一種改良保存菌種的方法
2023-06-07 22:20:56
專利名稱：一種改良保存菌種的方法
技術領域：
本發明涉及一種液體菌種的保存方法。
背景技術：
微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處於最不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。低溫、乾燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以菌種保藏方法雖多，都是根據這三個因素而設計的。保藏方法大致可分為以下幾種: 1.傳代培養保藏法 又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等(後者作保藏厭氧細菌用)， 培養後於4一 6 V冰箱內保存。
2.液體石蠟覆蓋保藏法 是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。
3.載體保藏法 是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、矽膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。
4.寄主保藏法 用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染並傳代，此法相當於一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍乾燥保藏法進行保藏。
5.冷凍保藏法 可分低溫冰箱(-20—-30 V，-50一-80 °C )、乾冰酒精快速凍結(約-70 V )和液氮(_196°C)等保藏法。
6.冷凍乾燥保藏法 先使微生物在極低溫度(_70°C左右)下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分(真空乾燥)。
有些方法如濾紙保藏`法、液氮保藏法和冷凍乾燥保藏法等均需使用保護劑來製備細胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。保護性溶質可通過氫和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型。保護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞諷等。
對於試驗室來說，經常採用的是冷凍保存法，但是目前一般只加入一定比例的甘油或二甲基葉楓作為保護劑，混合菌液後直接放入-20°C冰箱。發明內容
本發明的目的是提供一種簡便、保存時間長的液體菌種的保存方法。
本發明所提供的液體菌種的保存方法是將菌種與甘油、二甲基亞碸以合適比例混合，放進小泡沫盒裡，再放入-20°C冰箱凍存。
甘油菌低溫保存的基本原理是:在_70°C或液氮中凍存，細菌內的酶活性均已停止，即代謝處於完全停止狀態，故可以長期保存。在(TC——70°C溫度範圍內，水晶呈針狀，極易招致細菌的嚴重損傷。用電鏡觀察，可見細菌的核膜上有大量針尖樣小孔。因此，為了避免0°C--70°C冰晶的形成和細菌膜兩側離子平衡的破壞，需要加保護劑。甘油可降低冰點，在緩慢的凍結條件下，能使細菌內水分在凍結前透出細菌外。甘油對細菌無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細菌。
DMSO作用跟甘油類似，也是一種滲透性保護劑，能夠降低細胞冰點，減少冰晶的形成，減輕自由基對細胞損害，改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝產物的通透性，但效果比甘油好，0.5mol/L左右的二甲基亞碸可以透過細胞，並通過降低強烈的脫水作用而保護細胞。主要是因為加入後可以使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內的水分透出，減少了冰晶的形成，從而避免細胞的損傷。採用慢凍快融的方法能較好地保證細胞存活。DMSO比甘油相比，另一個優點就是不粘稠。
具體實施方式
本發明中詳細的保種步驟如下: 1、取一定濃度的甘油和二甲基亞碸作為防凍劑，高壓滅菌； 2、加入適量菌液，混勻； 3、放入泡沫盒，-20°C冰箱凍存。
下面結合具體實例進一步說明本發明。
實施例1 1、製備保護劑， 甘油濃度30%，二甲基亞碸濃度為15%，高壓滅菌； 2、吸取0.5ml保護劑於凍存管內，再加入0.5ml菌液，使得甘油的終濃度為15%，二甲基亞碸的終濃度為7.5% ； 3、混勻，放入小泡沫盒，於_20°C冰箱凍存。
上述保存方法保存的菌種，於_20°C凍存一年半以後，接種培養基，經37°C培養18h，能長出菌落。
權利要求
1.本發明公開一種改良的菌種保存方法。
2.本發明所提供的菌種保存方法，是將菌種保存在一定比例的甘油、二甲基亞碸和肉湯內，將凍存管放入泡沫盒內再放入冰箱進行凍存。
3.經冷凍保存的液體菌種經解凍活化，接種固體培養基後能正常萌發。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於:以甘油和二甲基亞碸作為保護劑。
5.根據權利要求1所 述的方法，其特徵在於:以泡沫盒作為恆定降溫的設備。
全文摘要
本發明公開一種改良的菌種保存方法。本發明所提供的菌種保存方法，是將菌種保存在一定比例的甘油、二甲基亞碸和肉湯內，將凍存管放入泡沫盒內再放入冰箱進行凍存。經冷凍保存的液體菌種經解凍活化，接種固體培養基後能正常萌發。本發明改良的菌種保存方法簡便易行，成本低，效益高，對菌種的前期培養條件沒有附加要求，凡是以液體培養方式得到的菌種均可以用本發明的方法保存，在實際生產中容易推廣使用。
文檔編號C12N1/20GK103103123SQ20111036052
公開日2013年5月15日 申請日期2011年11月15日 優先權日2011年11月15日
發明者沈巍 申請人:青島康地恩藥業股份有限公司