一種檢測環孢素a血藥濃度的方法
2023-06-10 23:42:21 1
專利名稱：一種檢測環孢素a血藥濃度的方法
技術領域：
本發明屬於檢測環孢素A領域，特別涉及一種檢測環孢素A血藥濃度的方法。
背景技術：
環孢素A(CyCl0Sprine，CsA)是由11個胺基酸組成的環狀多肽，是土壤中一種真 菌的活性代謝物。1978年英國首次將CsA應用於臨床腎移植，此後CsA又用於肝、心、肺、 胰腺、骨髓等器官的移植，均取得令人滿意的效果，明顯提高病人的生存率。1984年環孢素 A進入我國，形成了"環孢素A+硫唑嘌呤+激素"的三聯免疫抑制方案，大大提高了移植 存活率，同時也使移植術後急性排斥反應的發生率大幅下降。CsA作為一種強效免疫抑制 劑，近年來人們對它的研究越來越多，發現它還可用來治療自身免疫性疾病、血液病及寄生 蟲病等。環孢索A 口服吸收不完全，用藥時間長，藥動學參數個體差異大，有效治療濃度範 圍狹窄。而且CsA血藥濃度水平易受藥物相互作用、肝胃腸功能、紅細胞含量、服藥方法、術 後時間、性別、年齡以及飲食等眾多因素的影響。其血藥濃度過低時易引起排斥反應或誘發 自身免疫性疾病，過高時對肝、腎及中樞神經系統均有一定毒性。因此，臨床上必須定期監 測其血藥濃度，調整給藥劑量，以充分發揮藥效，減輕不良反應。測定CsA血藥濃度一般取谷值為參考值，即早晨服藥前取血所測定的值。採用熒 光偏振免疫測定的治療範圍腎移植術後1個月內為300ng/ml左右，1 3個月內為250 300ng/ml，3 6個月內為250ng/ml左右，6 12個月內200 250ng/ml，12個月以後維 持在200ng/ml左右。需要說明的是CsA個體差異非常大。有些患者CsA的濃度不高，卻發生中毒；有 些患者CsA濃度在治療範圍之內卻發生排斥反應，即使同一患者，在術後的不同時間，相同 的血藥濃度卻會產生不同的結果。所以CsA的有效濃度的制定必須個體化，必需在專科醫 生的指導下進行。目前，國內外最常用的測定方法主要包括高效液相色譜法(HPLC)、高效液相質譜 聯用法(HPLC/MS)、高效毛細管電泳法(HPCE)、受體結合法(RBA)、螢光偏振免疫法(FPIA)、 放射免疫法(RIA)、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)等。其中以HPLC法和FPIA法應用最為廣 泛。Luminex xMAP技術，又稱流式螢光技術，又稱懸浮陣列、液態晶片，該技術的核心 是把直徑為5. 6um的聚苯乙烯小球用螢光染色的方法進行編碼，通過調節兩種螢光染料的 不同配比獲得最多可達100種具有不同特徵螢光譜的微球，然後將每種編碼微球共價交聯 上針對特定檢測物的抗原、抗體或核酸探針等捕獲分子。應用時，先把針對不同檢測物的編 碼微球混合，再加入微量待檢樣本，在懸液中靶分子與微球表面交聯的捕獲分子發生特異 性結合，在一個反應孔內可以同時完成多達100種不同的檢測反應。最後用LuminexTM100 進行分析，儀器通過兩束雷射分別識別微球的編碼和檢測微球上報告分子的螢光強度。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，該方法操 作簡單，測定速度快，樣品用量少，成本低，靈敏度以及線性範圍比ELISA法更高更寬，具有 良好的應用前景。本發明的一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，包括在磁珠表面耦聯上環孢素A單克隆抗體，在樣品孔中加入經抗凝稀釋的血漿樣品 以及環孢素A生物素，經過洗脫加入螢光素標記親合素，在激發光激發下測定螢光強度，即 得環孢素A血藥濃度。所述抗凝所用抗凝劑為乙二胺四乙酸，稀釋倍數為4 6倍。所述環孢素A生物素的結構式為
權利要求
1.一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，包括在磁珠表面耦聯上環孢素A單克隆抗體，在樣品孔中加入經抗凝稀釋的血漿樣品以及 環孢素A生物素，經過洗脫加入螢光素標記親合素，在激發光激發下測定螢光強度，即得環 孢素A血藥濃度。
2.根據權利要求1所述的一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，其特徵在於所述抗凝 所用抗凝劑為乙二胺四乙酸，稀釋倍數為4 6倍。
3.根據權利要求1所述的一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，其特徵在於所述螢光 素為PE。
4.根據權利要求1所述的一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，其特徵在於所述激發 光波長為530nm。
全文摘要
本發明涉及一種檢測環孢素A血藥濃度的方法，包括在磁珠表面耦聯上環孢素A單克隆抗體，在樣品孔中加入經抗凝稀釋的血漿樣品以及環孢素A生物素，經過洗脫加入螢光素標記親合素，在激發光激發下測定螢光強度，即得環孢素A血藥濃度。本發明操作簡單，測定速度快，樣品用量少，成本低，靈敏度以及線性範圍比ELISA法更高更寬，具有良好的應用前景。
文檔編號G01N33/543GK102095876SQ20111004747
公開日2011年6月15日 申請日期2011年2月28日 優先權日2011年2月28日
發明者孫慶莉 申請人:上海健耕醫藥科技有限公司