次命名為對照物A-Ⅵ-1、對照物A-Ⅵ-2。
四、對照物B的製備
2016年5月底至6月初，每天上午5點至9點，從河北省遷西縣的板慄園(板慄品種為「燕山魁慄」)中採集板慄花雄花。
將鮮重為300kg板慄花雄花(採摘24小時以內)和300kg水加入反應釜中，在蒸汽壓力0.1Mpa的條件下110℃循環蒸餾，循環蒸餾3個小時後開始持續收集餾出物(冷卻水溫度為25℃)，餾出物進行油水分離並收集水相，直至收集得到300kg水相，即為對照物B。進行兩個批次的生產，得到的對照物B依次命名為對照物B-1、對照物B-2。
實施例2、營養液的製備
將如下各個原料混合(％代表質量百分含量)：
實施例1製備的板慄花提取物：88.9％
透明質酸鈉：2.0％
1，3-丙二醇：4.0％
卡波姆SF-1：0.5％
D-泛醇：1.5％
辛甘醇：1.5％
乙基己基甘油：1.5％
玫瑰香精：0.1％。
板慄花提取物Ⅰ製備的營養液命名為營養液Ⅰ。
板慄花提取物Ⅱ製備的營養液命名為營養液Ⅱ。
板慄花提取物Ⅲ製備的營養液命名為營養液Ⅲ。
板慄花提取物Ⅳ製備的營養液命名為營養液Ⅳ。
板慄花提取物Ⅴ製備的營養液命名為營養液Ⅴ。
實施例3、面膜的製備
取面膜基材，滴加實施例2製備的營養液(每片面膜基材負載15-25ml營養液)，得到面膜。
滴加營養液Ⅰ得到的面膜命名為面膜Ⅰ。
滴加營養液Ⅱ得到的面膜命名為面膜Ⅱ。
滴加營養液Ⅲ得到的面膜命名為面膜Ⅲ。
滴加營養液Ⅳ得到的面膜命名為面膜Ⅳ。
滴加營養液Ⅴ得到的面膜命名為面膜Ⅴ。
實施例4、各個產品中有害物質的檢測
待測物為：實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ至Ⅴ、實施例2製備的營養液Ⅰ至Ⅴ或實施例3製備的面膜Ⅰ至Ⅴ。
1、按照化妝品衛生規範(2007年版)中的相關方法檢測待測物中的防腐劑含量和激素含量。結果表明，各個待測物均不含有以下各種防腐劑：甲基氯異噻唑啉酮、2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇、甲基異噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、4-羥基苯甲酸酯、苯甲酸、4-羥基苯甲酸乙酯、4-羥基苯甲酸異丙酯、4-羥基苯甲酸丙酯、4-羥基苯甲酸異丁酯、4-羥基苯甲酸丁酯。結果表明，各個待測物均不含有以下各種激素：雌酮、雌三醇、己烯雌酚、雌二醇、睪丸酮、甲基睪丸酮、黃體酮。
2、按照國食藥監許[2011]96號附件1《化妝品中丙烯醯胺的檢測方法》檢測待測物中的丙烯醯胺含量。結果表明，各個待測物均不含有丙烯醯胺。
3、按照GB/T5009.78-2003《食品包裝用原紙衛生標準的分析方法》檢測待測物中的螢光物質含量。結果表明，各個待測物均不含有螢光物質。
實施例5、板慄花提取物的效果檢測
一、試驗一
板慄花提取物指的是實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ、板慄花提取物Ⅱ、板慄花提取物Ⅲ、板慄花提取物Ⅳ或板慄花提取物Ⅴ，分別進行試驗。
1、取一個土豆，一切兩半，取半個，在橫切面中間切出一道痕跡作為分界線。
2、取步驟1的半個土豆，在分界線的一邊塗抹1ml板慄花提取物，另一邊塗抹1ml無菌水作為對照，然後用吹風機高熱風吹5分鐘，然後觀察。塗抹板慄花提取物的一邊沒有什麼變化。塗抹無菌水的一邊出現褶皺乾燥，甚至出現白色小顆粒。每個批次的板慄花提取物進行五次重複試驗，結果一致。結果表明，各個板慄花提取物均具有鎖水保溼效果。
3、取步驟1的半個土豆，在分界線的一邊塗抹1ml板慄花提取物，另一邊塗抹1ml無菌水作為對照，然後在兩邊各塗抹1ml 5％碘酒，5分鐘後觀察。塗抹無菌水的一邊被氧化，呈現紫黑色，用面巾紙不能擦拭去。塗抹板慄花提取物的一邊，呈現碘酒的棕黃色，用面巾紙可以擦拭去。每個批次的板慄花提取物進行五次重複試驗，結果一致。結果表明，各個板慄花提取物均具有抗氧化效果。
二、試驗二
在知情同意的前提下，招募1400名志願者，作為受試者。
試驗前，受試者用清水清洗雙手以及兩個前臂的內側。左前臂內側和右前臂內側各標註一個試驗區域(5×5cm)，左前臂內側的試驗區域命名為左區，右前臂內側的試驗區域命名為右區。
第一組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅰ-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第二組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅰ-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第三組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅱ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅱ-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第四組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅱ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅱ-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第五組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅲ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅲ-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第六組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅲ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅲ-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第七組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅳ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅳ-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第八組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅳ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅳ-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第九組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅴ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅴ-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第十組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅴ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅴ-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第十一組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅵ-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第十二組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物A-Ⅵ-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第十三組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物B-1，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第十四組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的對照物B-2，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
皮膚水分含量增長率＝(MMVt-MMV0)/MMV0×100％。
結果取各組左區的平均值，或取右區的平均值。
第一組中，塗抹板慄花提取物Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為40％，塗抹對照物A-Ⅰ-1的右區皮膚水分含量增長率為15％。
第二組中，塗抹板慄花提取物Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為42％，塗抹對照物A-Ⅰ-2的右區皮膚水分含量增長率為16％。
第三組中，塗抹板慄花提取物Ⅱ的左區皮膚水分含量增長率為41％，塗抹對照物A-Ⅱ-1的右區皮膚水分含量增長率為13％。
第四組中，塗抹板慄花提取物Ⅱ的左區皮膚水分含量增長率為40％，塗抹對照物A-Ⅱ-2的右區皮膚水分含量增長率為12％。
第五組中，塗抹板慄花提取物Ⅲ的左區皮膚水分含量增長率為41％，塗抹對照物A-Ⅲ-1的右區皮膚水分含量增長率為15％。
第六組中，塗抹板慄花提取物Ⅲ的左區皮膚水分含量增長率為42％，塗抹對照物A-Ⅲ-2的右區皮膚水分含量增長率為14％。
第七組中，塗抹板慄花提取物Ⅳ的左區皮膚水分含量增長率為43％，塗抹對照物A-Ⅳ-1的右區皮膚水分含量增長率為14％。
第八組中，塗抹板慄花提取物Ⅳ的左區皮膚水分含量增長率為41％，塗抹對照物A-Ⅳ-2的右區皮膚水分含量增長率為16％。
第九組中，塗抹板慄花提取物Ⅴ的左區皮膚水分含量增長率為42％，塗抹對照物A-Ⅴ-1的右區皮膚水分含量增長率為12％。
第十組中，塗抹板慄花提取物Ⅴ的左區皮膚水分含量增長率為41％，塗抹對照物A-Ⅴ-2的右區皮膚水分含量增長率為11％。
第十一組中，塗抹板慄花提取物Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為43％，塗抹對照物A-Ⅵ-1的右區皮膚水分含量增長率為13％。
第十二組中，塗抹板慄花提取物Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為42％，塗抹對照物A-Ⅵ-2的右區皮膚水分含量增長率為10％。
第十三組中，塗抹板慄花提取物Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為41％，塗抹對照物B-1的右區皮膚水分含量增長率為13％。
第十四組中，塗抹板慄花提取物Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為40％，塗抹對照物B-2的右區皮膚水分含量增長率為15％。
三、試驗三
在知情同意的前提下，招募100名志願者，作為受試者，分成五組。
第一組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第二組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例1製備的板慄花提取物Ⅱ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第三組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例1製備的板慄花提取物Ⅲ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第四組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例1製備的板慄花提取物Ⅳ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第五組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例1製備的板慄花提取物Ⅴ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
實施例6、營養液的效果檢測
一、試驗一
營養液指的是實施例2製備的營養液Ⅰ、營養液Ⅱ、營養液Ⅲ、營養液Ⅳ或營養液Ⅴ，分別進行試驗。
