一種單克隆抗體的凍幹製劑的製作方法

2023-06-10 21:18:11

專利名稱：：一種單克隆抗體的凍幹製劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種抗-EGFR單克隆抗體的凍幹製劑。
背景技術：
：表皮生長因子受體(印ider腿lgrowthfactorrec印tor，EGFR)突變、失調或過表達於許多上皮惡性腫瘤，在腫瘤的生長和分化過程中起重要作用。抗EGFR的單克隆抗體是針對於胞外域EFGR的靶向性抗體，臨床應用顯示了良好的抗腫瘤活性，而且並不產生嚴重副反應。而抗-EGFR單克隆抗體抗癌原理正基於此。現有的抗-EGFR抗體製劑專利德國S馬瑟斯和H-C馬勒通過沉澱試劑和晶體得到抗-EGFR抗體的固體形式製劑(申請號/專利號200480034587)。其缺點沉澱試劑得到的蛋白有時無法復溶。默克專利有限公司的H-C馬勒；R米勒；；U馬丁尼_馬爾；U哈斯；C巴赫曼發明包含兩妥昔單抗(Cetuximab)的穩定的液體藥物製劑(申請號02814105.9)，所述Cetuximab是一種抗表皮生長因子受體(EGF受體)的嵌合單克隆抗體。所述製劑的貯藏穩定性增強並且可經胃腸外途徑用於治療腫瘤。但此配方是液體製劑，長時間貯存容易發生蛋白聚集和其他化學反應，不利於運輸和貯存。S*馬瑟斯和H-O馬勒又通過超濾製備抗-EGFR抗體的高濃縮液體，發明了抗-EGFR抗體液體製劑的方法(申請號/專利號200580004883)。這項發明很大程度緩解了以往因蛋白藥物濃度低，但是也有不足之處，首先以液體製劑的形式存在的蛋白，更容易發生理化反應，比如發生脫醯胺反應、被其他物質氧化或水解，其次當蛋白在水溶液中濃度過高時容易聚集，注入人體後易產生免疫反應。更重要的是，液體製劑在長途運輸中，劇烈震蕩會使蛋白質容易變性，大去活性。
發明內容抗EGFR-單克隆抗體包括鼠源的、人鼠嵌合的、完全人源化的抗EGFR-單克隆抗體。本發明製劑配方簡單，蛋白體系穩定。凍幹得到的製劑，蛋白穩定性更高，便於大規模生產，貯存和運輸。凍幹蛋白經復溶後蛋白理化性質及活性沒有顯著變化，並且不存在藥理上不可接受的試劑，從而具有良好的安全性和耐受性。本發明是一種含有抗EGFR-單克隆抗體的凍幹製劑，製劑的組成包括抗EGFR-單克隆抗體、賦形劑、保護劑、緩衝鹽。抗EGFR-單克隆抗體凍幹製劑復溶後抗體蛋白含量為2-1OOmg/mL，更優選為25-75mg/mL。這種高濃度的蛋白製劑可以大大減輕患者用藥注射量大的痛苦。在賦形劑的幫助下抗EGFR-抗體更容易賦形凍幹保存。賦形劑為糖類、多醇類，更優選為甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。賦形劑在製劑中的含量為0-20%，更優選為2-10%。本發明選擇的保護劑為胺基酸、糖類、醇類、吐溫。更優選為吐溫、精氨酸、山梨醇。保護劑在凍幹製劑經注射用水復溶後的含量為10mmol/L-200mmol/L，更優選為50-100,l/L。本發明選擇的凍幹製劑緩衝鹽為磷酸鹽緩衝體系、Tris緩衝體系以及人體可接受的緩衝鹽。凍幹製劑經注射用水復溶後緩衝鹽濃度為0-200mmol/L，更優選為5mmo1/L-50mmol/L，pH在6.5-8.0之間，優選為6.8-7.4。製劑凍幹過程包括預凍，抽真空和循環冷凍2步。預凍時間不少於1.5小時，更有選4-8小時。抽真空和循環冷凍是同時進行，程序化步驟，循環冷凍不少於15小時。