一種草莓種苗組織培養快繁技術的製作方法
2023-05-28 19:36:16
一種草莓種苗組織培養快繁技術的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種草莓脫毒組培快繁技術，屬於農業生物工程【技術領域】。包括如下步驟：取草莓的匍匐莖尖為外植體，經誘導增殖、繼代培養、生根培養、移栽馴化等步驟，快速繁殖脫毒組培苗。本發明通過調節培養基的配方，利用莖尖生長點誘導培養，達到不經愈傷組織生長階段直接誘導出芽，防治了種性變異，接種操作容易；取材時間科學，接種汙染率低、成活率高；脫毒簡便、快捷、徹底；繁殖係數達5～8倍，速度快，成本低，實用性強等特點，適合工廠化育苗，可商品化生產。
【專利說明】一種草莓種苗組織培養快繁技術
【技術領域】
[0001]本發明涉及農業生物工程【技術領域】，特別是涉及一種草莓種苗脫毒組培快繁技術。
【背景技術】
[0002]我國是一個農業大國，果樹種植髮展迅速，尤其草莓生產面積逐年增加。丹東市是全國最大的草莓生產基地，草莓生產技術總體水平在國內處於領先地位，但總體單位生產效益還遠不如發達國家高，與全國一樣屬帶毒生產。有史以來，栽培草莓一直採用埋壓匍匐莖或分株等營養途徑繁殖苗木，造成多種病毒病的感染率很高，植株對病毒沒有免疫能力，到目前國內外又沒有特效藥劑或其他有效方法治癒草莓的病毒病，感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓長勢弱、抗性差、產量明顯下降，果品品質與商品性狀變劣，嚴重影響了這一名特優種植業的穩步發展。利用組培生物技術進行莖尖培養脫毒苗是最經濟最有效的途徑，輔之配套快繁技術可以滿足生產上對草莓優質種苗的需要。為此我們經過十幾年科技攻關，研發出草莓莖尖組培快繁技術，很好的解決了目前草莓脫毒技術繁瑣、成本高、變異率大、繁殖慢，苗木短缺等問題，推廣應用前景廣闊、經濟效益高。
【發明內容】
[0003](一)要解決的技術問題
[0004]本發明要解決培養基配方、取材、外植體體滅菌、誘導增殖、生根培養、移栽馴化等關鍵技術，以達到安 全快速繁殖優良草莓脫毒組培苗的目的。
[0005](二)技術方案
[0006]為了解決上述技術問題，東港市草莓研究所科技人員借鑑國內外專家研究成果，組建標準化組織培養試驗室與生產工廠，對草莓莖尖分生組織培養快繁技術進行了研究，發現了草莓種苗組織培養快繁技術。
[0007]本發明提供了:
[0008]1.一種草莓種苗組織培養快繁方法，該方法包括以下步驟:
[0009](I)取材與清洗:選取第一片葉原基剛展開的匍匐莖的莖尖，掐取前端約3_4cm，放在漏筐裡用自然水衝洗乾淨；
[0010](2)殺菌消毒:先將衝洗後的莖尖用75%的酒精浸泡2-5min，倒出酒精後，用0.1%的氯化汞溶液浸泡5-30min，然後用無菌水衝洗2_3次；
[0011](3)芽的誘導與增殖:將殺菌消毒處理後的莖尖，用尖鑷子剝葉，露出生長點，用刀切取0.2-0.5mm，放到由MS和0.3-0.5mg/l的6BA構成的誘導培養基中進行初代培養；
[0012](4)繼代培養:將誘導出的叢生芽接到基由MS、0.2-0.4mg/l的6BA以及0.01mg/I的IBA構成的增殖培養中進行繼代培養；
[0013](5)生根培養:用由MS,0.1-0.2mg/l的6BA以及0.1-0.2mg/l的IBA構成的生根培養基培養繼代苗20-30d後，得到生根苗；[0014](6)移栽馴化:將生根苗取出後，洗淨其根部培養基，扦插到溫室裡裝有基質的穴盤中馴化。
[0015]2.根據I所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(3)中，在溫度為25°C、光照2000-30001x、日光照時長12h下進行初代培養，培養時間為40_60d。
[0016]3.根據I所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(4)中，在溫度為25°C、光照2000-30001x、日光照時長12h下進行繼代培養，培養時間為20_30d。
[0017]4.根據I所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(4)中，基質使用棉隆土壤消毒劑進行殺菌消毒處理。[0018]5.根據I所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(4)中，扦插後，保持相對溼度為80%以上，馴化溫度控制在5°C _20°C，待瓶苗長出3-5片心葉後，馴化完成。
