N-乙醯高絲氨酸內酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應用的製作方法
2023-05-30 16:37:16 1
專利名稱：N-乙醯高絲氨酸內酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種N-乙醯高絲氨酸內酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應 用。
背景技術：
N-乙醯高絲氨酸內酯(N-acyl homoserine lactones, AHLs)是一類廣泛存在於 革蘭氏陰性細菌中，調控群體感應(quorum-sensing)系統中的信號分子。這些信號分子是 由病原菌本身產生，可自由穿透細菌的細胞壁和細胞膜同時參與許多病原菌致病基因的表 達調控，當分子濃度達到一定閾值時，就可啟動病原菌致病基因的表達。蘇雲金芽胞桿菌 (Bacillus thuringiensis)不同亞種中廣泛存在著對AHLs分子有降解作用的非分泌性蛋 白N-乙醯高絲氨酸內酯酶(Ai iA)，這類蛋白通過水解進入胞內的AHLs分子的內酯鍵，降低 其濃度，使致病基因不能表達，從而阻止了病原菌對生物的侵染，是一類群體感應淬滅酶。內切-1，4_β-D-木聚糖酶，簡稱木聚糖酶，能夠隨機的切割木聚糖主鏈骨架的 β-1，4-糖苷鍵，其水解產物主要是木二糖和木寡糖，以及少量的木糖和阿拉伯糖。木聚糖 酶作為環保型飼料添加劑廣泛應用於畜牧業，具有改善畜禽消化道功能，降低食糜粘度和 抗營養性，提高飼料利用率和減少環境汙染等特點。
發明內容
本發明的目的是提供一種N-乙醯高絲氨酸內酯酶_木聚糖酶融合蛋白及其編碼 基因和應用。本發明提供的蛋白質，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的胺基酸序列組成的蛋白質；(b)將序列1的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或 添加且同時具有N-乙醯高絲氨酸內酯酶與木聚糖酶活性的由序列1衍生的蛋白質。為了使(a)中的蛋白質便於純化，可在由序列表中序列1所示的胺基酸序列組成 的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標籤。表1標籤的序列
權利要求
一種蛋白質，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的胺基酸序列組成的蛋白質；(b)將序列1的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且同時具有N 乙醯高絲氨酸內酯酶與木聚糖酶活性的的由序列1衍生的蛋白質。
2.編碼權利要求1所述蛋白的基因。
3.如權利要求2所述的基因，其特徵在於它為如下1)或2)或3)或4)的DNA分子1)序列表中序列2自5，末端第10至1677位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列2所示的DNA分子；3)在嚴格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交且同時具有N-乙醯高絲氨酸內酯酶 與木聚糖酶活性的的DNA分子；4)與1)或2)或限定的DNA序列具有90%以上同源性，且同時具有N-乙醯高絲氨酸 內酯酶與木聚糖酶活性的DNA分子。
4.含有權利要求2或3所述基因的重組表達載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
5.如權利要求4所述的重組表達載體，其特徵在於所述重組表達載體為將權利要求2 或3所述基因插入pPIC9的多克隆位點得到的重組質粒。
6.如權利要求4所述的重組菌，其特徵在於所述重組菌為將權利要求4或5所述重 組表達載體導入宿主菌得到的重組菌；所述宿主菌為大腸桿菌或酵母菌；所述酵母菌優選 為畢赤酵母。
7.如權利要求6所述的重組菌，其特徵在於所述重組菌為巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)XynAS27-L2-AiiAB546(SL2B)，其保藏號為 CGMCC No. 3974。
8.生產權利要求1所述蛋白質的方法，是發酵培養權利要求4或6所述的重組菌，得到 權利要求1所述蛋白質。
9.權利要求1所述蛋白、權利要求2或3所述基因、權利要求4至6中任一所述的重組 表達載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌在製備飼料添加劑中的應用。
10.一種飼料添加劑，它的活性成分為權利要求1所述蛋白。
全文摘要
本發明公開了N-乙醯高絲氨酸內酯酶-木聚糖酶融合蛋白及其編碼基因和應用。本發明提供的蛋白質是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的胺基酸序列組成的蛋白質；(b)將序列1的胺基酸序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與序列1所示蛋白具有相同功能的由序列1衍生的蛋白質。本發明將具有淬滅酶活性的N-乙醯高絲氨酸內酯酶基因與木聚糖酶基因融合，得到了融合蛋白(N-乙醯高絲氨酸內酯酶-木聚糖酶融合蛋白)SL2B-6。本發明提供的融合蛋白具有適宜的作用pH值，較強的金屬離子和表面活性劑抗性，較強的蛋白酶抗性和較好的水解各種底物的能力，可作為一種新型飼料或食品添加劑應用於飼料與食品行業。
文檔編號C12N9/00GK101948818SQ20101025145
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月11日 優先權日2010年8月11日
發明者何夙旭, 劉玉春, 周志剛, 姚斌, 孟昆, 張美超, 曹雅男, 楊培龍 申請人:中國農業科學院飼料研究所