具體實施例方式以下通過實施例、實驗例詳細說明本發明的內容，但這些實施例並不構成對本發明的限制。實施例1:水針對比溶液實施例2:溶液Atableseeoriginaldocumentpage4tableseeoriginaldocumentpage5實施例4:凍幹將溶液A、溶液B按照以下程序凍幹預凍-50°C，5小時。循環冷凍從-5(rC程序性升溫到30°C，共20小時，真空度70bar。在凍幹期間，可使用參氣來達到溫度均勻的目的。也可以更長時間進行循環冷凍而不會影響產品的質量。實施例5:穩定性考察，採用藥品加速穩定性實驗考察以上3種配方的貯存穩定性，溫度25°C。檢測方法純度檢測高效液相色譜法，柱子用TSK3000SW^流動相20mmo1磷酸鹽緩衝液50.4mol/LNa2S04。等電點根據《中國藥典》2005年版等點聚焦電泳法。內毒素檢測根據《中國藥典》2005年版細菌內毒素檢測方法。外觀根據《中國藥典》2005年版可見異物檢查法。活性根據A418檢測方法以市售愛必妥(默克公司)做為對照品。設定其活性為100%，水針對比溶液、溶液A、溶液B採用與其活性的比較值。加速穩定性實驗結果(25°C)tableseeoriginaldocumentpage6根據穩定性試驗結果表明凍幹製劑的貯存穩定性明顯優於液體製劑。權利要求一種含有抗EGFR-抗體的凍幹製劑，其特徵是製劑的組成部分含有抗EGFR-抗體、賦形劑、保護劑、緩衝鹽。2.根據權利要求l，其特徵在於抗EGFR-抗體凍幹製劑復溶後含量為2-100mg/mL，更優選為25-75mg/mL。3.根據權利要求1，其特徵在於賦形劑為糖類、多醇類，更優選為甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。4.根據權利要求3，其特徵在於賦形劑在製劑中的含量為0-20%，更優選為2-10%。5.根據權利要求1，其特徵在於保護劑為胺基酸、糖類、醇類、吐溫。更優選為吐溫、精氨酸、山梨醇。6.根據權利要求5，保護劑在凍幹製劑經注射用水復溶後的含量為10mM/L-200mM/L，更優選為50-100mM/L。7.根據權利要求l，其特徵在於凍幹製劑緩衝鹽為人體可接受的緩衝鹽，更優選磷酸鹽緩衝體系，凍幹製劑經注射用水復溶後緩衝鹽濃度為0-200mM/L，更優選為5mM/L-50mM/L，pH在6.5-8.0之間。8.根據權利要求1，其特徵在於表面活性劑為吐溫類，更優選吐溫80，9.根據權利要求8，其特徵在於凍幹製劑經注射用水復溶後表面活性劑濃度為0.001%-0.05%，更優選0.001%-0.01%。10.根據權利要求9，其特徵在於預凍時間不少於1.5小時，更有選4-8小時。11.根據權利要求9，其特徵在於抽真空和循環冷凍是同時進行，程序化步驟，循環冷凍不少於15小時。全文摘要本發明提供了抗EGFR-抗體的凍幹製劑的製備方法。所述抗EGFR-抗體的凍幹製劑是由抗EGFR-抗體蛋白，保護劑，賦型劑，緩衝鹽經過凍幹製備而成，是一種新的高濃度的EGFR-抗體的凍幹製劑。本發明提供的抗EGFR-抗體蛋白凍幹製劑穩定性好，有效期延長，易於保存和運輸。文檔編號A61P35/00GK101716343SQ200810137278公開日2010年6月2日申請日期2008年10月9日優先權日2008年10月9日發明者冷國慶,劉高波,李會成,李鄭武,李金花,趙華南,陳玉軍,高晶申請人:哈藥集團生物工程有限公司