[0019](三)有益效果
[0020]上述技術包括取材；殺菌消毒；芽的誘導與增殖；繼代培養(增殖培養);生根培養；移栽馴化等步驟。本發明的創新點在於:1、創新改良MS培養基配方，使用最佳增殖培養基激素水平，防止激素過高帶來的玻璃化苗或變異苗，減少損失。2、以匍匐莖尖為外植體，具有取材方便，病毒少，接種有效率高，遺傳性穩定等特點。3、材料用自然水簡單衝洗乾淨即可，打破理論上的長時間衝洗，極大減少時間與資源的浪費4、取材時間限定在10月以後至翌年5月份，能有效降低外植體接種汙染率，大大提高成活率，極大地降低成本。5、培養基的製作以自然水取代蒸餾水，以食用白糖取代純蔗糖大大節約生產成本。6、改進組培程序，省略專制生根培養基專門瓶內生根環節，採取調整增殖激素，邊增殖邊生根的方法，減少組培的綜合生產成本。6、研製應用新型扦插基質，首創提高草莓扦插苗生根成活率技術。7、扦插基質中化學消毒劑隆鑫的使用，能大大降低扦插苗病蟲草害的發生，大大降低了生產成本與勞動成本。
【具體實施方式】
[0021]根據本發明的草莓種苗組織培養快繁方法，該方法步驟如下:
[0022](I)取材與清洗:選取匍匐莖尖。取材時間一般在每年的5月中旬前10月以後。6-9月間匍匐莖大量發生，取材容易，但此時逢高溫高溼季節，材料帶菌多，殺菌不徹底，外植體接種容易汙染，成活率低。選取保護地或露地草莓生產田塊中品種純正母株上的匍匐莖尖(大小為第一片葉原基剛展開)，從距匍匐莖尖以下3-4cm處掐取，放在漏筐裡用自然水衝洗乾淨。試驗證明:1-4月間從溫室生產田取來紅顏草莓的匍匐莖，即使不經自然水衝洗，接種可能零汙染；7_8月間露地紅顏匍匐莖，自然水衝洗時間再長，接種汙染率有時仍會高達90%以上。(2)殺菌消毒:先將衝洗好的莖尖用75%的酒精進行消毒，時間一般為2-5min(依材料粗嫩度及選取季節靈活掌握)。倒出酒精後，用0.1%的氯化汞(HgcI2)溶液浸泡5-30min(依材料嫩粗度及選取季節靈活掌握)。將氯化汞倒出，用無菌水衝洗2-3遍。(3 )芽的誘導與增殖:將處理後的無菌材料，用尖鑷子剝葉，露出生長點，用刀切取0.2-0.5mm，放到誘導培養基MS+6BA(6-苄胺基腺嘌呤)0.3-0.5mg/l中進行初代培養。MS培養基配方由大量元素:硝酸鉀、硝酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈣；微量元素:硼酸、硫酸猛、硫酸鋅、鑰酸鈉、硫酸銅、氯化鈷、乙二胺四乙酸二鈉、硫酸亞鐵；有機成分:肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、糖、瓊脂等構成。培養室溫度一般25°C，光照2000-30001X，每日光照12h，誘導時間大約為40-60d。將紅顏莖尖生長點分別接種到MS+6BA0.3mg/l ；MS+6BA0.4mg/l ；MS+6BA0.5mg/l培養基中，培養50d後每個接點誘導出的叢生芽數會分別增至3_5倍；5_7倍；8-10倍。(4)繼代培養(增殖培養):將誘導出的叢生芽接到增殖培養基MS+6BA (6-苄胺基腺嘌呤)0.2-0.4mg/l+IBA (吲哚丁酸)0.01mg/l中進行繼代培養。溫度、光照和其它管理如初代培養一樣，一般30d左右可以繼代分瓶一次，根據品種數量確定擴繁次數。要控制激素量不易過大，繼代次不能過多。將紅顏叢生芽繼代到MS+6BA0.2mg/l ；MS+6BA0.3mg/I ;MS+6BA0.4mg/l培養基中，增殖係數會達到3倍、5倍、8倍。(5)生根培養:為促進繼代苗生根，要調整增殖培養基激素含量。用MS+6BA (6-苄胺基腺嘌呤)0.1-0.2mg/l+IBA (吲哚丁酸)0.1-0.2mg/l培養繼代苗，大約20-30d後，將生根大苗(高約5cm)取出來扦插，小苗繼續培養，邊擴繁邊生根。(6)移栽馴化:將生根後的瓶苗取出後，洗淨其根部培養基，扦插到溫室裡裝有基質的穴盤中馴化。基質選用病菌含量少的山皮土加草炭土同時用棉隆土壤消毒劑進行殺菌消毒處理，然後過篩，裝盤鋪平，澆透水。扦插後，用小眼噴壺澆水，起拱，覆蓋塑料薄膜。前一周保持相對溼度80%以上，2周後可撤掉小拱膜，馴化溫度最低應控制在50C _25°C，穴盤土保持溼潤，注意防蟲防病及時拔出雜草。待瓶苗長出3-5片心葉後，原原種苗就馴化好了，可以移栽了。