1、取一個土豆，一切兩半，取半個，在橫切面中間切出一道痕跡作為分界線。
2、取步驟1的半個土豆，在分界線的一邊塗抹1ml營養液，另一邊塗抹1ml無菌水作為對照，然後用吹風機高熱風吹5分鐘，然後觀察。塗抹營養液的一邊沒有什麼變化。塗抹無菌水的一邊出現褶皺乾燥，甚至出現白色小顆粒。每種營養液進行五次重複試驗，結果一致。結果表明，各個營養液均具有鎖水保溼效果。
3、取步驟1的半個土豆，在分界線的一邊塗抹1ml營養液，另一邊塗抹1ml無菌水作為對照，然後在兩邊各塗抹1ml 5％碘酒，5分鐘後觀察。塗抹無菌水的一邊被氧化，呈現紫黑色，用面巾紙不能擦拭去。塗抹營養液的一邊，呈現碘酒的棕黃色，用面巾紙可以擦拭去。每種營養液進行五次重複試驗，結果一致。結果表明，各個營養液均具有抗氧化效果。
二、試驗二
在知情同意的前提下，招募500名志願者，作為受試者。
試驗前，受試者用清水清洗雙手以及兩個前臂的內側。左前臂內側和右前臂內側各標註一個試驗區域(5×5cm)，左前臂內側的試驗區域命名為左區，右前臂內側的試驗區域命名為右區。
第一組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例2製備的營養液Ⅰ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅰ，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第二組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例2製備的營養液Ⅱ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅱ，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第三組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例2製備的營養液Ⅲ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅲ，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第四組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例2製備的營養液Ⅳ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅳ，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
第五組受試者(100例)：先用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMV0)，然後在左區塗抹1ml實施例2製備的營養液Ⅴ並且在右區塗抹1ml實施例1製備的板慄花提取物Ⅴ，30分鐘後用皮膚水分測試儀分別測量左區和右區的皮膚水分含量(MMVt)。
皮膚水分含量增長率＝(MMVt-MMV0)/MMV0×100％。
結果取各組左區的平均值，或取右區的平均值。
第一組中，塗抹營養液Ⅰ的左區皮膚水分含量增長率為48％，塗抹板慄花提取物Ⅰ的右區皮膚水分含量增長率為41％。
第二組中，塗抹營養液Ⅱ的左區皮膚水分含量增長率為49％，塗抹板慄花提取物Ⅱ的右區皮膚水分含量增長率為40％。
第三組中，塗抹營養液Ⅲ的左區皮膚水分含量增長率為48％，塗抹板慄花提取物Ⅲ的右區皮膚水分含量增長率為42％。
第四組中，塗抹營養液Ⅳ的左區皮膚水分含量增長率為47％，塗抹板慄花提取物Ⅳ的右區皮膚水分含量增長率為40％。
第五組中，塗抹營養液Ⅴ的左區皮膚水分含量增長率為49％，塗抹板慄花提取物Ⅴ的右區皮膚水分含量增長率為41％。
三、試驗三
在知情同意的前提下，招募100名志願者，作為受試者，分成五組。
第一組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例2製備的營養液Ⅰ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第二組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例2製備的營養液Ⅱ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第三組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例2製備的營養液Ⅲ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第四組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例2製備的營養液Ⅳ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第五組受試者(20例)：每天早晚潔面後使用實施例2製備的營養液Ⅴ，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
實施例7、面膜的效果檢測
在知情同意的前提下，招募100名志願者，作為受試者，分成五組。
第一組受試者(20例)：每天晚上睡前使用實施例3製備的面膜Ⅰ(貼敷面部15-20分鐘，然後用清水洗面)，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第二組受試者(20例)：每天晚上睡前使用實施例3製備的面膜Ⅱ(貼敷面部15-20分鐘，然後用清水洗面)，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第三組受試者(20例)：每天晚上睡前使用實施例3製備的面膜Ⅲ(貼敷面部15-20分鐘，然後用清水洗面)，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第四組受試者(20例)：每天晚上睡前使用實施例3製備的面膜Ⅳ(貼敷面部15-20分鐘，然後用清水洗面)，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。
第五組受試者(20例)：每天晚上睡前使用實施例3製備的面膜Ⅴ(貼敷面部15-20分鐘，然後用清水洗面)，連續使用30天，均無發生面部過敏紅腫現象，且均反映皮膚緊緻有彈性、補水修復效果明顯。