[0023]本發明的草莓種苗組織培養快繁方法，使東港市草莓研究所優質組培苗真正走出試驗室，實現大規模工廠化生產。目前年可生產銷售優質脫毒組培苗2000-3000萬株。按此技術方案生產的草莓脫毒組培原原種苗，從取材、接點大小、激素用量、繼代次數等方面避免或控制變異出現，保證了品種的純度。草莓研究所生產的草莓原種苗，田間生產栽培過程中從未出現類似「鬼果」或「花而不實」等變異現象。生根及馴化培養技術的改良創新，解決了東港地區冬季陰雪寡照天數多，馴化溫室氣溫低，瓶苗成活慢，易感病的難題，大大提高了瓶苗馴化成活率(90%以上)且保證原原種苗生產質量標準。以莖尖組織培養獲得脫毒苗較常規苗(未經組培脫毒)有明顯的生長優勢及增產效果。不同品種的草莓脫毒苗比對照能增加植株的生長量，植株株高增加7.1%-32.8%，葉面積增大3.2%-54.9%,匍匐莖數量增多18.4%-89.6% ;更能提高植株的產、質量，其中增加產量達15.8%_45.1%，結果數多
9.2%-18.8%，單果重增加 0.87%-26.3%，成熟果實的可溶性固形物含量提高3.9-8.5%。
[0024]草莓研究所對紅顏草莓脫毒苗與常規苗(對照)連續進行三年(2000、2001、2002)溫室生產對比試驗與草莓原種場大田繁苗試驗，結果顯示，脫毒苗比常規苗株高增加24.7% ;葉面積增加26.2% ;單果重增加29.1% ;果實產量增加32.5% ;果實可溶性固形物含量增加9.3% ;繁殖係數提高30.9%。可見草莓組培脫毒苗比常規苗農藝性狀改良，經濟性狀優良，繁殖力強，增產增效明顯。
[0025]由於組培生產能脫去種苗病毒，恢復和提高品種優良種性，種苗生長健壯，抗病性、抗逆性增強，育苗及生產過程中可避免或減少農藥使用，有利於生產無公害、綠色及有機草莓，果品質量好，商品價值高，增產增效顯著。草莓種苗組織培養快繁技術的創新應用保證了東港乃至全國草莓產業的健康、高效、快速發展，經濟與社會效益十分突出。
【權利要求】
1.一種草莓種苗組織培養快繁方法，該方法包括以下步驟: (O取材與清洗:選取第一片葉原基剛展開的匍匐莖的莖尖，掐取前端約3-4cm，放在漏筐裡用自然水衝洗乾淨； (2)殺菌消毒:先將衝洗後的莖尖用75%的酒精浸泡2-5min，倒出酒精後，用0.1%的氯化汞溶液浸泡5-30min，然後用無菌水衝洗2_3次； (3)芽的誘導與增殖:將殺菌消毒處理後的莖尖，用尖鑷子剝葉，露出生長點，用刀切取0.2-0.5mm，放到由MS和0.3-0.5mg/l的6BA構成的誘導培養基中進行初代培養； (4)繼代培養:將誘導出的叢生芽接到基由MS、0.2-0.4mg/l的6BA以及0.0Img/1的IBA構成的增殖培養中進行繼代培養； (5)生根培養:用由MS,0.1-0.2mg/l的6BA以及0.1-0.2mg/l的IBA構成的生根培養基培養繼代苗20-30d後，得到生根苗； (6)移栽馴化:將生根苗取出後，洗淨其根部培養基，扦插到溫室裡裝有基質的穴盤中馴化。
2.根據權利要求1所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(3)中，在溫度為25°C、光照2000-30001x、日光照時長12h下進行初代培養，培養時間為40_60d。
3.根據權利要求1所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(4)中，在溫度為25°C、光照2000-30001x、日光照時長12h下進行繼代培養，培養時間為20_30d。
4.根據權利要求1所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(4)中，基質使用棉隆土壤消毒劑進行殺菌消毒處理。`
5.根據權利要求1所述的草莓種苗組織培養快繁方法，其中，在步驟(4)中，扦插後，保持相對溼度為80%以上，馴化溫度控制在5°C _20°C，待瓶苗長出3-5片心葉後，馴化完成。
【文檔編號】A01H4/00GK103858758SQ201210536299
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月12日 優先權日:2012年12月12日
【發明者】黃日靜, 王春花, 姜兆彤, 史功成, 張敬強, 刁玉峰, 孫靜, 紀宏宇, 杜宇斌, 朱秀珍, 谷旭琳, 佟傑, 郭文普 申請人:東港市草莓研究所